文冠果叶黄酮对巨噬细胞RAW264.7细胞因子及TLR2受体的影响

通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子的介导作用。结果表明:当XLF质量浓度为320μg/mL时,巨噬细胞RAW 264.7分泌的NO、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)细胞因子最多,且与空白对照差异极显著,但都小于脂多糖(LPS);且与未加入TLR2抗体相比,加入了TLR2抗体的巨噬细胞减少了各细胞因子的分泌,且差异均极显著。XLF可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,并且可能通过TLR2受体介导。

广叶绣球菌中性多糖对巨噬细胞RAW 264.7细胞因子及TLR2受体的影响

真菌多糖主要通过TLRs受体介导吞噬细胞分泌细胞因子而进行免疫调节作用,为探究广叶绣球菌中性多糖(SNP)对巨噬细胞RAW 264.7细胞因子的分泌及TLR2受体是否介导此作用,首先采用传统水提法,经HZ-830大孔树脂、DEAE-52和Sepharose CL-6B柱分离纯化后得到SNP,利用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)测定SNP分子质量,利用离子色谱法(IC)和傅里叶红外色谱法(FT-IR)分析单糖组成和结构表征;然后通过MTT比色法分析SNP对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,以SNP最佳浓度作用,通过酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;最后通过SNP处理TLR2抗体作用的吞噬细胞,分析TLR2受体是否对SNP调节巨噬细胞RAW 264.7细胞因子的分泌具有介导作用。结果表明,SNP分子质量为3.2×10;u,由摩尔比为6∶12∶63∶10∶5的阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖组成,不含呋喃糖;一定浓度范围内的SNP能显著促进RAW 264.7的增殖,其最佳作用质量浓度为250μg/mL;此浓度下,RAW 264.7的NO、IL-6、TNF-α、IFN-β细胞因子的分泌量最高,与空白对照差异极显著,但均低于脂多糖(LPS)的作用;而加入TLR2抗体后,SNP组巨噬细胞RAW 264.7的上述各细胞因子的分泌量相较未加TLR2抗体组均降低,但除IL-6细胞因子外差异均不显著。由此可见,SNP可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,但不是通过TLR2受体介导。

清渣汤对玫瑰痤疮模型小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5表达的影响

目的:观察清渣汤口服对玫瑰痤疮模型小鼠皮损组织血管内皮生长因子(VEGF)、Toll样受体2(TLR2)、激肽释放酶5(KLK5)表达的影响。方法:7周龄健康雄性小鼠36只,用随机数字表法将其分为6组:清渣汤高剂组、中剂组、低剂组、阳性对照组(多西环素片)、模型对照组、正常对照组,每组6只。除正常组外,其余各组均进行玫瑰痤疮造模。造模24 h后给药,模型组给予0.2 mL生理盐水灌胃,清渣汤3剂组分别给予25 mg/kg(低剂量组)、50 mg/kg(中剂量组)和100 mg/kg(高剂量组)清渣汤灌胃,阳性对照组给予30 mg/kg盐酸多西环素溶液灌胃,每日1次,共给药4周。免疫组化法检测皮损部位皮肤组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达水平。结果:模型组小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达较正常组明显增强(P<0.01);与模型组比较,阳性对照组和清渣汤高、中、低剂量组小鼠皮损组织VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达减弱(P<0.05)。结论:清渣汤能够抑制玫瑰痤疮小鼠模型皮损部VEGF、TLR2、KLK5蛋白表达水平,从而减轻炎症反应。

过敏性鼻炎及其合并哮喘患者血液单核细胞和B细胞上Toll样受体2(TLR2)的检测分析

目的 检测过敏原激发前后过敏性鼻炎(AR),过敏性鼻炎合并哮喘(ARA)患者外周血单核细胞、 B细胞上Toll样受体2(TLR2)的表达水平。方法 采集AR、ARA患者外周静脉血,用蒿草、尘螨和梧桐花粉过敏原粗提液激发,流式细胞术检测分析外周血单核细胞、 B细胞上TLR2的表达。结果 与健康对照组(HC)相比,AR、 ARA患者血液TLR2+单核细胞、 TLR2+B细胞百分比和单核细胞、 B细胞表达TLR2平均荧光强度(MFI)均降低;经上述三种过敏原激发后,HC组TLR2+单核细胞百分比降低;经尘螨过敏原激发后,AR组单核细胞TLR2表达的MFI降低;经蒿草、尘螨过敏原激发后,ARA组B细胞TLR2表达MFI显著降低。结论 AR、 ARA患者单核细胞、 B细胞上TLR2表达下调。

Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌攻击小鼠的保护作用

目的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染日趋严重,免疫防治被寄予厚望。本研究旨在探索Toll样受体2(TLR2)激动剂Pam3Csk4预处理小鼠对MRSA攻击的保护作用。方法每只昆明小鼠用(25、50、100)μg Pam3Csk4尾静脉预处理12、24 h,小鼠尾静脉注射7×1010集落形成单位(CFU)/kg的MRSA(ATCC43300)。小鼠生存率按前24 h每2 h观察1次,后续每6 h记录小鼠存活情况,共观察1周。感染MRSA(3×108CFU/只)6 h后,菌落计数法观察肝、脾和肾等器官对MRSA的清除能力;3×108CFU/只MRSA攻击6、12、24 h后,ELISA检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)和IL-10含量,实时荧光定量PCR(q PCR)检测MRSA攻击后小鼠脾脏TNF-α、IL-6、IFN-γ和IL-10的mRNA水平,以及Pam3Csk4预处理小鼠24 h后,CXC趋化因子配体1(CXCL1)和Fcγ受体Ⅲ(FcγRⅢ)表达量。结果 100μg Pam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠的生存率,与Pam3Csk4预处理时间呈时间依赖关系;MRSA攻击小鼠的生存时间与Pam3Csk4预处理剂量相关,50μg以上剂量Pam3Csk4预处理能显著提高MRSA攻击小鼠生存率至70%以上;与对照组比较,Pam3Csk4预处理小鼠血清中TNF-α在6 h和12 h均显著降低,24 h后2组间无显著差别;IL-6在处理6 h内显著降低,12 h和24 h后无显著差异,IFN-γ在24 h内均显著降低,而IL-10则无显著变化;Pam3Csk4预处理24 h后,脾脏中CXCL1和FcγRⅢ表达量均显著高于生理盐水组。结论 Pam3Csk4预处理对MRSA攻击小鼠具有保护作用。

黄芩苷通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛大鼠神经炎症

目的探讨黄芩苷通过抑制Toll样受体(TLR)2/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路减轻带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠神经炎症的机制。方法SD大鼠随机分为对照组、模型组、黄芩苷低剂量(30 mg/kg)组、黄芩苷高剂量(60 mg/kg)组、黄芩苷高剂量+空载质粒组、黄芩苷高剂量+TLR2过表达组,每组10只,模型组和给药组通过腹腔注射树脂毒素(RTX)诱导建立PHN模型,对照组腹腔注射等剂量含10%Tween 80及10%乙醇的生理盐水,采用黄芩苷和质粒分组处理大鼠后,检测大鼠疼痛症状,比较自发缩足反射次数、缩爪阈值、热敏潜伏期;采用TUNEL法检测脊髓神经细胞凋亡率;采用免疫组织化学染色检测各组脊髓组织炎性细胞浸润,比较脊髓组织淋巴细胞功能相关抗原(LFA)-1阳性细胞比例;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓组织及血清炎症因子前列腺素(PGE)2、白细胞介素(IL)-18、环氧化酶(COX)-2水平;采用免疫印迹法检测各组脊髓组织TLR2/MyD88/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,模型组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,黄芩苷低剂量组、黄芩苷高剂量组、黄芩苷高剂量+空载质粒组缩爪阈值均显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65均显著降低(均P<0.05);黄芩苷高剂量组缩爪阈值相比黄芩苷低剂量组显著升高,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著降低(均P<0.05)。与黄芩苷高剂量组比较,黄芩苷高剂量+空载质粒组各指标无明显变化(P>0.05);黄芩苷高剂量+TLR2过表达组缩爪阈值显著降低,热敏潜伏期、自发缩足反射次数、脊髓神经细胞凋亡率、LFA-1阳性细胞比例、脊髓组织及血清PGE2、IL-18、COX-2水平、脊髓组织TLR2、MyD88蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(均P<0.05)。结论黄芩苷可通过抑制TLR2/MyD88/NF-κB信号通路从而降低炎症因子产生释放,进而阻止PHN大鼠神经炎症,抑制脊髓神经细胞凋亡及炎性细胞浸润,最终改善大鼠长时程自发痛、机械性痛觉超敏反应与热痛觉减退症状。

Toll样受体2(TLR2)基因敲除减轻小鼠胰岛素抵抗并促进巨噬细胞M2极化

目的研究Toll样受体2(TLR2)基因缺失对小鼠胰岛素抵抗和巨噬细胞极化的影响。方法出生28 d雄性TLR2基因敲除(TLR2-/-)和野生型(WT)的C57BL/6小鼠各12只,采用PCR验证每只小鼠的基因型。基础饲养3个月后,进行葡萄糖耐量实验(GTT)和胰岛素抵抗实验(ITT);从外周血中分离单个核细胞,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)/γ干扰素(IFN-γ)和M-CSF/白细胞介素4(IL-4)/IL-13分别诱导培养为M1型和M2型巨噬细胞,流式细胞术检测CD11b、F4/80、CD11c、CD206、早期生长反应蛋白2(EGR2),确定巨噬细胞表型。ELISA检测M1型巨噬细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6的含量;M2型巨噬细胞培养上清液中IL-10的含量。结果PCR验证结果显示TLR2-/-和WT小鼠的基因型正确;行GTT后比较,TLR2-/-小鼠血糖调节能力比WT小鼠强,在30 min时最明显;行ITT后比较,WT小鼠比TLR2-/-小鼠调节血糖的能力和胰岛素敏感性均降低,在15 min差异明显;与WT小鼠相比,TLR2-/-小鼠M1型巨噬细胞的比率降低,M2型巨噬细胞比率增加;与WT小鼠相比,TLR2-/-小鼠M1型巨噬细胞培养上清液IL-6、TNF-α含量降低,TLR2-/-小鼠M2型巨噬细胞培养上清液IL-10含量增加。结论TLR2信号影响巨噬细胞的极化,使巨噬细胞倾向于M1表型,从而分泌促炎因子使机体处于低度炎症的状态,导致葡萄糖耐量和胰岛素敏感性的降低。

慢性牙周炎吸烟患者外周血单核细胞TLR受体的表达及意义

目的探讨慢性牙周炎吸烟患者外周血CDl4+单核细胞TLR2和TLR4的表达及意义。方法选择慢性牙周炎吸烟患者(PS组)20例、慢性牙周炎非吸烟患者(PNS组)31例及健康不吸烟者20例(NS组),应用流式细胞仪(FCM)全血双色免疫荧光直标法检测外周血单核细胞的TLR2和TLR4表达水平,结果以CDl4+细胞TLR相对平均荧光强度(mfi)和TLR相对阳性细胞百分率(rpcp)表示,对各组进行对比研究。结果①慢性牙周炎吸烟患者(PS组)CDl4+单核细胞TLR2表达的mfi及rpcp均明显低于慢性牙周炎非吸烟患者组(PNS组)和健康组(NS组);PNS组TLR2的mfi明显低于NS组,而rpcp与NS组相比差异无统计学意义。②PS组CDl4+单核细胞TLR4表达的mfi明显低于PNS组,与NS组相比差异无统计学意义,而rpcp低于PNS组和NS组;PNS组TLR4表达的mfi明显低于NS组,而rpcp与其相比无统计学意义。结论慢性牙周炎吸烟患者外周血单核细胞TLR表达显著降低,其先天性免疫可能受到抑制。

慢性乙型肝炎病毒感染者CD8^+T细胞Toll样受体2表达增强

目的测定未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者CD8^+T细胞中Toll样受体2(TLR2)的水平,探索TLR2在慢性HBV感染者CD8^+T细胞中的表达的情况。方法采用实时荧光定量PCR检测40例样本的血清HBV载量,分为高病毒载量组(HBV DNA>1×104拷贝/m L)、低病毒载量组(HBV DNA<1×104拷贝/m L),19例志愿者作为健康对照组;分离外周血单个核细胞,流式细胞术检测CD8^+T淋巴细胞亚群中TLR2和CD38、HLA-DR、CD95、程序性死亡蛋白1(PD-1)的表达,并分析TLR2表达情况及与它们之间的相关性。结果低病毒载量组与高病毒载量组CD8^+T细胞TLR2的表达较健康对照组高,低病毒载量组CD8^+T细胞TLR2表达高于高病毒载量组;相关性分析结果显示CD8^+T细胞亚群中TLR2和CD38、HLA-DR、CD95、PD-1表达缺乏相关性。结论 HBV感染者CD8^+T淋巴细胞TLR2的表达增强。

亚低温对急性肺损伤大鼠Toll样受体2蛋白表达及下游促炎因子的影响

目的探讨亚低温对急性肺损伤（Au）大鼠Toll样受体2（TLR2）蛋白表达及下游促炎性因子的影响。方法按随机数字表法将90只雄性SD大鼠分为四组：亚低温组、控温组、非控温组[气管滴入脂多糖（LPS）制备ALI大鼠模型]及对照组（滴入等量的生理盐水）。建模成功后，亚低温组及控温组分别将体温维持在33～34℃、36—37℃。分别于滴入LPS或生理盐水后2h、7h及13h处死大鼠。分别于术前及术后1h、2h、7h、13h测定动脉血气分析。光镜下观察肺组织形态结构，进行病理评分。分别采用蛋白质印迹法（Westernblot）及逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠肺组织的TLR2蛋白表达及髓样分化因子（MyD88）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA的转录。结果LPS干预后，肺组织病理评分升高；TLR2蛋白及Myd88、TNF-α、iNOSmRNA表达随时间延长呈升高趋势（均P〈0．01）。1h、6h亚低温组氧分压好于同时段控温组及非控温组（均P〈0．05），12h亚低温组氧分压与同时段控温组及非控温组比较差异无统计学意义（均P〉0．05）。同一时段亚低温组肺组织评分低于控温组及非控温组（均P〈0．05），TLR2蛋白表达低于控温组及非控温组（均P〈0．01），MyD88mRNA（2^-△△CT）低于控温组及非控温组（均P〈0．01），TNF—α mRNA（2^-△△CT）低于控温组及非控温组（P〈0．01），iNOSmRNA（2^-△△CT）低于控温组及非控温组（均P〈0．01）。结论亚低温能降低内毒素诱导的ALI大鼠的TLR2蛋白及下游促炎症因子表达，减轻肺损伤。

金黄色葡萄球菌对小尾寒羊乳腺组织TLR2表达的影响

Toll样受体能够识别细菌等病原微生物及介导炎症反应信号通路,在先天免疫和获得性免疫中发挥着重要作用。为了解Toll样受体2(TLR2)在小尾寒羊正常乳腺组织及由金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎乳腺组织中的表达情况,探讨TLR2在金黄色葡萄球菌乳腺炎致病过程中的作用机制及乳腺上皮细胞在乳腺免疫防御中所起的作用,采用qRT-PCR技术和免疫组织化学染色(IHC)法检测了正常小尾寒羊及金黄色葡萄球菌乳腺炎病理模型小尾寒羊乳腺组织中TLR2基因mRNA及其蛋白的表达情况。结果显示,小尾寒羊正常乳腺组织、金黄色葡萄球菌感染乳腺组织均有TLR2 mRNA及其蛋白表达;但金黄色葡萄球菌感染后乳腺组织中TLR2基因及TLR2蛋白显著高于正常乳腺组织,且感染后48 h TLR2 mRNA和TLR2蛋白相对表达量最高(P<0.05),96 h TLR2 mRNA和蛋白相对表达量较48 h显著降低(P<0.05),正常对照组TLR2的相对表达量最低。通过免疫组织化学染色发现,正常乳腺组织中TLR2蛋白主要定位于乳腺腺泡上皮,而感染金黄色葡萄球菌后乳腺组织中TLR2蛋白主要表达在乳腺腺泡腔中脱落的乳腺上皮细胞和以淋巴细胞为主的炎性细胞上。结果表明,乳腺感染金黄色葡萄球菌后,乳腺上皮细胞是病原菌作用的靶标,通过上调表达TLR2识别病原菌,激发先天免疫。

强直性脊柱炎患者外周血单核细胞TLR2和TLR4表达及其临床价值

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者与健康患者外周血单核细胞(PBMC)表面的TLR2和TLR4表达差异及临床意义。方法根据入选标,LM准选取40例强直性脊柱炎患者和40例健康体检患者。在未给予系统治疗前提取外周血单核细胞进行研究。并对患者红细胞沉降率(ESR)和血浆C-反应蛋白(CRP)进行检测。使用qPCR法对外周血单核细胞TLR2和TLR4mRNA表达水平进行检测。并使用western blot法对外周血单核细胞TLR2和TLR4蛋白表达水平进行检测。结果结果显示强直性脊柱炎患者ESR和CRP较对照组明显升高,差异均有显著统计学意义(P均<0.05)。同时我们还发现强直性脊柱炎患者外周血单核细胞(PBMC)TLR2和TLR4mRNA和蛋白表达水平较健康体检患者显著增加,差异均有显著统计学意义(P均<0.05)。结论 TLR2和TLR4在强直性脊柱炎患者外周血单核细胞表面的表达水平呈显著性升高,提示TLR2和TLR4与强直性脊柱炎发病可能存在密切的相关性。TLR2和TLR4表达水平有作为诊断强直性脊柱炎的潜在价值,但仍需进一步的研究证实。

中国九江汉族人群TLR2基因单核苷酸多态性与Graves病易感关系

目的:研究九江汉族人群TLR2基因多态性与Graves病的易感关系。方法:本研究采用特异性引物PCR方法,基于病例-对照研究的实验设计,对333例甲亢病例和368例正常对照的TLR2基因上的rs3804100和rs5743705位点进行了基因分型。结果:患者男女比例约为1∶2.6,女性有更高的患病风险;所有位点均符合哈迪-温伯格平衡。没有在总体病例、对照之间观察到多态位点基因型和等位基因频率的显著差异。然而,在对发病年龄和性别进行分层分析后发现,在GD早发病人中(≤40岁),SNP位点rs3804100的A/A基因型(P=0.013,OR=1.53,95%CI=1.11-2.12)以及A等位基因频率(P=0.020;OR=1.37;95%CI=1.05-1.79)显著高于正常对照组。结论:TLR2基因rs3804100位点的A/A基因型可能会显著增加人群40岁以前患GD的风险。

TLR2在胶质瘤细胞GL261的高表达及其激活后增强迁移的作用

目的探讨小鼠胶质瘤细胞系GL261主要高表达的Toll样受体(TLRs)家族成员及其在GL261细胞迁移中的作用。方法运用实时荧光定量PCR检测TLRs在GL261细胞的表达情况;GL261细胞经TLR2配体Pam3CSK4刺激后,应用Transwell迁移实验检测其对迁移能力的影响;慢病毒稳定干扰TLR2表达后,观察Pam3CSK4刺激对GL261细胞迁移能力的改变。结果GL261细胞主要高表达TLRs家族中的TLR2;Pam3CSK4激活TLR2后显著增强GL261细胞迁移能力;沉默TLR2基因表达后,Pam3CSK4促进GL261细胞迁移能力的作用消失。结论小鼠GL261胶质瘤细胞TLRs家族中主要高表达TLR2,其激活具有促进GL261细胞迁移的作用,下调TLR2可抑制该细胞的迁移。

Toll样受体2对人主动脉瓣间质细胞炎症反应的调控作用

目的探讨Toll样受体(TLR2)调控Notch1信号通路对人主动脉瓣间质细胞炎症反应的作用。方法从正常主动脉瓣组织及主动脉瓣狭窄病人的主动脉瓣组织中分离出主动脉瓣间质细胞,酶联免疫吸附(ELISA)检测200 ng/ml的TLR2激活物脂多糖(LPS)干预细胞24 h后白细胞介素(IL)-6、巨细胞趋化因子(MCP)-1和细胞间黏附因子(ICAM)-1浓度;Western印迹检测200 ng/ml的LPS干预细胞2、4、8、12 h后NICD1蛋白表达,ELISA检测Jagged1浓度;60 nmol/L的人Notch1特异性siRNA沉默Notch1及200 ng/ml的LPS刺激细胞24 h后,Western印迹检测NICD1及ICAM-1蛋白表达;5μg/ml的Jagged1及200 ng/ml的LPS处理细胞,ELISA检测IL-6、MCP-1和ICAM-1浓度。结果正常主动脉瓣组织及主动脉狭窄病人瓣膜组织的主动脉瓣间质细胞经LPS刺激后IL-6、MCP-1和VCAM-1的浓度均显著高于无LPS刺激组,主动脉狭窄病人瓣膜组织的主动脉瓣间质细胞中IL-6、MCP-1和VCAM-1的浓度均显著高于正常组(P<0.01);LPS刺激能诱导NICD1的生成及增加,具有时间依赖性,且主动脉狭窄病人瓣膜组织的主动脉瓣膜间质细胞中NICD1生成量多于正常组;主动脉狭窄病人瓣膜组织的主动脉瓣膜间质细胞中Jagged1浓度显著高于正常组,且随着时间延长增加;沉默Notch1信号通路能减弱NICD1的蛋白表达,且能减少炎症因子ICAM-1的蛋白表达;Jagged1激活Notch信号通路能诱导产生低水平的IL-6、MCP-1、ICAM-1,而能明显增强TLR2诱导的IL-6、MCP-1、ICAM-1的水平。结论 TLR2能诱导人主动脉瓣间质细胞的炎症反应及活化Notch1信号通路,主动脉瓣狭窄的主动脉瓣组织间质细胞炎症反应更明显,沉默Notch1信号通路可减弱TLR2诱导的炎症反应,激活Notch信号通路则增强TLR2诱导的炎症反应。

P.g.LPS诱导的miR-19a调控hPDLFs中TLR2及BSP的表达

运用过表达或抑制miR-19a表达技术转染人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs),检测Toll样受体2(TLR2)和骨涎蛋白(BSP)的mRNA及蛋白表达水平。结果表明,过表达miR-19a可以抑制TLR2、上调BSP的表达。

Toll样受体2(TLR2)与结核分枝杆菌感染的相关研究进展

Toll样受体2(TLR2)是白细胞表面表达的一种模式识别受体,已发现多种配体可以激动或抑制TLR2的活化,进而调控免疫细胞的炎症和凋亡状态。结核分枝杆菌(MTB)通常寄生在巨噬细胞中,但MTB感染机体后,包括巨噬细胞在内的多种免疫细胞表面的TLR2都可与其相互作用,释放细胞因子,影响MTB在体内的状态和增殖。在分子层面,TLR2的多态性有待更多探索,目前研究的大部分TLR2的多态性被认为与MTB的易感性无关。文中总结了TLR2与配体、感染后免疫调节活动、多态性与MTB易感性等方面的研究进展。

可溶性环氧化物水解酶抑制剂TPPU改善阿尔茨海默病的作用和机制

目的 利用小鼠模型探讨新型可溶性环氧化物水解酶(sEH)抑制剂(TPPU)改善阿尔茨海默病(AD)的分子机制。方法 将5xFAD转基因小鼠随机分为WT溶剂组、5xFAD溶剂组和5xFAD-TPPU干预,5xFAD-TPPU干预组每日腹腔注射1.5 mg/kg体质量TPPU,连续注射8 w。免疫荧光染色观察β淀粉样蛋白水平和小胶质细胞活化。Y迷宫检测小鼠认知功能。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测白细胞介素(IL)-6、IL-β和肿瘤坏死因子(TNF)-α三种炎症因子mRNA水平。高效液相和质谱联用技术检测环氧四烯酸(EETs)水平。Western印迹检测给药前后Toll样受体(TLR)2及其下游信号分子表达。结果 外源性给予TPPU可显著抑制小胶质细胞的活化和炎症因子的释放,并且能够改善AD小鼠病理症状。与WT溶剂组相比,5xFAD溶剂组TLR2相关信号通路异常,给予TPPU后,可有效抑制TLR2信号通路的激活。结论 sEH抑制剂TPPU可能通过TLR2信号通路抑制小胶质细胞的过度激活,从而改善AD的病理症状。

靶向Toll样受体2的小分子调节剂研究进展

Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是最早被发现的天然免疫模式识别受体(pattern-recognition receptors,PRRs)。TLR信号传导通路的异常是导致慢性炎症、癌症、神经系统疾病和心血管疾病等的关键因素,TLR的激动剂和抑制剂的开发都备受关注。目前已知的TLR2激动剂,如脂肽或其衍生物,由于合成困难、易水解、且易引发炎性细胞因子风暴,存在一定的药物研发局限性,抑制剂则少有报道。具有更高稳定性的新型小分子TLR2激动剂或抑制剂将更有可能开发成肿瘤免疫治疗或抗炎药物。

基于TLR2/p38 MAPK/NF-κB信号通路探讨独活寄生汤对类风湿性关节炎大鼠的抗炎作用及机制

目的:探讨独活寄生汤对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠的抗炎作用及其对Toll样受体2(TLR2)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响。方法:将48只雄性SD大鼠,随机分为以下6组(n=8),正常组、模型组、甲氨蝶呤组、独活寄生汤低、中、高剂量组。采用胶原抗体诱导法于大鼠尾根部注射牛Ⅱ型胶原蛋白建立CIA大鼠模型,模型建立成功后进行灌胃给药。甲氨蝶呤组每次给予2.0 mg·kg^(-1)甲氨蝶呤,每周3次;独活寄生汤低、中、高剂量组每次给予3.8、7.6、15.2 g·kg^(-1)·d^(-1),连续灌胃治疗28 d;正常组和模型组给予等体积生理盐水。通过记录大鼠体质量,观察大鼠足肿胀度,测定关节炎指数、免疫器官指数,微循环检测仪检测大鼠微循环指标变化,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织病理形态的改变及流式细胞术检测滑膜细胞凋亡率以明确独活寄生汤对类风湿性关节炎的治疗作用,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-17A、γ干扰素(IFN-γ)水平变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TLR2、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量显著降低(P<0.01),足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数显著升高(P<0.01),微血管综合评分及血管阻力显著提高(P<0.01),病理切片可观察到滑膜组织增生明显、炎性细胞大量浸润,血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A和IFN-γ表达及滑膜组织TLR2、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38 MAPK/p38 MAPK的表达水平均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,独活寄生汤低、中、高剂量组大鼠体质量显著升高(P<0.01),足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数明显下降(P<0.05,P<0.01),微血管综合评分及血管阻力明显下降(P<0.05,P<0.01),滑膜组织病理学损伤情况明显好转,滑膜细胞凋亡率显著升高(P<0.01),血清中TNF-α、IL-1β、IL-17A和IFN-γ水平明显下降(P<0.05,P<0.01),滑膜组织TLR2、p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-p38MAPK/p38 MAPK的表达水平均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:独活寄生汤可能通过调节TLR2/p38 MAPK/NF-κB信号通路缓解CIA大鼠体内炎症反应,从而发挥其抗类风湿性关节炎作用。