水飞蓟素通过共同抑制TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路减轻糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的研究

目的:探讨水飞蓟素通过共同抑制Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)和肿瘤坏死因子α/活性氧簇/P38丝裂原活化蛋白激酶(TNF-α/ROS/P38MAPK)通路减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏损伤的机制。方法:选取健康SD大鼠50只,按随机数字表法分为对照组、模型组、低剂量水飞蓟素组、中剂量水飞蓟素组、高剂量水飞蓟素组,每组10只。建模成功并治疗8周后,生化分析仪测定各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、胱抑素C(Cys-C)、β_(2)微球蛋白(β_(2)-MG)、24 h尿蛋白(UTP)水平;计算肾脏指数;试剂盒检测各组大鼠肾组织丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)水平;RT-PCR检测各组大鼠TLR4,NF-κB,TNF-α和P38MAPK等mRNA的表达水平。结果:与对照组相比,模型组体质量、T-AOC均降低(P<0.05),肾脏指数和FBG,Scr,BUN,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均升高(P<0.05)。低、中、高剂量水飞蓟素组体质量、T-AOC水平均低于对照组,且均高于模型组(P<0.05);低、中、高剂量水飞蓟素组肾脏指数和FBG,Hcy,Cys-C,β_(2)-MG,24 h UTP,MDA,TLR4 mRNA,NF-κB p65 mRNA,TNF-αmRNA,P38MAPK mRNA均高于对照组,且均低于模型组(P<0.05);低、中剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均高于对照组,且低于模型组(P<0.05);高剂量水飞蓟素组Scr,BUN水平均低于模型组(P<0.05),高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:水飞蓟素可调控TLR4/NF-κB和TNF-α/ROS/P38MAPK通路,可通过抑制其激活减轻氧化应激、减轻DN大鼠的肾脏损伤。

楮实子对肝星状细胞增殖、凋亡及TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路的影响

目的 探究楮实子对肝星状细胞(HSC)增殖、凋亡及Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路的影响。方法 体外培养大鼠肝星状细胞系(HSC-T6),正常培养细胞作为空白组;使用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激细胞24 h后,分别添加不同质量浓度(0、1、5、10 g/L)的楮实子培养细胞,依次作为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。MTT法、Annexin V-FITC/PI双染法检测楮实子对HSC-T6细胞增殖、凋亡的影响;ELISA法检测HSC-T6细胞上清液中TNF-α、白细胞介素-6(IL-6)含量;Western blotting法检测HSC-T6细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白表达。结果 楮实子可抑制活化的HSC-T6细胞增殖,促进其凋亡,且呈质量浓度依赖性(P<0.05);楮实子可降低活化的HSC-T6细胞上清液中TNF-α、IL-6水平,下调细胞中TLR4、NF-κB、TNF-α蛋白水平,并均呈质量浓度依赖性(P<0.05)。结论 楮实子可抑制HSC-T6细胞增殖,促进HSC-T6细胞凋亡,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路激活有关。

血必净注射液对急性胰腺炎大鼠肺损伤及肺组织TLR4、NF-κB、TNF-α表达的影响

目的观察血必净注射液对急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)伴发肺损伤大鼠的保护作用及对肺组织TLR4(Toll样受体4)、NF-κB(核因子-κB)、TNF-α(肿瘤坏死因子-α)表达水平的影响,探讨其潜在治疗机制。方法利用生物信息学方法分析AP肺损伤相关的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。大鼠随机分为假手术组、AP模型组、血必净注射液组,16只/组。采用胰腺被膜下注射5%牛磺胆酸钠制备AP大鼠模型并给予血必净注射液治疗。于造模后6、24 h分批取材,ELISA检测血清淀粉酶(AMY)活性及肺组织TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平,观察肺脏及胰腺组织病理学改变。结果从GEO高通量芯片数据库中共筛选出54个DEGs,主要富集在Toll样受体、TNF-α、HIF-1(低氧诱导因子-1)等信号通路。造模后6 h及24 h时AP模型组血清AMY活性高于假手术组,血必净注射液组AMY活性较AP模型组下降但高于假手术组。组织病理学检测结果显示6 h及24 h AP模型组大鼠胰腺及肺组织出现出血、坏死、肿胀等病变,血必净注射液组病变较轻。AP模型组肺组织中TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平高于假手术组,血必净注射液组上述分子表达水平较AP模型组有不同程度降低。结论血必净注射液可能通过抑制肺组织炎症反应,减少TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平,对急性胰腺炎肺损伤大鼠产生一定保护作用。

感染性早产小鼠胎盘TLR4,NF-κB和TNF-α的表达及NAC的干预作用研究

目的:通过研究感染性早产小鼠胎盘Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4),核转录因子-kappaB p65(Nuclear factor-kappaB p65,NF-κBp65)和肿瘤坏死因子α(Tumornecrosis factor-alpha,TNF-α)的表达以及N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)的干预影响,探讨一种预防小鼠感染性早产发生的新策略。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法检测早产小鼠胎盘TLR4、NF-κBp65、TNF-αmRNA和蛋白的表达,以及NAC干预后早产率、TLR4、NF-κBp65和TNF-α的表达变化。结果:对照组都有TLR4、NF-κBp65、TNF-α的少量表达,LPS模型组和对照组相比三者表达都显著升高(P<0.05);NAC+LPS和模型组相比,TLR4表达无明显变化,而NF-κBp65和TNF-α表达明显减少(P<0.05),并且早产率也明显下降(P<0.05);LPS+NAC治疗组和模型组相比无统计学意义。结论:NAC可以降低感染性早产小鼠胎盘NF-κBp65和TNF-α的表达,在早产的预防中有一定作用。

丹皮酚对脂多糖诱导的大鼠血管内皮细胞VCAM-1、TNF-α释放及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的观察丹皮酚(Paeonol,Pae)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VECs)释放血管内皮细胞黏附因子-1(vascular endothelial cell adhesion molecule-1,VCAM-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及Toll样受体-4(toll-like receptor,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路的影响,以阐明Pae抑制VECs黏附功能的分子机制。方法组织块预消化贴壁法分离培养VECs,采用LPS诱导VECs炎性损伤;健康大鼠灌胃给予Pae制备含药血清,反相高效液相色谱法测定血清Pae的含量;RT-PCR法检测TLR4mRNA的表达;凝胶迁移试验检测NF-κB蛋白的表达;免疫组织化学检测VCAM-1的表达;放射免疫法检测TNF-α的表达。结果 Pae含药血清(2.5,5,10μg/mL)作用于LPS诱导的VECs 24h,可抑制VECs中TLR4mRNA和NF-κB蛋白表达,以及VCAM-1和TNF-α分泌,呈现一定的剂量依赖性,其中Pae 10μg/mL的抑制作用均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Pae降低TNF-α的释放和VCAM-1水平,可能是通过下调LPS诱导的TLR4/NF-κB信号通路的活化而实现的。

薯蓣皂苷对糖尿病肾病大鼠TLR4/NF-κB/TNF-α通路及肾间质淋巴细胞浸润的影响

目的:探究薯蓣皂苷对糖尿病肾病(DN)大鼠TLR4/NF-κB/TNF-α通路及肾间质淋巴细胞浸润的影响。方法:通过喂养高脂高糖饲料8周后腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素的方法,建立DN大鼠模型,随机分为模型组、薯蓣皂苷低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组、二甲双胍(140 mg/kg)组,每组12只大鼠,另取12只SD大鼠使用普通饲料喂养8周后腹腔注射等量生理盐水,设为对照组。经药物分组处理后,测定大鼠血糖、24 h尿蛋白含量和肾功能指标[血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)]水平;HE染色检测大鼠肾组织病理改变;免疫组织化学染色检测大鼠肾组织间质中浸润的LFA-1阳性细胞比例;ELISA检测大鼠血清炎症因子(TNF-α、IL-8)水平;Western blot检测大鼠肾组织TLR4/NF-κB/TNF-α通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠肾组织充血、水肿,肾小球皱缩严重,系膜基质增生,间质可见明显炎症淋巴细胞浸润,显示明显病理损伤,血糖、24 h尿蛋白含量、Scr、BUN、TNF-α及IL-8水平、LFA-1阳性细胞比例、肾组织TLR4、核内NF-κB p65、TNF-α蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,薯蓣皂苷各剂量组及二甲双胍组大鼠肾组织病理损伤均减轻,血糖、24 h尿蛋白含量、Scr、BUN、TNF-α及IL-8水平、LFA-1阳性细胞比例、肾组织TLR4、核内NF-κB p65、TNF-α蛋白表达降低(P<0.05),且薯蓣皂苷各组之间呈剂量依赖性(P<0.05);薯蓣皂苷高剂量组与二甲双胍组相比,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:薯蓣皂苷可下调TLR4/NF-κB/TNF-α通路蛋白表达,抑制DN大鼠炎症反应,减轻肾间质淋巴细胞浸润,改善其肾功能。

基于TLR4／NF-κB信号通路研究调肝理脾方联合熊去氧胆酸干预原发性胆汁性胆管炎小鼠的作用机制

目的:通过研究肿瘤坏死因子-a(TNF-α)及Toll样受体4/核转录因子κB(TLR4/NF-κB)信号通路相关基因在原发性胆汁性胆管炎(PBC)模型小鼠回肠组织中的表达情况,探讨中药调肝理脾方(TGLP)联合熊去氧胆酸(UDCA)干预PBC小鼠的作用机制。方法:将100只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组(UDCA 0.1g·kg^(-1)·d^(-1))、中药组(TGLP 5.4g·kg^(-1)·d^(-1))、联合组(TGLP 5.4g·kg^(-1)·d^(-1)+UDCA 0.1g·kg^(-1)·d^(-1)),每组20只;采用聚肌胞苷酸(poly l:C)5mg/kg复制PBC小鼠模型;给药8w、16w后颈脱位法处死小鼠,采集末端回肠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法及实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测回肠组织中TLR4、TNF-α的表达水平,RTPCR法测定回肠组织中TLR4、NF-κB mRNA的相对表达水平。结果:与模型组比较,正常组小鼠回肠组织中NF-κB、TNF-α表达水平较低,差异有显著性意义(P<0.01);经治疗后3个治疗组小鼠TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平均较模型组降低,差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05),且联合组小鼠TLR4、NF-κB、TNF-α表达水平下降最显著;与联合组相比,中药组小鼠NF-κB表达水平较高,差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05)。结论:负性调节小鼠回肠组织中TLR4/NF-κB信号通路并抑制TNF-α因子的释放可能是TGLP联合UDCA干预PBC模型小鼠的作用机制之一。

血必净对内毒素诱导血管内皮细胞TLR4-NF-κB炎症信号通路表达的影响

目的探讨血必净对内毒素(LPS)诱导血管内皮细胞TLR4-NF-κB炎症信号通路表达的影响。方法体外培养血管内皮细胞,将细胞分为3组:正常对照组、LPS组和血必净组。用Western blot检测TLR4和核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白的表达情况;用ELISA方法检测TNF-α含量。结果与对照组相比,LPS组TNF-α浓度明显增加,TLR4和NF-κB p65表达增加;血必净能明显抑制TNF-α浓度以及TLR4和NF-κB p65的表达(P<0.01)。结论血必净可能通过TLR4-NF-κB信号通路,抑制炎症反应,减少TNF-α蛋白含量。

锦红汤对脓毒症大鼠小肠TLR4及其信号通路表达的影响

目的:研究锦红汤对脓毒症大鼠小肠Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)及其信号通路表达的影响。方法:将192只大鼠常规适应性喂养后按照每组32只随机分为正常组(Z)、模型组(M)、假手术组(J)、中药组(H)、西药组(T)、联合组(L)等6组。治疗组造模后即予相应药物干预1次,其余组均同时以等量生理盐水干预,每组大鼠再按0 h、2 h、6 h、24 h分为4个亚组,每亚组8只。在各个时间点采集标本,所有大鼠于标本采集完毕后处死。正常组:喂正常饲料。模型组:造模(CLP脓毒症模型),术后予生理盐水灌胃1次。假手术组:剖腹后只在盲肠根部穿入丝线,不行结扎和穿孔,术后予生理盐水灌胃1次。中药组:造模(CLP脓毒症模型),术后予锦红汤灌胃1次。西药组:造模(CLP脓毒症模型),术后予亚胺培南腹腔内注射1次。联合组:造模(CLP脓毒症模型),术后予锦红汤灌胃联合亚胺培南腹腔内注射1次。观察6组大鼠小肠组织形态学变化和TLR4及其信号通路相关基因蛋白表达的变化。结果:模型组2 h后肠绒毛出现排列混乱、缩短或变钝,6 h后上皮细胞水肿,部分脱落显著,黏膜下间质水肿,24 h后肠黏膜绒毛萎缩,而上皮细胞坏死,黏膜水肿和炎症细胞浸润。中药组、西药组和联合组24 h后肠黏膜表现与模型组比较有改善,但3组之间差异不大(P>0.05);大鼠小肠组织LPS受体(lipopolysaccharide,CD14)、Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、核转录因子kappa B(nuclear factor kappa,NF-κB)表达的影响蛋白表达在24 h后正常组表达最低,模型组表达最高;与正常组、假手术组比较,模型组、西药组、中药组、联合组大鼠小肠组织CD14、TLR4、TNF-α、NF-κB蛋白表达均有不同程度的升高(P<0.05);西药组、中药组、联合组大鼠小肠组织CD14、TLR4、TNF-α、NF-κB蛋白表达较模型组呈一定程度的下降(P<0.05);西药组、中药组大鼠小肠组织CD14、TLR4、TNF-α、NF-κB蛋白表达降低不如联合组(P<0.05)。结论:锦红汤可能是通过减轻或阻断TLR4及其信号传导通路,从而减轻炎性因子产生来改善疾病预后。

肿瘤坏死周子-β1对脓毒症大鼠Toll样受体R4及核周子-κB表达的影响

目的动态观察TGF-β1对脓毒症大鼠外周血单核细胞Toll样受体（Toll-likereceptor）TLR4、TNF-α及肝脏NF-κB表达的影响。方法120只SD大鼠接受盲肠结扎穿孔法（CLP）建立脓毒症模型，并随机均分为10组：脓毒症模型2h、6h、12h、24h、和48h组（造模后0．5h尾静脉注射生理盐水1m1），TGF-β1干预2h、6h、12h、24h、和48h组[造模后0．5h尾静脉注射TGF-β120ng／（ml·250g）]。另12只SD大鼠用作对照组。于各时间点分别处死大鼠，利用流式细胞术检测外周血单核细胞表面TLR4表达变化，酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测外周血TNF-α、肝脏NF-κB浓度。结果CLP术后6～12hTLR4在外周血单核细胞表达明显减少，12h最低；肝脏组织中NF-κB的浓度从术后6h起即显著高于对照组，24h时达到最高并维持到48h后。TGF-β1干预组单核细胞TLR4表达显著低于脓毒症模型组，伴随肝脏表达NF-κB减少，但外周血TNF-α浓度明显升高。结论在脓毒症，TGF-β1能下调单核细胞TLR4及肝脏NF-κB的表达，但TNF-α的生成增加。TGF-β1在脓毒症炎症反应过程中发挥复杂作用，可能并非通过TLR4来影响炎症因子的生成。

肾消通络方对自发性糖尿病db/db小鼠肾脏炎性损伤及MCP-1、TNF-α水平的影响

目的探讨肾消通络方对自发性糖尿病db/db小鼠肾脏炎性损伤及MCP-1、TNF-α水平的影响。方法将24只db/db小鼠和同背景的8只正常db/m小鼠随机分为西药组(db/db)、模型组(db/db)、中药组(db/db)、正常组(db/m),每组8只,中药组灌胃给予26.8 g/kg肾消通络方,西药组灌胃给予0.3 g/kg吗替麦考酚酯,模型组、正常组灌胃给予同体积1%羧甲基纤维素钠溶液,每天1次,连续8周。ELISA检测血清MCP-1、TNF-α水平,Western blot检测肾脏TLR4通路蛋白TLR4、MyD88、NF-κB p65和炎性因子MCP-1、TNF-α水平。结果与正常组比较,模型组小鼠肾脏和血清MCP-1、TNF-α水平升高(P<0.01),肾脏TLR4通路蛋白表达增加(P<0.01);与模型组比较,中药组、西药组小鼠肾脏和血清MCP-1、TNF-α水平降低(P<0.01),肾脏TLR4通路蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论肾消通络方能下调小鼠肾脏炎性因子MCP-1、TNF-α水平,减轻肾脏炎性损伤,可能与抑制炎症通路TLR4/NF-κB p65的信号转导有关。

艾灸神阙穴对溃疡性结肠炎小鼠TLRs/NF-κB通路相关因子表达的影响

目的观察艾灸神阙穴对溃疡性结肠炎(UC)小鼠Toll样受体(TLRs)/核因子-κB(NF-κB)通路相关因子表达的影响。方法32只ICR小鼠随机分为空白组、美沙拉嗪组、艾灸组和模型组,每组8只。除空白组外,其余各组均饮用3.5%DSS溶液7 d建立UC模型。造模成功后每日分别予艾灸神阙穴(20 min)和美沙拉嗪(0.4 g/kg)治疗,空白组和模型组除每日抓取固定外不进行任何操作。观察记录小鼠体质量、粪便性状及便血情况,计算疾病活动指数(DAI),HE染色观察结肠组织病理切片,采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测TLR4、NF-κB p65和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白和m RNA表达情况。结果与空白组相比,模型组结肠组织黏膜受损严重,DAI评分显著升高(P<0.01);与模型组相比,艾灸组与美沙拉嗪组结肠黏膜结构损伤明显恢复,DAI评分显著降低(P<0.01);与空白组相比,模型组TLR4、NF-κB p65和TNF-α蛋白和mRNA表达均显著增多(P<0.01);与模型组相比,艾灸组TLR4、NF-κB p65、和TNF-α蛋白和mRNA表达均显著降低(P<0.01)。结论艾灸神阙穴可通过TLRs/NF-κB通路影响TLR4、NF-κB p65和TNF-α的表达,有效降低UC小鼠DAI分值,降低炎性反应,促进结肠黏膜修复。

右美托咪定对体外循环大鼠海马区脑组织TLR4蛋白表达的影响

目的观察右美托咪定对体外循环大鼠血清和海马区脑组织炎性因子水平、TLR4和NF-κB蛋白表达的影响,探讨右美托咪定对体外循环致大鼠脑损伤的作用及可能机制。方法清洁级成年雄性SD大鼠30只,按照随机数字表法分成3组,每组10只。假手术组(Sham组):在水合氯醛麻醉下行气管插管,右颈内静脉、右股静脉、左股动脉及尾动脉穿刺置管,不进行体外循环。体外循环组(CPB组):同Sham组气管插管和动静脉置管后,行CPB 1 h。右美托咪定+CPB组(DC组):CPB前15 min内经静脉泵注右美托咪定5μg/kg,然后在CPB过程中以5μg/(kg·h)的速度泵注1 h,其余同CPB组。于T1(CPB前)、T2(CPB1 h)、T3(停CPB后2 h)、T4(停CPB后6 h),经股静脉采血离心后获得血清供ELISA检测S100-β、IL-6和TNF-α水平。于T4时取大鼠海马区脑组织,应用ELISA检测海马区脑组织IL-6和TNF-α水平,应用Western blot检测TLR4和NF-κB蛋白的表达。结果 T2~T4时,CPB组和DC组血清中S100-β、IL-6、TNF-α水平高于Sham组(P<0.05);DC组血清中S100-β、IL-6、TNF-α水平低于CPB组(P<0.05)。与Sham组比较,T4时,CPB组和DC组海马区脑组织IL-6和TNF-α水平、TLR4和NF-κB表达均显著上调(P<0.05);与CPB组比较,T4时,DC组海马区脑组织IL-6和TNF-α水平、TLR4和NF-κB表达均显著下调(P<0.05)。结论右美托咪定可能通过抑制TLR4信号转导通路,减少其下游IL-6、TNF-α水平和NF-κB蛋白表达,抑制炎症反应,从而发挥脑保护作用。

参附黄制剂联合亚低温对脓毒症大鼠脑-肠TLR4/TBK1/NF-κB/TNF-α炎症通路、骨骼肌的影响

目的:探讨参附黄联合亚低温治疗对脓毒症大鼠下丘脑-肠组织TLR4/TBK1/NF-κB/TNF-α信号通路及骨骼肌的保护作用。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、参附黄组、亚低温组、联合组,每组10只。除正常组外,其余组使用腔注射脂多糖的方式(5 mg/kg)制作脓毒症模型。对参附黄组、联合组动物在造模前0.5 h分别予参附黄制剂(20 mg/kg)灌胃,每日1次,疗程为4 d。亚低温组、联合组造模后在用异氟醚麻醉下即刻给予亚低温治疗3 h,疗程为2 d。每日检测和记录大鼠体质量。ELISA试剂盒检测外周血中MDA、SOD、GSH和下丘脑、结肠组织中TNF-α含量。Western Blot检测下丘脑、结肠、骨骼肌组织的相关指标。结果:与模型组比较,各干预组可显著降低MDA含量(P<0.05),提升SOD和GSH含量(P<0.05,P<0.01);显著抑制结肠组织中的肠道炎症信号通路指标TLR4蛋白表达和TNF-α含量(P<0.05,P<0.01),及下丘脑组织中的TLR4、TBK1蛋白表达和TNF-α含量(P<0.01,P<0.05)。与亚低温组比较,联合组第2~4天体质量、趾长伸肌/体质量比值显著升高(P<0.01),骨骼肌组织萎缩因子MuRF-1和MAFbx表达水平显著降低(P<0.01)。结论:参附黄制剂联合亚低温可以抑制脓毒症大鼠血清炎症,抑制下丘脑-结肠组织中的TLR4/TBK1/NF-κB/TNF-α信号通路,改善脓毒症高分解代谢导致的体质量下降、骨骼肌萎缩。

缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时TLR4信号通路表达的影响(英文)

目的:观察缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后TLR4通路表达的影响。方法:成年健康雄性SD大鼠110只,随机分为假手术组(sham组)(n=10)、缺血再灌注组(I/R组)和后处理组(IP组),后两组又依据缺血再灌注6h、12h、24h、48h、72h不同的时间点再分五个亚组。对各组行神经行为学评分,脑组织梗死体积测量,TUNEL技术检测神经细胞凋亡的情况,免疫组织化学技术观察各组大鼠脑组织TLR4、NF-κB和TNF-α蛋白的表达,原位杂交方法检测各组大鼠脑组织TLR4mRNA、NF-κBmRNA的表达。结果:缺血后处理可下调TLR4、NF-κB、TNF-α细胞炎性因子的表达,抑制细胞凋亡、减少脑梗死体积,改善神经行为。结论:后处理可通过抑制TLR4信号通路表达,减少脑梗死体积,改善神经功能。

β-arrestin2在内毒素诱导的肝脏损伤中的作用

目的探讨β-arrestin2在内毒素诱导的肝脏损伤中的作用机制。方法建立内毒素诱导的肝脏损伤模型,将β-arrestin2基因敲除型(KO)小鼠20只及同窝β-arrestin2野生型(WT)小鼠20只分别随机分成实验组及对照组(n=10),实验组腹腔内注射脂多糖(5 mg/kg),而对照组注射等量生理盐水,6 h后留小鼠血清和肝脏组织标本。实时定量PCR检测小鼠体内β-arrestin2表达量,ELISA检测各组小鼠血清中ALT、AST及TNF-α水平,蛋白免疫印迹法检测各组β-arrestin2、pp65及p-IкBα蛋白的表达。结果β-arrestin2 WT实验组肝脏组织中β-arrestin2 mRNA为0.18±0.06,明显低于正常对照组的1.00±0.29(t=-4.669,P<0.001),β-arrestin2蛋白表达也明显低于WT对照组;β-arrestin2 KO实验组血清ALT为(204.33±22.33)U/L、AST为(403.40±53.45)U/L,明显高于β-arrestin2 WT实验组ALT的(129.33±9.69)U/L和AST(256.20±40.47)U/L(t=7.55、6.94,P均<0.001)。β-arrestin2 KO实验组血清TNF-α为(155.89±14.89)pg/L,明显高于WT实验组的(101.36±10.65)pg/L(t=9.25,P<0.001)。β-arrestin2 KO实验组肝脏组织中p-IкBα及pp65的蛋白表达量明显高于β-arrestin2 WT实验组。结论β-arrestin2可能通过抑制NF-κB活化、减少TNT-α释放从而减轻内毒素诱导的炎症反应,在内毒素诱导的肝脏损伤中起保护作用。

氟苯尼考对肉鸡空肠黏膜的完整性及免疫相关基因表达的影响

研究空肠免疫相关指标及绒毛结构的变化在氟苯尼考致肉鸡腹泻中的作用。40羽1日龄肉鸡适应性饲养7 d后,随机分为对照组、氟苯尼考组(饮水添加100 mg·(kg·d)^-1氟苯尼考至35日龄),35日龄检测体重、脾脏与胸腺指数,取空肠组织以HE染色,观察组织切片并测量绒毛长度、隐窝深度且计算绒隐比,荧光定量PCR检测空肠TLR4、My D88、NF-κB和TNF-α基因表达量。结果表明,与对照组相比,氟苯尼考组肉鸡空肠绒毛长度、绒隐比极显著下降(P<0.01),隐窝深度极显著升高(P<0.01);体重、脾脏指数与胸腺指数极显著下降(P<0.01);TLR4、My D88、NF-κB与TNF-αm RNA相对表达量极显著升高(P<0.01)。空肠绒毛结构功能改变及免疫相关指标异常表达参与了氟苯尼考致肉鸡腹泻的发生发展。

原发性胆汁性胆管炎小鼠肠黏膜损伤机制的实验研究

目的基于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路,初步探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)模型小鼠的肠黏膜损伤机制。方法将40只C57BL/6雌性小鼠随机分为正常组和模型组,每组20只。采用聚肌胞苷酸[poly(I∶C)]5 mg/kg复制PBC小鼠模型。分别于给药8周、16周时处死小鼠(处死前禁食1 d),采集末端回肠以备检测。采用苏木精-伊红(HE)染色法观察回肠组织的病理变化,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测回肠组织中TNF-α的表达水平,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)方法测定回肠组织中TLR4mRNA、NF-κB mRNA的相对表达水平。结果随着造模时间的延长,模型组肠黏膜绒毛萎缩、变短、断裂,可见上皮下间隙增大、扩张,大量炎性细胞浸润于黏膜固有层甚至肌层,上皮层与固有层分离,伴随固有层毛细血管暴露,甚至出现固有层破坏、不完整,Chiu氏评分明显高于同期正常组(P均<0.01)。模型组肠组织中TNF-α水平高于同期正常组(P<0.01);与同期正常组相比,模型组肠组织中TNF-α、TLR4、NF-κB mRNA的表达水平较高(P均<0.01)。结论 PBC模型小鼠肠黏膜损伤机制与肠组织中TNF-α介导的TLR4/NF-κB信号通路密切相关。

基于LPS诱导小鼠炎症模型对苦苣菜抗炎机制的初步研究

为了初步探索苦苣菜的抗炎机制,在成功建立脂多糖(LPS)诱导小鼠炎症模型的基础上,进行如下试验。将试验小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组,苦苣菜水提物处理组(低、中、高浓度)。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和免疫印迹法(western blot)检测炎症因子的分泌及表达。结果表明:模型组中血清及肾脏中的TNF-α、IL-6、iNOS含量及HMGB1/TLR4/NF-κB蛋白含量与空白组比较显著升高,阳性对照组和苦苣菜水提物处理组(低、中、高浓度)的TNF-α及IL-6含量与模型组比较显著降低,同时苦苣菜水提物处理组的炎症信号通路HMGB1/TLR4/NF-κB蛋白表达量与模型组比较明显降低。表明苦苣菜水提物具备一定的抗炎功效。

子宫内膜异位症相关细胞因子研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是妇科常见的疾病,病因至今尚未明确。近年来认为免疫和炎症因素是EMs形成的重要原因。TLR4是天然固有免疫受体分子之一,可识别内、外源性配体,通过信号转导机制激活NF-κB。活化的NF-κB进入细胞核,诱导下游TNF-α、IL-1等因子的转录,引起机体的免疫反应、炎症反应、细胞黏附、细胞增生等,最终导致EMs的生发。文章就TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1目前在EMs发病机制中的研究进展进行综述,以更好的探究EMs的形成机理。