HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴在寻常型银屑病患者血清中的表达水平及临床意义

目的:探讨HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴在寻常型银屑病患者血清中的表达水平及临床意义。方法:采用ELISA检测60例中重度寻常型银屑病患者和30例健康志愿者血清中HMGB1、TLR4、IL-23、IL-17A的表达水平,比较各细胞因子表达差异及其与疾病严重程度评分(PASI)的相关性。检测并比较IL-17A抑制剂诱导期治疗后皮损改善率达PASI75及以上的22例中重度寻常型银屑病患者血清HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴表达水平的变化。结果:寻常型银屑病患者血清HMGB1、TLR4、IL-23、IL-17A表达水平显著高于健康对照组,重度患者表达水平高于中度患者,并与PASI评分呈正相关。IL-17A抑制剂诱导期后,银屑病患者血清中HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴表达水平显著降低。结论:寻常型银屑病患者血清中HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A轴高表达,且与疾病严重程度相关,该信号轴参与了寻常型银屑病的疾病过程,为银屑病免疫治疗提供了新的思路。

三七皂苷R1通过miR-181/IL-8/TLR4通路调控糖尿病性视神经病变的机制研究

目的探究三七皂苷R1(NGR1)通过微小RNA-181/白细胞介素-8/Toll样受体4(miR-181/IL-8/TLR4)通路调控糖尿病性视神经病变(DON)大鼠的作用及抗炎机制。方法尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,随机分为模型组(MG)、低剂量NGR1组(LNGR1)、中剂量NGR1组(MNGR1)、高剂量NGR1组(HNGR1),另设对照组(CG),每组8只,共40只。LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠每2日灌胃1次,剂量依次为15、30、60 mg/kg的NGR1,CG、MG组大鼠灌胃等体积0.9%氯化钠注射液,连续给药6周,期间监测大鼠血糖及体质量。给药完成后苏木精-伊红(HE)染色观察检测大鼠视神经形态,酶联免疫吸附法(ELISA)检测视神经糖化血红蛋白(HbA1c)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)水平,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测视神经miR-181表达,荧光素酶报告试验检测miR-181和IL-8靶向关系,Western Blot法检测视神经IL-8、TLR4的蛋白表达。结果(1)体重、血糖和HbA1c:与CG组比较,MG大鼠体重降低(t=-3.675,P=0.001),血糖、HbA1c较高(t_(血糖)=67.721,t_(HbA1c)=27.213,均P=0.000);与MG组比较,MNGR1、HNGR1组大鼠体重较高(t_(MNGR1)=4.863,t_(HNGR1)=6.018,均P=0.000),血糖较低(t_(MNGR1)=-29.171,t_(HNGR1)=-43.981,均P=0.000),HbA1c较低(t_(MNGR1)=-18.468,t_(HNGR1)=-22.799,均P=0.000),差异均有统计学意义。(2)炎症因子:与CG组比较,MG组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α和MMP-9表达较高(t_(IL-1β)=22.949,t_(IL-6)=20.732,t_(TNF-α)=12.785,t_(MMP-9)=12.276,均P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠血清IL-1β水平较低(t_(LNGR1)=-6.465,t_(MNGR1)=-18.598,t_(HNGR1)=-21.943,均P=0.000)、IL-6水平较低(t_(LNGR1)=-3.765,P=0.001;t_(MNGR1)=-13.274,t_(HNGR1)=-15.405,均P=0.000)、TNF-α水平较低(t_(MNGR1)=-9.221,t_(HNGR1)=-10.523,均P=0.000)、MMP-9水平较低(t_(LNGR1)=-2.934,P=0.006;t_(MNGR1)=-4.343,t_(HNGR1)=-9.991,均P=0.000),差异均有统计学意义。(3)视神经形态:与CG比较,MG组大鼠视神经出现明显的出血和血管扩张、轴突肿胀以及胶质细胞增生,但LNGR1、MNGR1、HNGR1组以上情况较MG随药物剂量较高改善。与CG组比较,MG组大鼠视神经横截面积较低(t=-27.680,P=0.000),胶质细胞数较高(t=5.501,P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠视神经横截面积较大(t_(LNGR1)=6.241,t_(MNGR1)=7.853,t_(HNGR1)=10.248,均P=0.000),HNGR1组胶质细胞数较低(t_(HNGR1)=-3.097,P=0.004),差异均有统计学意义。(5)IL-8与miR-181的靶向关系:miR-181与IL-8存在结合位点。(6)miR-181/IL-8/TLR4通路蛋白:与CG组比较,MG组大鼠视神经miR-181、IL-8、TLR4表达较高(t_(miR-181)=33.870,t_(IL-8)=62.851,t_(TLR4)=20.802,均P=0.000);与MG组比较,LNGR1、MNGR1、HNGR1组大鼠视神经miR-181表达较低(t_(LNGR1)=13.476,t_(MNGR1)=14.420,t_(HNGR1)=11.187,均P=0.000)、IL-8表达较低(t_(LNGR1)=2.460,P=0.019;t_(MNGR1)=19.230,t_(HNGR1)=46.383,均P=0.000)、TLR4表达较低(t_(LNGR1)=8.350,t_(MNGR1)=14.185,t_(HNGR1)=11.502,均P=0.000),差异均有统计学意义。结论NGR1可降低DON大鼠血糖,改善视神经病理状况,其机制可能与调控视神经miR-181/IL-8/TLR4通路及相关炎症有关。

畅枢汤在大鼠痤疮模型中对TLR4/TNFa/IL-1信号通路和CK10的影响

目的 探索畅枢汤在大鼠痤疮模型中,对TLR4/TNFa/IL-1信号通路和角化标志物CK10的影响。方法 构建大鼠痤疮模型,实验组给予畅枢汤7.71 g/(kg·d)灌胃给药,对照组分别给予异维A酸胶囊3.125 mg/(kg·d)及畅枢汤+异维酸胶囊灌胃给药,设立空白组和模型组。连续干预6周,组织标本取材,提取总RNA及总蛋白。免疫组化、qRT-PCR和WB检测TLR4、NF-κB、IL-1、CK10的表达。结果 大鼠痤疮模型构建成功。TLR4、NF-κB、IL-1、CK10基因及蛋白在各组之间有不同程度的表达,模型组的表达量最高,各药物干预组表达量较模型组明显下降,异维A酸联合畅枢汤组表达量下降最明显。畅枢汤组(TLR4:0.20±0.03,NF-κB:0.18±0.04,IL-1:0.16±0.01,CK10:0.15±0.02)明显低于模型组(TLR4:0.25±0.04,NF-κB:0.23±0.02,IL-1:0.21±0.03,CK10:0.18±0.03)(P<0.05),高于空白对照组(TLR4:0.09±0.02,NF-κB:0.11±0.02,IL-1:0.11±0.01,CK10:0.08±0.01)和畅枢汤与异维A酸胶囊联合用药组(TLR4:0.12±0.01,NF-κB:0.13±0.01,IL-1:0.12±0.01,CK10:0.11±0.01)(P<0.05)。结论 大鼠痤疮模型中,畅枢汤可降低TLR4、NF-κB、IL-1的含量、下调CK10的表达;同时与异维A酸胶囊联合时,TLR4、NF-κB、IL-1含量的降低和CK10的表达下调更为显著;初步推测畅枢汤是通过抑制TLR4/TNFa/IL-1信号通路关键成员,进而下调CK10的表达。

TLR4mAb对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜中促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的影响

目的探讨TLR4单克隆抗体(toll like receptor4monoclonal antibodies,TLR4mAb)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的急性期溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠肠黏膜的促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的影响。方法30只BALB/c小鼠分为A-E组,分别为对照组、模型组以及低、中、高剂量干预组。A组小鼠饮用蒸馏水7d;B-E组小鼠仅饮用5%DSS水溶液7d以产生急性期溃疡性结肠炎模型。造模开始的同时,3组干预组小鼠分别给予低、中、高剂量TLR4mAb腹腔内注射,对照组及模型组给予腹腔内注射生理盐水,以观察TLR4mAb的干预作用。观察指标包括疾病活动指数(disease activity index,DAI)、结肠组织病理学评分(histopathological score,HPS)。造模及干预7d后处死小鼠,RT-PCR法检测各组肠黏膜TNF-α、IFN-γ、IL-1β的mRNA表达。结果(1)与对照组相比,模型组小鼠结肠黏膜DAI及HPS明显增高(P<0.01)。与模型组相比,在使用TLR4mAb干预后低、中、高剂量组DAI和HPS均有不同程度的缓解,但无明显剂量依赖关系。(2)与模型组相比,在使用TLR4mAb后炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β在小鼠结肠黏膜中的表达均有不同程度的降低,并呈剂量依赖关系。结论TLR4mAb可能通过下调小鼠结肠黏膜促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β的mRNA表达而发挥其干预作用。

IL-1β通过诱导TLR4表达增强协同LPS刺激引起的狼疮小鼠B细胞的功能异常

目的:探索IL-1β对SLE模型小鼠脾脏B细胞功能的影响。方法:磁珠分选纯化正常小鼠及SLE模型小鼠脾脏B细胞。用不同浓度的IL-1β或LPS联合IL-1β处理分选的B细胞后,CCK8检测B细胞增殖情况,流式细胞仪检测B细胞的活化及TLR4的表达,实时定量PCR方法分析细胞因子的表达。结果:获得的B细胞纯度高达95%。IL-1β不影响正常小鼠和SLE小鼠脾脏B细胞的增殖,也不影响共刺激分子CD80和CD86的表达。但IL-1β可上调SLE小鼠B细胞中CD40、CD69、IL-6及IL-10的表达。进一步,IL-1β与LPS协同可增强SLE小鼠B细胞的CD40及CD69表达。IL-1β还可上调SLE小鼠B细胞中TLR4的表达。结论:IL-1β可能通过诱导TLR4表达来增强LPS刺激引起的SLE小鼠的B细胞功能异常,提示控制感染和抑制炎症可能达到减缓SLE病程的目的。

CC-K8抑制LPS诱导的大鼠肺间质巨噬细胞TLR4及IL-1β的表达

目的观察八肽胆囊收缩素(cholecystokininoctapeptide ,CCK 8)对外源性脂多糖(lipopolysaccharide ,LPS)激活大鼠肺间质巨噬细胞(pulmonaryinterstitialmacrophages,PIMs)Toll样受体4 (Tolllikereceptor4 ,TLR4 )及IL 1β表达的影响,探讨CCK- 8的抗炎作用机制。方法分离培养大鼠PIMs ,经LPS、CCK- 8及溶剂单独或共同孵育不同时间后,采用Northernblot、ELISA、RT PCR技术检测TLR4mRNA、IL- 1β及IL- 1βmRNA表达的变化。结果LPS(1mg/L)刺激可使PIMs中TLR4mRNA表达明显增强;随着LPS孵育时间的延长,细胞中的IL -1β含量逐渐增多,2 4h达高峰,IL- 1βmRNA表达水平同时明显升高;CCK 8可剂量依赖性抑制LPS诱导的大鼠PIMsTLR4mRNA、IL- 1β及IL 1βmRNA的表达。结论CCK 8对LPS激活的PIMsTLR4及IL- 1β表达有负性调节作用,是CCK- 8抗炎作用机制之一。

IRAK-4:TLR/IL-1R家族共同信号转导系统中的关键因子

最近发现的一种新的白细胞介素1受体相关激酶4(interleukin1receptorassociatedkinase4,IRAK4)不仅可促使白细胞介素1受体相关激酶1(IRAK1)磷酸化,还是IRAK1募集于TLR/IL1R复合物的必要条件,从而成为调控IRAK1生物活性以及内毒素胞内信号转导的最关键分子。充分认识IRAK4的作用机制,将有助于设计出新的针对感染性疾病的治疗策略。

反复缺血预适应对心肌缺血再灌注损伤大鼠TLR4和致炎细胞因子TNF-α、IL-1β的影响

目的探讨缺血预适应(ischemic preconditioning)对心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemical reperfusioninjury,MI/RI)大鼠的具体保护机制。方法18只雄性SD大鼠(350～400g)被随机分为假手术对照组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)和缺血预适应组(IP组),每组6只大鼠。成功制备上述3种动物模型后,收集动物外周血和切取病变心肌组织。采用酶标记免疫吸附法(enzyme-labeled immunosorbent assay,Elisa)测定动物外周血血清中致炎细胞因子TNF-α、IL-1β的含量;分别采用RT-PCR和Western blot技术检测大鼠病变心肌组织中Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)在转录水平和蛋白水平上的变化。结果相对于IR组,缺血预适应可有效降低心肌缺血再灌注损伤大鼠血清中致炎细胞因子TNF-α、IL-1β的水平(P<0.01);同时,相对于IR组,PC组中TLR4mRNA和蛋白水平明显下调(P<0.01)。结论缺血预适应作为心肌缺血再灌注损伤的内源性保护措施,其具体作用机制可能与其降低心肌中TLR4和外周致炎细胞因子TNF-α、IL-1β的表达有密切联系。

四神丸对溃疡性结肠炎大鼠血清TLR4、TGF-β1及IL-10的影响

目的:探讨四神丸治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、对照组及四神丸组各10只。除正常组外,其余各组均采用2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法复制UC大鼠模型,灌胃14 d后观察各组大鼠血清TLR4、TGF-β1、IL-10的变化。结果:模型组大鼠血清TLR4水平增高,TGF-β1、IL-10水平降低,与正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);四神丸组TLR4、TGF-β1、IL-10均较模型组明显改善(P<0.05或P<0.01)。结论:四神丸可调节溃疡性结肠炎大鼠TLR4-DC免疫耐受失调,可能是其治疗UC的作用机制之一。

IRAK-4在白介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLRs)介导的炎症信号通路中的关键作用

白介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4;IRAK-4)是近年来发现的参与机体先天性免疫反应过程中的关键分子。它与另外3个成员IRAK-1、IRAK-2、IRAK-M同属于IRAK家族,目前经过对IRAK-4分子的激酶活性以及其对炎症反应的正向和负向的调控作用的研究表明,IRAK-4分子联系着上下游的信号转导,在TLRs/IL-1R介导的炎症信号通路中的作用更为关键。本文就IRAK-4分子的活性、以及IRAK-4分子在TLRs/IL-1R介导的炎症信号转导通路中的作用作一综述。以期设计出针对IRAK-4特异性的药物,或者通过基因治疗手段干预IRAK-4表达,为感染控制提供新的思路,开发出新的抗炎药物。

重症肺炎肺泡灌洗液中IL-8、IL-10、HMGB1、TLR4水平与预后的相关性

目的探讨重症肺炎肺泡灌洗液中IL-8、IL-10、HMGB1、TLR4水平与预后的相关性。方法选取2017年2月至2019年2月我院收治的45例重症肺炎患者作为观察组,并选取同时间段45例慢性支气管炎患者作为对照组。两组患者均行肺泡灌洗并采集灌洗液检测IL-8、IL-10、HMGB1、TLR4水平,根据观察组患者的预后情况分为好转组(38例)与恶化组(7例),分析上述观察指标与重症肺炎患者预后的相关性。结果观察组肺泡灌洗液IL-8、IL-10、HMGB1、TLR4水平均明显高于对照组(P<0.05)。好转组肺泡灌洗液IL-8、IL-10、HMGB1、TLR4水平均明显低于恶化组(P<0.05)。相关性分析结果显示,IL-8、IL-10、HMGB1、TLR4水平与重症肺炎患者的预后均呈显著正相关(P<0.01)。结论重症肺炎肺泡灌洗液中IL-8、IL-10、HMGB1、TLR4水平与患者的预后有密切的相关性,IL-8、IL-10、HMGB1、TLR4水平越高,患者的预后越差,因此需要加强临床观察,采取积极的治疗措施,改善患者的预后。

TLR4和IL-1β在幽门螺杆菌感染的SPF级小鼠胃内的表达及其相关性

目的比较SPF级小鼠在幽门螺杆菌(Hp)感染时和用三联疗法根除Hp后胃黏膜内Toll样受体4(TLR4)和白细胞介素-1β(IL-1β)在基因和蛋白水平上的表达含量变化,分析TLR4和IL-1β之间的相关性,探讨TLR4在Hp致病机制中的作用。方法20只成功感染Hp的SPF级BALB/c小鼠随机分为两组,第1组不予任何治疗,第2组予三联疗法治疗,并将10只正常SPF级BALB/c小鼠设为第3组。取各组小鼠的胃黏膜标本,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印记(Western blotting)的方法半定量检测TLR4、IL-1β在基因和蛋白水平上的表达。结果①在基因和蛋白水平,第2组小鼠胃黏膜内TLR4和IL-1β的表达均较第1组明显降低(P<0.05)。②TLR4与IL-1β呈正相关。结论TLR4参与了Hp的致病机制,并且与IL-1β呈正相关,TLR4通路与下游的IL-1β炎症因子的激活相关。

基于TLR4/IL-1β信号通路探讨阿是穴刺血治疗痛风性关节炎疗效观察

目的基于Toll样受体4/白细胞介素1β(TLR4/IL-1β)信号通路,观察阿是穴刺血干预痛风性关节炎(GA)临床疗效并探讨作用机制。方法 80例GA患者随机分成观察组和对照组,每组40例。观察组给予阿是穴刺血治疗,对照组给予西药常规治疗。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测外周血浆IL-1β、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)水平;实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血单个核细胞(PBMCs)TLR4及IL-1bmRNA表达水平;流式细胞术检测炎性反应指标C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、尿酸(UA)的变化。结果观察组总有效率为87.5%,优于对照组的77.5%(P<0.05)。两组治疗前CRP、ESR、IL-1β、IL-6、IL-8、UA水平及PBMCs中TLR-4、IL-1bmRNA表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后CRP、ESR、IL-1β、IL-6、IL-8、UA水平及PBMCs中TLR-4、IL-1β mRNA表达水平较对照组显著下降(P<0.05),两组UA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿是穴刺血能有效改善GA患者临床症状,调节患者免疫应答、阻止炎症反应,其作用的靶点可能是通过调控TLR4/IL-1β信号通路而发挥作用。

槲皮素对实验性肺结核病小鼠TLR4、TRAF6、IL-1β表达影响的研究

目的:探讨槲皮素对肺结核小鼠Toll样受体4 (Toll-like receptor 4,TLR4)、肿瘤坏死因子相关因子-6 (Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)表达的影响。方法:120只昆明系雌性小鼠,随机选取15只为空白组,其余105只建立肺结核病小鼠模型。选取模型制备成功的60只小鼠分为模型组、槲皮素低、中、高剂量组,每组15只,低、中、高剂量组分别灌胃0.4 mL浓度分别为1 mg/mL,2.5 mg/mL,5 mg/mL的槲皮素,空白组及模型组给予等量PBS,于给药8天后,检测各组小鼠体征变化,HE染色观察肺脏病理变化,用免疫组织化学法,蛋白免疫印迹法和实时荧光定量检测肺脏组织TLR4、TRAF6、IL-1β表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠皮毛暗淡无光,精神萎靡,懒动,且体质量增加量显著下降(P <0.05),肺脏炎症明显增加,TLR4、TRAF6、IL-1β蛋白及m RNA表达量显著上升(P <0.05);与模型组比较,槲皮素各剂量组能显著改善小鼠皮毛及精神状态,且体质量增加量显著增加(P <0.05),肺脏炎症明显改善;TLR4、TRAF6、IL-1β蛋白及mRNA表达量显著下调(P <0.05),且呈现药物剂量依赖性(P <0.05)。结论:槲皮素可明显减轻肺结核病造成的肺脏炎症反应,推测其机制为槲皮素抑制TLR4、TRAF6的高表达,阻碍相关炎症信号通路激活从而减少相关炎症因子的释放,抑制炎症反应,减轻组织病理损伤,起免疫调节抗感染作用。

苏钟猪TLR4多态性及编码区C1027A功能分析

【目的】研究苏钟猪TLR4的多态性及其编码区第1 027 bp处突变对TLR4蛋白功能的影响。【方法】采用PCR-SSCP的方法检测TLR4在苏钟猪中的多态性并利用real-time PCR方法检测不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞经脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导后,TLR4及促炎症因子TNF-α、IL-1β表达量的变化情况,探讨该处突变对TLR4识别LPS的影响。【结果】①共检测到3个突变:G962A、C1027A、G960A,其中前两个为有义突变,且C1027A突变可引起编码氨基酸性质的改变;②LPS能快速诱导猪肺泡巨噬细胞中TLR4及促炎症因子TNF-α和IL-1β表达水平上调且TLR4编码区C1027A不同基因型(CC型和AC型)的猪肺泡巨噬细胞(pulmonary alveolar macrophages,PAMs)对LPS的敏感性及反应强度存在显著性差异。【结论】苏钟猪TLR4编码区的序列相对保守、多态含量较低,群体遗传变异程度较小。TLR4编码区C1027A突变能影响TLR4识别LPS的能力,等位基因C为苏钟猪抗革兰阴性菌感染的优势基因。

基于TLR4/BAFF/APRIL信号通路探讨肾炎止血丸对IgA肾病大鼠的作用机制

目的:观察肾炎止血丸对IgA肾病(IgAN)模型大鼠的治疗作用及其对TLR4/BAFF/APRIL通路的影响。方法:采用“牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖”联用法构建IgAN大鼠模型,48只大鼠随机分为正常对照组、模型组、氯沙坦钾片组[20 mg/(kg·d)]、肾炎止血丸高剂量组[3.6 g/(kg·d)]、中剂量组[1.8 g/(kg·d)]、低剂量组[0.9 g/(kg·d)],每组8只,均连续给药6周。留取尿液、血液、肾组织标本,分别进行尿红细胞计数、尿白蛋白检测;ELISA法检测大鼠血清Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、B细胞活化因子(BAFF)、增殖诱导配体(APRIL)、核心1β1,3半乳糖基转移酶伴侣蛋白(Cosmc)、半乳糖缺陷型IgA1(Gd-IgA1)、白介素6(IL-6)水平;光镜观察各组大鼠肾组织病理变化。结果:①尿红细胞、尿蛋白变化:与模型组比较,各给药组减少明显(均P<0.01);与阳性组组比较,肾炎止血丸中剂量组、高剂量组减少明显(均P<0.01);与低剂量组比较,肾炎止血丸中剂量组、高剂量组减少明显(均P<0.01)。②TLR4、NF-κB、BAFF、APRIL、Cosmc、Gd-IgA1、IL-6:与模型组比较,各给药组TLR4、NF-κB、BAFF、APRIL、Gd-IgA1、IL-6减少明显(均P<0.01),Cosmc升高明显(P<0.01);与阳性组比较,肾炎止血丸低剂量组NF-κB、BAFF减少明显(均P<0.01),中剂量组TLR4、Gd-IgA1减少(均P<0.05)及IL-6减少明显(P<0.01),高剂量组TLR4、NF-κB、BAFF、APRIL、Gd-IgA1、IL-6减少明显(均P<0.01),Cosmc升高明显(P<0.01);与低剂量组比较,中剂量及高剂组TLR4、NF-κB、Gd-IgA1、IL-6减少明显(均P<0.01),中剂量组BAFF减少明显(P<0.01),高剂量组BAFF减少(P<0.05),高剂量组APRIL减少明显(P<0.01)及Cosmc升高明显(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组治疗后NF-κB、BAFF、APRIL、Gd-IgA1、IL-6减少明显(均P<0.01),Cosmc升高明显(P<0.01)。③病理学变化:与模型组比较,各给药组IgA、C3的免疫荧光累积光密度值(IOD)减少明显(均P<0.01);与阳性组比较,高剂量组C3 IOD减少明显(P<0.01);与低剂量组比较,高剂量组C3 IOD减少明显(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组IgA IOD减少(P<0.05),高剂量组C3 IOD减少明显(P<0.01)。结论:肾炎止血丸能够改善IgAN大鼠蛋白尿,减轻血尿及肾组织病理损伤;其作用机制可能与调控TLR4/BAFF/APRIL通路有关。

血清TREM-1、TLR4及IL-37水平与变应性鼻炎患者T淋巴细胞亚群的关系研究

目的:探讨血清髓系细胞触发受体-1(TREM-1)、Toll样受体4(TLR4)及白细胞介素-37(IL-37)水平与变应性鼻炎(AR)患者T淋巴细胞亚群的关系研究。方法:选取2021年3月~2023年3月南京医科大学附属淮安第一医院和江苏省苏北人民医院收治的AR患者100例纳入AR组,另选取同期体检健康志愿者100名纳入对照组,根据病情程度将AR患者分为中重度AR组63例和轻度AR组37例。采用酶联免疫吸附法与流式细胞术检测血清TREM-1、TLR4、IL-37水平与外周血T淋巴细胞亚群。采用Pearson/Spearman分析AR患者血清TREM-1、TLR4、IL-37水平与外周血T淋巴细胞亚群的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TREM-1、TLR4、IL-37水平对AR的诊断价值。结果:与对照组比较,AR组血清TREM-1、TLR4和外周血CD8^(+)比例升高,血清IL-37和外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低(P<0.05)。与轻度AR组比较,中重度AR组血清TREM-1、TLR4和外周血CD8^(+)比例升高,血清IL-37和外周血CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)降低(P<0.05)。Pearson/Spearman相关性分析显示,AR患者血清TREM-1、TLR4水平与外周血CD3^(+)、CD4^(+)CD4^(+)/CD8^(+)呈负相关,与外周血CD8^(+)比例呈正相关(P<0.05);血清IL-37水平与外周血CD3^(+)CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)呈正相关,与外周血CD8^(+)比例呈负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清TREM-1、TLR4、IL-37水平联合诊断AR的曲线下面积为0.960,大于血清TREM-1、TLR4、IL-37水平单独预测的0.851、0.857、0.844。结论:AR患者血清TREM-1、TLR4水平升高,IL-37水平降低,与T淋巴细胞亚群异常密切相关,检测血清TREM-1、TLR4、IL-37水平有助于评估AR发病和病情进展。

槐果碱对SNI致神经病理性疼痛小鼠脊髓组织TLR4/p38 MAPK的影响

目的观察槐果碱(sohpocarpine,SC)对坐骨神经分支保留性损伤(spared nerve injury,SNI)致小鼠神经病理性疼痛的缓解作用,并探讨其部分作用机制。方法将60只♂ICR小鼠随机分为6组,分别为:假手术组(control)、神经病理性疼痛模型组(model)、普瑞巴林阳性对照组(SNI+普瑞巴林10 mg·kg^(-1))、槐果碱高、中、低剂量组(SNI+sophocarpine 40、20、10 mg·kg^(-1))。采用SNI法建立小鼠神经病理性疼痛动物模型,于术前1 d、术后d 7(给药前d 1)及给药后1、3、5、7 d测定小鼠机械缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)、热刺激缩足反应潜伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)及冷缩足反射次数(cold withdrawal times,CWT);采用RT-PCR和Western blot法检测槐果碱对SNI损伤小鼠脊髓组织TLR4、p38 MAPK、IL^(-1)β、TNF-αm RNA及蛋白表达的影响。结果与假手术组比较,SNI致神经病理性疼痛模型组小鼠术后PWMT明显降低、PWTL明显缩短、CWT明显增多;小鼠脊髓组织p38 MAPK、TLR4、TNF-α、IL^(-1)βm RNA和蛋白表达水平明显上调。与模型组小鼠比较,SNI+槐果碱40 mg·kg^(-1)组小鼠给药后PWMT明显升高、PWTL延长、CWT减少;小鼠脊髓组织p38MAPK、TLR4、TNF-α、IL^(-1)βm RNA和蛋白表达水平明显下调。结论槐果碱对SNI致神经病理性疼痛有较好的缓解作用,其机制可能与其下调TLR4、p38 MAPK、IL^(-1)β及TNF-α表达水平有关。

TLR4在益生菌治疗小鼠Hp感染中的作用

目的比较BALB/c小鼠在幽门螺旋杆菌(Hp)感染后和用益生菌治疗后胃黏膜内Toll样受体4(TLR4)、MyD88和IL-1β在基因和蛋白水平上的表达变化,探讨Toll样受体4信号通路在益生菌治疗Hp感染中的作用。方法 60只感染Hp的BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予治疗,第2组予抗生素三联疗法治疗,第3组予乳酸杆菌治疗,另设20只正常小鼠为对照组。取各组小鼠的胃黏膜标本,用RT-PCR和Western blotting的方法半定量检测TLR4、MyD88、IL-1β在基因和蛋白水平上的表达。结果①正常小鼠胃黏膜内无TLR4、MyD88和IL-1β表达。②益生菌治疗组小鼠的TLR4、MyD88和IL-1β均高于抗生素治疗组,但二者均低于Hp感染组。③各组小鼠TLR4与MyD88的表达均呈正相关。结论 TLR4信号通路参与了Hp的致病机制和益生菌治疗Hp的机制,其信号转导均可能是通过MyD88途径。

辛伐他汀对大鼠脑出血后TLR4介导的炎症损伤的干预作用

目的:探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对大鼠脑出血后Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)介导的脑内炎症损伤的干预作用。方法:采用注入自体血方法复制脑出血(intralerebral hemorrhage,ICH)模型,随机分为假手术组、模型组和干预组。Garcia等方法进行神经功能障碍评分;干湿重法检测脑组织含水量;免疫组化SP法检测TLR4和IL-1β蛋白的表达;免疫印迹检测TLR4和IL-1β蛋白的表达水平。结果:与假手术组比较,ICH模型组脑组织含水量明显升高(P<0.05),TLR4和IL-1β蛋白的表达明显增加(P<0.05);辛伐他汀干预后,TLR4表达量下降,IL-1β蛋白的表达及脑含水量明显下调,与脑神经功能障碍评分上调相一致。结论:大鼠脑出血后引起出血周围脑组织炎症损伤,辛伐他汀可能通过减轻TLR4介导的炎症损伤,改善神经功能恢复,起到神经保护作用。