LPS/TLR4信号途径在非酒精性脂肪性肝病中的作用

脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号途径参与非酒精性脂肪性肝病的发生发展,非酒精性脂肪性肝病肝脏中LPS受体TLR4表达上调,诱导炎症反应,促使肝细胞损伤.非酒精性脂肪性肝病时肠道菌群失调,LPS产生增多,肠壁通透性增强,形成肠源性内毒素血症,LPS上调Kupffer细胞TLR4的表达,分别通过MyD88-依赖途径和MyD88-不依赖途径,最终激活核因子B,诱导强力的炎症反应,从而介导肝损伤.本文就LPS/TLR4信号途径的构成、调节方式及与非酒精性脂肪性肝病的关系做一综述.

基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号途径研究慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉发病过程中炎性因子的表达

目的探讨基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号研究慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyp,CRSwNP)发病过程中炎性因子的表达。方法HE检测CRSwNP中的嗜酸细胞;免疫组织化学、qRT-PCR和Western blot检测CRSwNP中HMGB1的表达;qRT-PCR检测CRSwNP中IL-4和IL-13的表达;ELISA检测HMGB1(HMGB1/TLR4通路)对人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13表达的影响。结果CRSwNP中嗜酸细胞浸润增加(P<0.001),HMGB1表达上调(P<0.001),IL-4 mRNA和IL-13 mRNA的表达增加(P均<0.01);HMGB1使人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的表达增加(P均<0.001);与HMGB1(100 ng/ml)孵育组比较,加入抗TLR4抗体孵育后人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的表达水平降低(P均<0.001)。结论CRSwNP组织中HMGB1高表达。脂多糖刺激人鼻黏膜上皮细胞中HMGB1的产生,进而通过TLR4上调人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的产生。

Arl8a与树突状细胞TLR4-TRIF信号途径的相关性

目的 探讨ADP-核糖基化因子样8A（ADP-ribosylation factor-like 8A,Arl8a）与树突状细胞（dendritic cell,DC）中TLR4-TRIF-GEFH1-RhoB信号途径的相关性.方法 从野生型和TRIF敲除基因（TRIFKO）小鼠中分离和培养DC,LPS刺激后收集细胞扩增总cDNA,通过实时定量PCR检测Arl8a的mRNA表达.然后用鸟嘌呤核苷酸交换因子H1（GEFH1）的siRNA转染来自野生型小鼠的DC,进行LPS刺激或未刺激处理并检测Arl8a的mRNA表达.再用GEFH1和Arl8a的siRNA转染DC,LPS刺激后检测RhoB的mRNA表达.结果 在LPS刺激后,Arl8a的mRNA表达在野生型小鼠的DC中增加,在TRIFKO小鼠的DC中则未被上调.此外,在野生型小鼠中Arl8a的mRNA上调可被GEFH1的siRNA明显抑制（P＜0.01）.而Arl8a和GEFH1的siRNA均能显著抑制RhoB的mRNA表达（P＜0.01）.结论 Arl8a的表达与DC的TRL4-TRIF途径有关,并且在转录水平与GEFH1和RhoB相关.

Arl8a与树突状细胞TLR4两条下游途径的相关性

为探讨Arl8a(ADP-ribosylation factor-like 8A)与树突状细胞(dendritic cells,DCs)TLR4两条下游信号途径的关系,用Arl8a和GEFH1(guanine nucleotide-exchange factors H1)的siRNA转染来自野生型小鼠的DC,进行LPS刺激或未刺激处理后,检测TLR4-TRIF途径中RhoB靶蛋白MYH9的mRNA表达。然后从野生型和IFNα/β受体基因敲除小鼠中分离和培养DC,LPS刺激后收集细胞扩增总cDNA,通过实时定量PCR检测Arl8a的mRNA表达。再用Arl8a的siRNA转染DC,LPS刺激后检测IL-6和IL-12a的mRNA表达。结果表明,Arl8a和GEFH1的siRNA均能显著抑制LPS介导的MYH9的mRNA表达(P<0.01),而且在LPS刺激后,Arl8a的mRNA表达在野生型小鼠的DC中增加,在IFNα/β受体基因敲除小鼠的DC中则未被上调。此外,Arl8a的siRNA对IL-6和IL-12a的mRNA表达没有显著效应。以上结果提示,在转录水平,Arl8a和GEFH1均对MYH9的表达有影响,并且Arl8a基因的表达与TRIF-IFNβ途径有关,Arl8a可能与MyD88途径中细胞因子IL-6和IL-12a的表达无关。

GEFH1在LPS诱导树突细胞IL-6和IL-12a表达中的作用

为探讨GEFH1与树突细胞(dendritic cell,DC)TLR4两条下游信号途径的关系,从野生型和TRIF基因、IFNα/β受体基因敲除小鼠中分离和培养DC,LPS或IL-6刺激后收集细胞制备总cDNA,通过实时定量PCR检测GEFH1的mRNA表达。再用GEFH1的siRNA转染DC,LPS刺激后检测IL-6和IL-12a的mRNA表达。结果,在LPS刺激后,GEFH1的mRNA表达在野生型小鼠的DC中显著增加,在TRIF基因、IFN-α/β受体基因敲除小鼠的DC中则未被上调。此外,GEFH1siRNA处理后,IL-6和IL-12a的mRNA表达均上升显著(P>0.05),而在IL-6刺激的野生型小鼠的DC中,GEFH1的mRNA没有明显改变。以上结果提示在转录水平,TRIF-IFNβ信号通路、而非IL-6可诱导GEFH1基因表达。GEFH1可能对MyD88途径中细胞因子IL-6和IL-12a的表达有负调节作用。

Stathmin mRNA在树突状细胞中的表达及其意义

目的探讨StathminmRNA在树突状细胞中的表达及其意义。方法分离和培养小鼠的树突状细胞,用细菌脂多糖(LPS)刺激0h、3h、12h后,收集细胞,并提取细胞总RNA,经RT-PCR反转录为cDNA,再通过荧光定量实时PCR检测Stathmin的mRNA水平。结果定量PCR标准曲线的相关系数为-0.99,且融解曲线峰单一,表明已成功建立了准确、特异的实时定量PCR方法。经LPS刺激后,树突状细胞Stathmin的mRNA表达水平降低,随时间的延长而递减(P<0.01)。结论树突状细胞的Toll样受体4信号途径与Stathmin的表达相关。

有氧运动可提高脑缺血大鼠的神经功能和认知功能

为了揭示有氧运动对脑缺血大鼠神经功能和认知功能的改善作用机制,本研究建立了大鼠中脑动脉闭塞手术(MCAO)诱导缺血性中风大鼠模型。将大鼠在跑步机上以10 m/min的速度运动30 min,每天运动1次,共运动4周。用2,3,5-三苯四唑氯化物(TTC)染色评估MCAO手术是否成功建立。通过神经功能缺损评分来考察大鼠的神经功能、Morris水迷宫实验考察大鼠的认知功能、免疫荧光染色检测大鼠脑缺血半影区中的神经发生和血管生成。此外,通过蛋白质印迹法测定缺血半影区中的TLR4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、NLRP3和IL-1β的蛋白水平。结果表明,有氧运动不仅降低了大鼠的脑梗死面积和神经功能缺损评分(p<0.05),还降低了大鼠的逃避潜伏期,提高了穿越平台次数(p<0.01)及增加了缺血性中风后新生神经元的数量和脑微血管密度(p<0.05)。此外,有氧运动下调了大鼠脑缺血半影区中TLR4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、NLRP3和IL-1β的蛋白水平(p<0.05)。研究发现,有氧运动可抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号传导途径来促进大鼠脑缺血半影区的神经发生和血管生成,从而提高脑缺血大鼠的神经功能和认知功能。