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人TLR4胞外段的克隆、表达及功能活性分析
被引量:
2
1
作者
王凡平
王明永
+5 位作者
孙瑞利
郭庆合
张婧婧
杨景瑞
张新富
段巨洪
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第9期818-822,共5页
目的:获得高纯度、高活性的人TLR4胞外段蛋白。方法:采用PCR方法从含人TLR4 cDNA的质粒pCDNA3-TLR4中扩增人TLR4胞外段基因片段,将其插入载体pET32a并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白。SDS-PAGE和免...
目的:获得高纯度、高活性的人TLR4胞外段蛋白。方法:采用PCR方法从含人TLR4 cDNA的质粒pCDNA3-TLR4中扩增人TLR4胞外段基因片段,将其插入载体pET32a并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白。SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,ELISA和FCM鉴定其功能活性。结果:获得1 911 bp的人TLR4胞外段基因片段,构建成重组表达载体pET32a-TLR4并在大肠杆菌中表达。TLR4-Trx融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的12%,其纯度较高。ELISA和FCM检测显示,TLR4-TrX融合蛋白不仅与配体LPS结合,还能竞争性抑制LPS与THP1细胞结合。结论:所获TLR4-Trx融合蛋白纯度高,功能活性好,为进一步研究TLR相关的免疫调节机制提供物质基础。
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关键词
tlr4胞外段蛋白
基因克隆
重组表达
功能活性
下载PDF
职称材料
题名
人TLR4胞外段的克隆、表达及功能活性分析
被引量:
2
1
作者
王凡平
王明永
孙瑞利
郭庆合
张婧婧
杨景瑞
张新富
段巨洪
机构
新乡医学院医学检验系
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第9期818-822,共5页
基金
河南省科技攻关计划项目(102102310154)
河南省教育厅自然科学研究项目(2010B310007)
新乡医学院重点学科开放基金(ZD200928)资助项目
文摘
目的:获得高纯度、高活性的人TLR4胞外段蛋白。方法:采用PCR方法从含人TLR4 cDNA的质粒pCDNA3-TLR4中扩增人TLR4胞外段基因片段,将其插入载体pET32a并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。用Ni2+-NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白。SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,ELISA和FCM鉴定其功能活性。结果:获得1 911 bp的人TLR4胞外段基因片段,构建成重组表达载体pET32a-TLR4并在大肠杆菌中表达。TLR4-Trx融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的12%,其纯度较高。ELISA和FCM检测显示,TLR4-TrX融合蛋白不仅与配体LPS结合,还能竞争性抑制LPS与THP1细胞结合。结论:所获TLR4-Trx融合蛋白纯度高,功能活性好,为进一步研究TLR相关的免疫调节机制提供物质基础。
关键词
tlr4胞外段蛋白
基因克隆
重组表达
功能活性
Keywords
Extracellular-
tlr
4
protein
Gene cloning
Expression
Functional activity
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人TLR4胞外段的克隆、表达及功能活性分析
王凡平
王明永
孙瑞利
郭庆合
张婧婧
杨景瑞
张新富
段巨洪
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
2
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