基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路探讨黄连解毒汤对冠状动脉性心脏病小鼠心肌保护作用

目的 研究基于Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路探讨黄连解毒汤对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)小鼠心肌保护作用。方法 50只6周的雄性SD小鼠中取10只作正常对照组,其余小鼠给予高脂饮食建立CHD模型。采用随机数字表法将40只模型小鼠分为模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组,每组各10只。黄连解毒汤低、中、高剂量组每日分别以10、20、40 g/kg剂量进行灌胃,每日1次,持续6周;正常组、模型组每日给予等量蒸馏水灌胃。干预后采用生化法检测各组总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)水平,酶联免疫吸附试验检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛、内皮素水平;采用苏木精-伊红染色法观察小鼠心肌细胞病理形态,蛋白质印迹法检测心肌组织中TLR4、NF-κB、NLRP3的表达。比较各组小鼠血脂、心肌组织中抗氧化相关指标和TLR4、NF-κB、NLRP3的表达。结果 模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组血脂水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低剂量组与模型组血脂水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);黄连解毒汤中、高剂量组总胆固醇、甘油三酯、LDL水平均低于模型组,HDL水平高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组心肌组织中SOD水平均低于对照组,丙二醛、内皮素水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组SOD水平均高于模型组,丙二醛、内皮素水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组心肌纤维排列整齐,横纹清晰且细胞完整,无细胞肿胀、炎症浸润等;模型组心肌纤维排列紊乱,结构发生异常,有严重细胞肿胀、炎症浸润;黄连解毒汤低、中、高剂量组未见心肌纤维断裂,黄连解毒汤中、高剂量组细胞肿胀和炎症浸润情况优于黄连解毒汤低剂量组,黄连解毒汤高剂量组优于黄连解毒汤中剂量组。模型组、黄连解毒汤中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);黄连解毒汤低、中、高剂量组TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达量均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。且黄连解毒汤各剂量组中以上指标变化呈剂量依赖性。结论 黄连解毒汤能降低CHD小鼠血脂水平,保护心肌细胞,其能够通过下调组织TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白表达以调节血脂水平并改善心肌功能,且黄连解毒汤的效果随着剂量的增加而增强。

款冬花多糖调控miR-889-3p/TLR4对IL-6诱导的乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

[目的]探讨款冬花多糖对白细胞介素-6(IL-6)诱导的乳腺癌细胞恶性行为作用机制。[方法] IL-6诱导人乳腺癌细胞MCF-7后,不同浓度的款冬花多糖处理。转染miR-NC、miR-889-3p mimics的MCF-7细胞经IL-6处理;转染NC-inhibitor、miR-889-3p-inhibitors的MCF-7细胞经款冬花多糖与IL-6处理;噻唑蓝(MTT)、平板克隆形成以及TranswellTM实验分析细胞增殖、迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-889-3p、Toll样受体4(TLR4)的表达量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、TLR4蛋白表达量;双荧光素酶报告实验验证miR-889-3p与TLR4的靶向关系。[结果]款冬花多糖可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖(P<0.05)、迁移及侵袭能力(P<0.05),而提高miR-889-3p的表达(P<0.05),呈剂量依赖性;TLR4是miR-889-3p的靶基因,miR-889-3p可靶向调控TLR4的表达;转染miR-889-3p mimics可降低IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.05);转染miR-889-3p-inhibitors可恢复款冬花多糖对IL-6诱导的MCF-7细胞增殖、迁移及侵袭。[结论]款冬花多糖可通过调节miR-889-3p/TLR4表达而抑制IL-6诱导的乳腺癌细胞恶性行为。

基于TLR4/NF-κB信号通路探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠肠组织损伤及肠道菌群的影响

目的 探究壮药双路通脑方对缺血性脑卒中大鼠脑组织Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路及肠组织损伤、肠道菌群的影响。方法 将50只大鼠建立缺血性脑卒中模型,随机分为低(7.16g/kg)、中(14.33 g/kg)、高(28.66 g/kg)剂量双路通脑方组和模型(M)组,并设假手术(S)组,每组10只。制作模型前30 min予以相应剂量双路通脑方颗粒溶液灌胃,在大鼠成模清醒后1 h给予该颗粒灌胃,连续6 d,每天2次。M组和S组同步灌胃无菌水。2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)法测量脑梗死体积;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、干扰素(INF)-γ水平;Western印迹检测脑TLR4/NF-κB通路蛋白及结肠密封蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1、紧密连接蛋白(ZO)-1蛋白表达;苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织结构变化;16 S rDNA扩增测序法分析肠道菌群构成。结果 M组脑梗死比例较S组显著增加(P<0.05);中、高剂量双路通脑方组脑梗死比例较M组显著降低(P<0.05),且高剂量双路通脑方组最低,后续以高剂量28.66 g/kg进行研究。与S组相比,M组结肠黏膜结构损伤,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、髓样细胞分化因子(MyD)88蛋白及p-核因子κB抑制蛋白(IκB)/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平显著较高,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较低(均P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可改善结肠黏膜结构,TNF-α、IL-6、INF-γ、TLR4、MyD88蛋白及p-IκB/IκB、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平明显降低,ZO-1、Occludin、Claudin-1蛋白水平显著较高(P<0.05)。肠道菌群分析显示,与S组相比,M组菌群多样性和丰度降低,在门水平,M组厚壁菌门丰度和F/B值明显升高,而拟杆菌门明显降低(P<0.05);在属水平,M组瘤球菌属、拟杆菌属等丰度明显较高,双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度明显较低(P<0.05)。与M组相比,双路通脑方治疗可上调菌群多样性和丰度,明显提高拟杆菌门丰度,提高降低厚壁菌门丰度和F/B值,明显增加双歧杆菌属、乳杆菌属等丰度,明显降低艾克曼菌属等丰度(均P<0.05)。结论 双路通脑方可重塑肠道菌群,恢复肠道屏障,并抑制脑TLR4/NF-κB通路活化,实现对缺血性脑卒中大鼠的治疗作用。

miR-223-3p调节TLR4/MyD88/NF-κB通路影响脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应

目的:探讨miR-223-3p对脂多糖诱导的肺癌A549细胞炎症反应的影响。方法:实验分成2部分,每个部分分为2组,共4组:miRNA阴性对照(mimic NC)+LPS组,miR-223-3p模拟物(miR-223-3p mimic)+LPS组;miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组,miR-223-3p mimic+等量溶剂(vehicle)+LPS组。随后利用Western blot实验检测每组TLR4/MyD88/NF-κB表达水平,酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测促炎细胞因子水平,CCK-8法检测细胞活力。结果:与mimic NC+LPS组相比,miR-223-3p mimic+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。与miR-223-3p mimic+BAY11-7082+LPS组相比,miR-223-3p mimic+vehicle+LPS组的TLR4/MyD88/NF-κB蛋白表达水平低,促炎细胞因子分泌少以及细胞活力高。结论:miR-223-3p可以通过抑制TLR4/My D88/NF-κB促进A549细胞增殖、抑制促炎细胞因子的分泌,从而抑制肺癌中炎症的发生,本研究为今后临床上肺癌的治疗及药物开发提供了新策略。

脑蛋白水解物联合长春西汀通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制

目的 探究脑蛋白水解物联合长春西汀通过Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD)88/核因子(NF)-κB信号通路治疗重症高血压性脑出血的疗效及机制。方法 选择102例重症高血压性脑出血患者随机分为两组各51例,对照组给予复方丹参液治疗,实验组给予脑蛋白水解物联合长春西汀治疗。于治疗前后分别检测患者临床指标变化、神经功能评分;检测血清氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)变化;检测血清内皮功能指标人内皮素(ET)-1,血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)变化;检测TLR4/MyD88信号通路、TLR4、MyD88和核因子(NF)-κB水平。结果 治疗前两组临床指标、神经功能评分、血清SOD、GSH-Px、MDA、ET-1、VEGF、NGF、TLR4、MyD88、NF-κB水平无显著差异(P>0.05);治疗后,与对照组相比,实验组临床相关指标、美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分降低,格拉斯哥昏迷量表(GCS)评分和Barthel指数评分升高,SOD和GSH-Px水平升高,MDA、ET-1水平降低,VEGF和NGF水平升高,TLR4、MyD88、NF-κB水平降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 脑蛋白水解物联合长春西汀可改善重症高血压性脑出血患者神经功能,其机制与降低氧化损伤和TLR4/MyD88/核因子(NF)-κB信号通路的调控有关。

益母生化散对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎血清激素和TLR4/NF-κB信号通路相关因子的影响

试验旨在探究益母生化散对子宫内膜炎模型小鼠血清激素水平和Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路相关因子表达水平的影响。选取日龄、体型、体重相近的雌性小鼠40只,随机分为4组,每组10个重复,每个重复1只。对照组小鼠子宫灌注20μL生理盐水,模型组子宫灌注25μL脂多糖(LPS,1 g/L),药物组灌胃2.0 g/kg益母生化散,治疗组子宫灌注25μL LPS+2.0 g/kg益母生化散灌胃,连续灌胃3 d,2次/d。利用放射免疫分析法检测血清中雌二醇(E2)、孕酮(Pg)、促黄体生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)含量,ELISA方法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,RT-PCR方法检测TLR4/NF-κB信号通路相关因子Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子-κB p65(NF-κBp65)、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的表达。结果显示:与对照组相比,模型组血清E2、LH和FSH含量明显降低,而Pg含量升高,IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的分泌量及其mRNA基因表达量明显升高,TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA的表达明显上调;与模型组相比,治疗组血清E2、LH和FSH含量明显升高,Pg含量降低,IL-6、IL-8、IL-1β和TNF-α的分泌量及其mRNA基因表达明显降低,TLR4、MyD88、NF-κBp65 mRNA的表达量明显下调。研究表明,益母生化散通过调节激素含量和抑制TLR4/NF-κB信号通路相关因子水平的变化,对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎起到缓解作用。

白藜芦醇对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用:基于抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路

目的探讨白藜芦醇(RES)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠肠道屏障的保护作用及其调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的分子机制。方法将52只小鼠随机分为对照组(n=12),MPTP组(n=14),RES低剂量(MPTP+RES30)组(n=13)及高剂量(MPTP+RES90)组(n=13)。利用30 mg/kg MPTP腹腔注射7 d诱导帕金森病小鼠模型,对照组腹腔注射等剂量PBS,治疗组分别利用30 mg/kg和90 mg/kg RES干预3周。小鼠行为学测试分析RES对帕金森模型小鼠运动功能的影响。Western blotting检测RES在TLR4/MyD88/Nf-κB信号通路中发挥的作用。免疫组织化学、免疫荧光、酶联免疫吸附试验和透射电镜检测验证RES抑制炎症和保护肠屏障的作用。结果与对照组相比,MPTP组小鼠在运动功能、多巴胺能神经元数量、神经炎症、LPS和LBP水平以及肠屏障紧密连接蛋白表达水平等方面的差异具有统计学意义(P<0.05);RES治疗组与MPTP组相比,运动功能改善(P<0.01),神经元数量恢复,TH蛋白表达上调(P<0.05),GFAP、Iba-1和TLR4的表达下调,粪便、血浆中LPS、LBP水平下降(P<0.05),ZO-1、Claudin-1的表达恢复(P<0.01),结肠组织TLR4、MyD88、NF-κB表达下调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。电镜检测结果显示,与MPTP组比较,MPTP+RES30组紧密连接复合体形态正常,肠绒毛排列整齐且紧密。结论RES通过抑制肠屏障TLR4/MyD88/NF-κB信号通路介导的炎症反应修复肠屏障,从而改善MPTP诱导的帕金森病小鼠模型的运动功能障碍和神经病变,对多巴胺能神经元发挥保护作用。

miR-21-5p抑制TLR4诱导皮肤鳞状细胞癌细胞增殖

目的研究TLR4与miR-21-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响及两者的靶向关系。方法通过免疫组化法检测皮肤鳞状细胞癌组织中的TLR4表达,通过Toll样受体4(TLR4)质粒和miR-21-5p inhibitor转染过表达细胞中的TLR4和抑制细胞中miR-21-5p,通过生物信息学分析TLR4与miR-21-5p的关系,通过RT-qPCR检测细胞中TLR4和miR-21-5p的表达,通过CCK8检测A431细胞生长情况,通过Western bloting检测细胞中TLR4和增殖分子ki-67的表达。结果TLR4在皮肤鳞状细胞癌癌旁组织中表达最高,且在低分化组织中表达低于高分化组织,差异有统计学意义(P<0.05),TLR4在A431人皮肤鳞状细胞癌细胞中表达低于HaCaT人永生化角质形成细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-21-5p可能是TLR4的潜在miRNA靶基因。A431细胞过表达TLR4,发现细胞增殖抑制,差异有统计学意义(P<0.05),miR-21-5p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。A431细胞抑制miR-21-5p表达,发现细胞增殖抑制,差异有统计学意义(P<0.05),TLR4表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-21-5p与TLR4的相互调节影响A431细胞的增殖,miR-21-5p与TLR4的相互作用在皮肤鳞状细胞癌的细胞行为中发挥重要作用。

芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠对老年慢性心力衰竭患者血清Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨芪苈强心胶囊辅助治疗老年CHF对患者Gal-3、Copeptin水平及TLR4/NF-κB信号通路的影响。方法:采用随机数表法将2021年3月至2023年3月平顶山市第一人民医院112例老年CHF患者分为采用沙库巴曲缬沙坦钠(诺欣妥)治疗的常规组(n=56例)和采用芪苈强心胶囊辅助治疗的联合组(n=56例)。观察两组疗效、心功能、血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)、Copeptin水平、Toll样受体(TLR4)、核因子-κ(NF-κB)水平及不良反应。结果:治疗3个月后,联合组的临床治疗总有效率、心输出量(CO)、左心室射血分数(LVEF)高于常规组(P<0.05);联合组TLR4、NF-κB、Gal-3、Copeptin水平低于常规组(P<0.05);两组患者用药期间不良反应发生率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:芪苈强心胶囊联合沙库巴曲缬沙坦钠可调节TLR4、NF-κB水平,促进老年CHF患者心功能恢复,并抑制心肌重构,进而有效提高临床治疗疗效,且不增加患者不良反应发生风险。

恩替卡韦经治的慢性乙肝患者加用聚乙二醇干扰素α-2a对CXCL13和TLR4表达的影响

分析恩替卡韦经治的慢性乙型肝炎患者加用聚乙二醇干扰素α-2a对CXCL13和TLR4表达的影响。方法 按照纳排标准,将邯郸市传染病医院80例慢性乙型肝炎患者并纳入研究,收集时间为2023年01月-2023年12月,随机双盲分成对照组、观察组,均为40例,前组使用恩替,后组使用恩替卡韦加用聚乙二醇干扰素α-2a。观察两组患者的最终治疗成效。治疗成效评估指标为临床疗效,治疗前后肝功能、血清肝纤维化、CXCL13和TLR4表达指标。结果 HBV DNA转阴率进行组间比较,统计计算无差异(P>0.05);HBeAg转阴率、HBeAg血清转换率在组间进行比较,观察组均高于对照组;血清AST、ALT、LN、PCⅢ水平,CXCL13和TLR4表达指标在治疗后均表现出下降趋势,且观察组下降幅度较大(P0.05)。结论 药物联合治疗方式对慢性乙型肝炎患者临床效果良好,有利于疾病的转归,同时缓解肝功能受损情况,临床效果良好,且可调节CXCL13和TLR4的表达,利于免疫功能的改善。

基于TLR4/NF-κB/MLCK通路探讨百合地黄汤治疗失眠伴肠道菌群失调小鼠的机制

目的基于TLR4/NF-κB/MLCK通路研究百合地黄汤对对氯苯丙氨酸(PCPA)及多因素刺激所致失眠伴肠道菌群失调小鼠的治疗作用及机制,为临床用药提供理论依据。方法将84只KM小鼠随机分为正常组、模型组、阳性药物组(地西泮,1.38 mg·kg^(-1))、百合组(2.25 g·kg^(-1))、地黄组(2.25 g·kg^(-1))、百合地黄汤组(4.5 g·kg^(-1))。采用夹尾2 min、昼夜颠倒24 h、垫料潮湿24 h、45°鼠笼倾斜24 h、交替鼠笼24 h、禁食不禁水24 h、冷水浴3 min等多因素刺激4周结合PCPA腹腔注射2 d共同制备失眠小鼠模型。模型复制成功后,给予相应的药物治疗。采用高架十字迷宫系统观察小鼠的焦虑样行为;通过翻正反射实验观察睡眠潜伏期和睡眠持续时间;16s RNA测序法分析小鼠肠道菌群组成结构;液相色谱-质谱联用(LC-MS)检测脑和结肠γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、色氨酸(Trp)、5-羟色氨酸(5-HTP)、5-羟色胺(5-HT)的浓度变化;免疫组织化学法检测结肠中闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的表达情况;实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测结肠组织中基因白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、ZO-1、Occludin、Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测结肠上皮组织中蛋白TLR4、NF-κB、磷酸化-核因子κB(p-NF-κB)、MLCK、肌球蛋白轻链(MLC)和磷酸化-肌球蛋白轻链(p-MLC)表达情况。结果与正常组小鼠比较,模型组小鼠在高架十字迷宫中进入开臂区域的距离、在开臂区域停留的时间明显缩短(P<0.05);睡眠潜伏期明显延长、睡眠持续时间明显缩短(P<0.05);肠道菌群的丰富度、均匀度降低(P<0.01);脑内神经递质GABA、Trp、5-HTP、5-HT浓度明显降低(P<0.01),Glu浓度明显升高(P<0.01);结肠中GABA、Glu浓度明显降低(P<0.01),Trp、5-HTP、5-HT浓度明显升高(P<0.01);结肠组织炎性因子IL-1β、IL-6以及TNF-α基因表达水平明显升高(P<0.01),ZO-1、Occludin基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.01),通路中TLR4、NF-κB、MLCK基因表达水平明显升高(P<0.01),TLR4、p-NF-κB、MLCK、p-MLC蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组小鼠比较,百合地黄汤能够明显延长失眠小鼠在高架十字迷宫中进入开臂区域距离、在开臂区域停留的时间(P<0.05);明显缩短睡眠潜伏期、增加睡眠持续时间(P<0.05);肠道菌群的丰富度、均匀度升高(P<0.01);升高脑内神经递质GABA、Trp、5-HTP、5-HT浓度(P<0.05,P<0.01),降低Glu浓度(P<0.01);升高结肠中GABA、Glu浓度(P<0.01),降低Trp、5-HTP、5-HT浓度(P<0.05,P<0.01);下调IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平(P<0.01),上调ZO-1、Occludin基因和蛋白表达水平(P<0.01),下调通路中TLR4、NF-κB、MLCK基因表达水平和TLR4、p-NF-κB、MLCK、p-MLC蛋白表达水平(P<0.01)。结论百合地黄汤能够有效治疗失眠伴肠道菌群失调症状,其作用机制可能与调节脑和肠内神经递质紊乱、下调TLR4/NF-κB/MLCK信号通路表达、上调紧密连接蛋白表达、降低炎症反应,进而修复肠黏膜机械屏障有关。

当归芍药散基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对阿尔茨海默病模型大鼠神经炎症的影响研究

目的研究当归芍药散对β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)诱导的阿尔茨海默症(Alzheimer’s Disease,AD)模型大鼠神经炎症及Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法SD大鼠大脑双侧侧脑室注射Aβ1-42构建AD动物模型。实验分为假手术组、模型组、当归芍药散组和阳性药物组。假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,当归芍药散组给予当归芍药散24 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,阳性药物组给予米诺环素36 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,连续灌胃14 d。Morris水迷宫实验测定大鼠的学习记忆能力。复制模型成功后取材,HE染色检测海马神经元组织病理形态学变化,免疫荧光法检测小胶质细胞和星形胶质细胞活化情况,实时荧光定量PCR(qPCR)检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达情况,免疫印迹法(Western Blot)检测TLR4、MyD88和p-NF-κB p65蛋白的表达水平,免疫组化法检测NF-κB p65核转位的情况。结果与假手术组比较,AD大鼠学习记忆能力明显下降(P<0.01),海马组织神经元形态受损,小胶质细胞和星形胶质细胞活化增加(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平升高(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达水平明显上升,p-NF-κB p65与NF-κB p65的比值明显增高(P<0.01),NF-κB p65在胞核的表达明显增加(P<0.01)。与模型组比较,当归芍药散组和阳性对照组AD大鼠学习记忆能力明显提高(P<0.01,P<0.05),大鼠海马组织神经元形态功能明显恢复,小胶质细胞和星形胶质细胞活化减少(P<0.01),炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.01),TLR4、MyD88蛋白表达水平明显降低(P<0.01),p-NF-κB p65与NF-κB p65的比值明显降低(P<0.01),NF-κB p65在胞核的表达明显减少(P<0.01)。结论当归芍药散可能通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路抑制神经炎症反应,发挥神经保护作用。

有氧运动对CAP大鼠前列腺组织miR-155表达、TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的探讨有氧运动对慢性非细菌性前列腺炎(CAP)大鼠前列腺组织miR-155表达、Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路的影响。方法雄性健康SD大鼠随机分为正常对照组(正常组)、CAP模型对照组(模型组)、游泳运动观察组(运动组),每组10只,注射消痔灵进行大鼠造模,模型形成期7 d,后运动组进行50 min/(次·d)的游泳运动,每周运动6 d,持续28 d,正常组和模型组不进行任何运动,自由活动取食;末次运动结束后2 h处死大鼠,采用ELISA检测前列腺组织白细胞介素(IL)-8、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,Western印迹检测TLR4、NF-κB P65蛋白相对表达,实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155表达,观察各组前列腺组织病理学改变。结果28 d游泳运动结束后,与正常组比较,模型组和运动组前列腺组织内IL-8、IL-6、TNF-α、TLR4、NF-κB P65和miR-155表达均显著升高(P<0.05);与模型组比较,运动组上述各项观察指标均显著降低(P<0.05);相关分析显示,TLR4、NF-κB P65与IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关,miR-155与TLR4、NF-κB P65、IL-8、IL-6、TNF-α表达呈正相关(均P<0.01);病理观察显示,正常组前列腺组织学观察未见异常改变,模型组前列腺组织内可见腺体上皮细胞及纤维组织明显增生,间质中淋巴细胞等慢性炎症细胞浸润;与模型组比较,运动组前列腺腺体上皮细胞轻度增生,间质轻度纤维化,慢性炎症细胞浸润现象明显好转。结论有氧运动能够对CAP大鼠炎症起到缓解作用,其作用机制可能与miR-155调控TLR4/NF-κB信号通路有关。

双氢青蒿素抑制TLR4/NF-κB信号通路对高糖刺激的足细胞功能障碍的改善作用

目的探究双氢青蒿素通过调控Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对D-葡萄糖诱导的人肾小球足细胞(HGPC)炎症、增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外培养HGPC细胞,将HGPC细胞分为对照组(5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)和不同浓度双氢青蒿素组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+5、10、20、40μmol·L^(-1)双氢青蒿素),筛选出合适的双氢青蒿素作用浓度;随后将细胞分为对照组、高糖组、双氢青蒿素组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+20μmol·L^(-1)双氢青蒿素)、抑制剂组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+5μmol·L^(-1)NF-κB通路抑制剂BAY 11-7082)、双氢青蒿素+抑制剂组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+20μmol·L^(-1)双氢青蒿素+5μmol·L^(-1)BAY 11-7082)和双氢青蒿素+激活剂组(30 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+20μmol·L^(-1)双氢青蒿素+1μmol·L^(-1)NF-κB通路激活剂Prostratin),干预24 h。细胞计数试剂盒细胞8(CCK-8)法检测细胞活力;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β和IL-8的表达水平;5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测细胞的增殖能力;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和TLR4/NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果CCK-8法检测结果显示20μmol·L^(-1)双氢青蒿素对D-葡萄糖HGPC细胞活力恢复效果最好,因此选择20μmol·L^(-1)双氢青蒿素用于后续实验。与对照组比较,高糖组细胞增殖率和CyclinD1蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),炎症因子(IL-1β和IL-8)、迁移数、侵袭数、MMP-9、TLR4和磷酸化(p)-NF-κB p65蛋白相对表达量明显升高(P<0.05);双氢青蒿素组、抑制剂组、双氢青蒿素+抑制剂组及双氢青蒿素+激活剂组中双氢青蒿素和BAY11-7082明显抑制了D-葡萄糖对HGPC细胞的上述作用(P<0.05);与双氢青蒿素组比较,双氢青蒿素+抑制剂组中BAY11-7082增强了双氢青蒿素对D-葡萄糖诱导的HGPC细胞的作用(P<0.05),双氢青蒿素+激活剂组中Prostratin则削弱了双氢青蒿素对D-葡萄糖诱导的HGPC细胞的作用(P<0.05)。结论双氢青蒿素能抑制D-葡萄糖诱导的HGPC细胞迁移和侵袭,并促进其增殖,能有效改善D-葡萄糖刺激对HGPC细胞的炎症损伤,其作用机制可能与阻滞TLR4/NF-κB信号通路信号转导有关。

疏风解毒胶囊预防给药对流感病毒感染小鼠模型TLR4介导肺组织炎性损伤的影响

目的探究疏风解毒胶囊预防给药对甲型流感病毒肺炎小鼠的影响及可能的干预机制。方法采用甲型H1N1流感病毒(FM1株)滴鼻感染ICR小鼠,构建病毒性肺炎模型。每日固定时间观察各组小鼠一般状态,计算各组小鼠肺指数、抑制率和病毒载量;采用Micro-CT、苏木精-伊红染色(HE)法观察小鼠肺组织病理形态变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肺组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中TLR4、MyD88蛋白的表达含量。结果预防性给予疏风解毒胶囊可降低小鼠的肺指数,降低肺组织中病毒载量,修复流感小鼠肺部损伤,减轻肺部病变,降低肺组织中TNF-α和IL-6含量。Western blot结果显示疏风解毒胶囊可下调肺组织TLR4、MyD88蛋白的表达。结论疏风解毒胶囊预防性给药对甲型流感病毒肺炎小鼠具有保护作用,其机制与抑制病毒复制、改善肺组织病变、抑制炎症因子释放和下调肺组织中TLR4、MyD88蛋白的表达有关。

壳聚糖影响动静脉内瘘模型兔血管重塑及TLR4/NF-κB信号通路改善血流动力学的机制

目的 观察壳聚糖对动静脉内瘘模型兔血管重塑及Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路的影响,初步探讨壳聚糖改善血流动力学的机制。方法 选取48只新西兰兔建立动静脉内瘘模型,术后在血管吻合部位涂以不同剂量(0、1、5、25μg/ml)壳聚糖溶液,分为模型对照组、低剂量壳聚糖组、中剂量壳聚糖组和高剂量壳聚糖组,每组12只,另取12只作为正常对照组,8 w后检测相关指标。苏木素-伊红(HE)染色观察血管组织形态学,Western印迹检测血管组织TLR4、髓样分化因子(MyD88)、NF-κB、增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达量,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血清TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达。测定各组平均动脉压(MAP)和中心静脉压(CVP)。结果 各组TLR4、MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及mRNA表达量均有明显差异(P<0.05)。TLR4蛋白及mRNA表达量中,建模的各组明显高于正常对照组,模型对照组高于中、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。MyD88、NF-κB、PCNA蛋白及其mRNA表达量中,低、高剂量壳聚糖组和模型对照组明显高于正常对照组(均P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB、PCNA蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(均P<0.05)。低、高剂量壳聚糖组MyD88蛋白表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05);模型对照组MyD88、NF-κB蛋白表达量明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。模型对照组MyD88、NF-κB和PCNA mRNA明显高于低、中、高剂量壳聚糖组(P<0.05);低、高剂量壳聚糖组MyD88 mRNA表达量明显高于中剂量壳聚糖组(P<0.05)。TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达量与PCNA蛋白表达量呈正相关(r=0.471、0.455、0.351;P<0.05),TLR4 mRNA表达量与PCNA mRNA表达量呈正相关(r=0.395;P<0.05)。各组MAP和CVP差异均有统计学意义(P<0.001),低、高剂量壳聚糖组和模型对照组MAP和CVP均明显高于中剂量壳聚糖组和正常对照组(P<0.05),且模型对照组明显高于低、高剂量壳聚糖组(P<0.05)。结论 适宜剂量壳聚糖可以影响血管重塑,有效改善血流动力学,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路异常活化有关。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨槲皮素对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响

目的探究槲皮素介导Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB信号通路对直肠癌模型大鼠炎症反应和应激反应的影响。方法饲养SD大鼠,二甲基肼构建直肠癌模型,用不同浓度的槲皮素(25、50、75 mg/kg)处理7 d,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中白细胞介素(IL)-1β,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平,苏木素-伊红(HE)染色检测组织病理学变化,qRT-PCR和Western印迹检测TLR4、NF-κB p65的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;结果与NC组相比,Model组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α表达显著升高;结肠组织上皮细胞不规则,结构被破坏;TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达显著升高;G0/G1期细胞明显减少,S期细胞明显增多,细胞凋亡率明显减少(P<0.05);与Model组相比,槲皮素处理各组炎症因子IL-1β,IL-6,TNF-α显著降低,组织病理结构稍微有所改善,TLR4和NF-κB p65 mRNA和蛋白表达明显降低,G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M期细胞明显减少,细胞凋亡率明显增多(P<0.05),以上病理指标随着槲皮素浓度的增大而改善。结论槲皮素可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路激活,抑制直肠癌模型大鼠的炎症反应和应激反应。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用

目的 观察紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用,并基于Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)/髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)/核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法 60只健康成年雄性SD大鼠随机分为6组,每组10只,除正常组外均采用气管内滴注脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)的方法建立慢性支气管炎模型。醋酸地塞米松组给予0.075 mg·kg-1醋酸地塞米松灌胃,每天1次;紫菀散低、中、高剂量组分别给予1.5、3.0、6.0 g·kg-1紫菀散灌胃,每天1次;模型组、正常组给予等量生理盐水灌胃。采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平,采用细胞计数板法计数BALF中白细胞数量,采用HE染色、AB-PAS染色观察肺组织病理改变,采用免疫组化法检测肺组织TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均升高(P<0.01),白细胞总数和各种白细胞数量均增加(P<0.01),肺组织呈病理改变且气道杯状细胞增生评分升高(P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,醋酸地塞米松组及紫菀散各剂量组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均降低(P<0.05或P<0.01),白细胞总数和各种白细胞数量均降低(P<0.01),肺组织病理改变均减轻,气道杯状细胞增生评分均降低(P<0.05或P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均减少(P<0.05或P<0.01);与醋酸地塞米松组比较,紫菀散中、高剂量组TGF-β1水平均降低(P<0.05或P<0.01),紫菀散低剂量组白细胞总数和各种白细胞数量均增加(P<0.01),紫菀散中剂量组中性粒细胞数量、嗜酸性粒细胞数量均增加(P<0.01),紫菀散高剂量组淋巴细胞数量减少(P<0.01),紫菀散低、中剂量组肺组织病理改变均加重,紫菀散低剂量组气道杯状细胞增生评分升高(P<0.05),紫菀散低剂量组TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高(P<0.05)。结论 紫菀散可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥抗慢性支气管炎气道炎症的作用。

基于TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路探讨茯砖茶改善ApoE^(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝的作用

目的研究茯砖茶对载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠肝组织TLR_(4)/MyD88/NF-κB通路的影响,探讨其抑制非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成的作用机理。方法将50只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组和茯砖茶高、中、低剂量组(216、144、072 g/kg),每组10只,高脂饲料连续喂养17周并同时予以相应药物灌胃干预;另取8周龄C57BL/6J野生小鼠作为空白组,普通饲料喂养17周并予以生理盐水灌胃干预。给药结束后,取肝脏行HE染色观察组织病理变化,采用RT-qPCR法检测小鼠肝组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子Kappa B(NF-κB)、白细胞介素-1β(IL-β)、脂肪酸合成酶(FAS)mRNA表达。结果模型组小鼠肉眼可见肝脏体积增大,边缘变钝,呈黄色油腻感,镜下可见大小不等的脂肪空泡形成,证实模型制备成功;茯砖茶高、中剂量组小鼠脂肪变性程度轻于模型组,茯砖茶各剂量组小鼠肝组织TLR4、MyD88、NF-κB、IL-β、FAS mRNA表达低于模型组(P<005)。结论茯砖茶可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路来达到预防NAFLD形成的作用。

miR-146调控TLR4/NF-κB通路减少卵泡颗粒细胞凋亡及干预卵巢早衰中的机制研究

目的探究miR-146通过调控Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)减少卵泡颗粒细胞凋亡和干预卵巢早衰(premature ovarian failure,,POF)的机制。方法野生小鼠实验:60只SPF级C57BL/6小鼠随机分为对照组(n=30)和POF组(n=30)。POF组建立卵巢早衰模型,造模后15天qPCR检测2组小鼠卵巢组织中miRNA-146表达水平;基因敲除鼠实验:40只C57BL/6小鼠和20只miR-146敲除小鼠分为三组:对照组(n=20)、野生型POF组(n=20)和miR-146敲除POF组(n=20),野生型POF组和miR-146敲除POF组建立POF模型,建模后15天HE染色分析各组小鼠卵巢组织病理情况及原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和闭锁卵泡数,ELISA检测各组小鼠卵巢组织炎症信号通路分子TLR,NF-κB,肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的表达水平;Western blot检测卵巢组织凋亡蛋白BCL2-Associated X蛋白(Bax),B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl2)和TLR4信号通路蛋白TLR4,NF-κB表达水平。结果野生鼠实验表明与对照组相比,POF组小鼠卵泡中miR-146表达水平下调(0.51±0.14 vs 1.52±0.21),差异具有统计学意义(t=7.338,P<0.01);基因敲除鼠实验表明:与对照组相比,野生型POF组和miR-146敲除POF组原始卵泡(9.43±2.03,6.43±1.60 vs 16.82±2.11)、初级卵泡(6.15±1.11,5.01±1.10 vs 8.88±1.12)、次级卵泡(5.11±1.71,4.01±1.26 vs 7.11±1.34)均降低,闭锁卵泡(10.17±1.41,11.46±1.96 vs 7.18±1.64)升高,差异具有统计学意义(F=7.787,8.214,9.726,7.811,均P<0.01)。与对照组相比,野生鼠POF组和miR-146敲除POF组小鼠卵巢组织TLR4(68.18±5.92pg/ml,91.11±16.34 pg/ml vs 24.81±2.81 pg/ml),NF-κB(74.19±8.11 pg/ml,88.11±16.71pg/ml vs 68.18±5.92 pg/ml),TNF-α(72.81±2.10 pg/ml,94.31±2.26 pg/ml vs 28.07±3.67 pg/ml)和IL-6(69.19±7.11,81.11±16.34 vs 19.43±10.81 pg/ml)分泌显著升高,差异均有统计学意义(F=6.281,7.264,8.724,6.817,均P<0.01);与对照组相比,野生鼠POF组和miR-146敲除POF组小鼠卵巢组织Bax蛋白表达水平降低(1.18±0.19.0.61±0.14 vs1.81±0.21),Bcl2蛋白表达升高(0.59±0.05,0.91±0.05 vs 0.58±0.02),TLR4(1.10±0.12,0.41±0.04 vs 1.13±0.11)和NF-κB(0.81±0.02,0.31±0.06 vs 0.87±0.27)降低,差异均有显著性统计学意义(F=7.235,6.714,7.612,7.737,均P<0.01)。结论miR-146具有减少卵泡颗粒细胞凋亡的作用,其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路的调控和抑制炎症因子的释放相关。