电针通过恢复肠道微生物群和抑制LPS-TLR4-NF-κB 轴减轻大鼠实验性类风湿性关节炎

目的探讨电针通过恢复肠道微生物群和抑制LPS-TLR4-NF-κB轴减轻大鼠实验性类风湿性关节炎(RA)的效果。方法从50只清洁级Wistar雄性大鼠中随机抽取10只作为正常组,其余40只建立RA大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、电针组,其中电针组给予电针疗法治疗,正常组、模型组不作处理,记录不同时间点模型组、电针组关节肿胀度(joint swelling degree,JSD)、关节炎指数(arthritis index,AI)。实验结束后,观察各组关节超微结构变化、肠道微生物群变化、炎症因子水平及LPS-TLR4-NF-κB信号通路因子mRNA、蛋白表达情况。结果干预后,电针组JSD、AI明显低于模型组(P<0.05);与正常组比较,模型组滑膜组织增生,细胞膜破坏严重且不完整,伴大量炎性细胞浸润,电针治疗后,大鼠滑膜组织增生情况、炎性细胞浸润情况、粗面内质网扩张情况明显改善,核膜边缘清晰;与模型组比较,电针组的肠道微生物群相对丰度、炎症因子水平、LPS-TLR4-NF-κB信号通路相关mRNA水平均有改善(P<0.05)。结论电针疗法可有效改善RA大鼠关节症状、抑制炎症因子表达,其机制可能与调节肠道微生物群和抑制LPS-TLR4-NF-κB信号通路有关。

基于TLR4-NF-κB信号通路的槐果碱改善人支气管上皮细胞炎症和黏液高分泌的机制

目的基于TLR4-NF-κB信号通路探讨槐果碱(SC)体外抗炎作用及其抗哮喘的潜在效应机制。方法采用脂多糖(LPS)刺激人支气管上皮细胞NCI-H292诱导体外炎症模型,给予不同浓度SC进行治疗。采用MTT法筛选LPS和SC对NCI-H292细胞的安全浓度;设Control组、LPS组(10μg/mL LPS)、SC组(10μg/mL LPS+不同浓度SC),ELISA法检测细胞中黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达和上清液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的分泌情况;RT-PCR法检测细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、髓样分化因子(MyD88)和核因子-κB(NF-κB p65)mRNA的表达;Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p65(p-p65)以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果MTT结果显示,LPS和SC分别在0~10μg/mL、0~40μg/mL浓度范围内对细胞活力无影响;ELISA结果表明,与Control组相比,LPS组细胞中MUC5AC含量极显著升高(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8也极显著升高(P<0.01);与LPS组相比,SC组细胞中MUC5AC含量极显著降低(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8也极显著降低(P<0.01);RT-PCR结果显示,与Control组相比,LPS组细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、MyD88和NF-κB p65 mRNA表达均极显著升高(P<0.01),而SC组细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8 mRNA的表达显著降低(P<0.05),MyD88和NF-κB p65 mRNA的表达极显著降低(P<0.01)。Western blotting结果表明,SC可极显著降低LPS诱导的NCI-H292细胞中TRAF6、TLR4、p-p38和p-p65以及细胞核内NF-κB p65蛋白表达(P<0.01)。结论SC可能通过抑制TLR4-NF-κB信号通路,改善气道炎症和黏液高分泌,进而发挥抗哮喘的作用。

TLR2/TLR4-NF-κB信号通路在痛风中的研究进展

痛风是由于血尿酸浓度升高,尿酸钠晶体在关节、肌腱和周围组织中沉积,从而导致炎症性关节炎间歇性发作。Toll样受体是先天免疫系统中模式识别受体的一种。痛风性关节炎是由于过饱和的尿酸钠晶体在血液中析出,并与巨噬细胞产生作用,导致中性粒细胞的趋化、聚集,从而激活TLR2/TLR4-NF-κB信号通路,释放IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子和蛋白酶,导致痛风性关节炎的发生、发展。该文以痛风及TLR2/TLR4-NF-κB信号通路为主线,综述了TLR2/TLR4-NF-κB信号通路与痛风的相关性以及以该信号通路为靶点的治疗方法。

丹参酚酸B调节缺氧损伤乳鼠心肌细胞TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路的量效时效关系研究

目的:探讨丹参酚酸B不同给药浓度和不同给药时间窗对缺氧损伤乳鼠心肌细胞TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路的调节作用。方法:分离纯化出生1~3 d Wistar乳鼠心肌细胞、建立体外缺氧细胞模型。丹参酚酸B(Sal B)大、中、小剂量浓度分别为10^(-5)mol/L、10^(-6)mol/L和10^(-7)mol/L并按照缺氧前6 h、缺氧同时和缺氧后6 h 3种给药方式进行干预。qRT-PCR法检测心肌细胞tool样受体4 (TLR4)和核因子κB(NFκB) mRNA的表达,细胞爬片免疫组化法检测TLR4和NFκB蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度。结果:与正常组比较,缺氧模型组TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达量、细胞上清液中TNFα浓度均显著升高(P <0. 05或P <0. 01)。和缺氧模型组比较,丹参酚酸B预防给药和同时给药大、中剂量组TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达量、细胞上清液中TNFα的浓度均显著下降(P <0. 05或P <0. 01)。预防给药大剂量组下降最显著(P <0. 01)。结论:TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路在缺氧损伤6h即明显激活。SalB预防或同时干预对缺氧损伤的心肌细胞有明显的保护作用,该作用与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎性反应损伤通路相关。SalB具有量效和时效性,以大剂量预防给药效果最佳。

丹参酚酸B抑制TLR4-NFκB-TNFα炎症损伤通路防治心肌细胞的缺氧损伤

目的:探讨TLR4-NFκB-TNFα损伤通路和HSP70在体外缺氧培养心肌细胞中的变化规律以及丹参酚酸B的调节作用。方法:分离纯化出生1～3天Wistar乳鼠心肌细胞并复制体外缺氧培养心肌细胞模型。丹参酚酸B(SalB)大、中、小剂量浓度分别为10-5mol.L-1、10-6mol.L-1和10-7mol.L-1并在缺氧培养前6h进行干预。细胞爬片免疫组化法检测tool样受体4(TLR4)和核因子κB(NFκB)蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)和热休克蛋白70(HSP70)的浓度,分光光度计法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量。结果:与正常组比较,缺氧培养6h后心肌细胞上清液中MDA、LDH、TNFα含量均显著升高(3.71±0.84)VS(1.78±0.56)(,561.41±129.31)VS(36.80±10.22)(,89.39±21.65)VS(49.42±4.16),P<0.055或P<0.051);心肌细胞TLR4和NFκB蛋白的表达量也显著升高(P<0.055或P<0.051)。与单纯缺氧培养组比较,丹参酚酸B大剂量组MDA含量显著下降(1.94±0.49)VS(3.71±0.84),P<0.051;大、中、小剂量组LDH含量均显著下降(P<0.051);大、中剂量组TNFα含量显著下降(P<0.055);丹参酚酸B大、中、小剂量组NFκB及TLR4蛋白的表达面积或强度均有明显的下降(P<0.055或P<0.051)。结论:TLR4-NFκB-TNFα炎症通路在缺氧培养6h后即明显激活,该通路的激活在缺氧损伤初期(6h内)是不依赖HSP70存在的。丹参酚酸B预防给药对缺氧培养的体外心肌细胞炎症损伤有明显的保护作用。该作用可能与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎症通路有关。

冰片通过下调TLR4-NF-κB通路缓解LPS诱导的BMECs损伤

目的研究冰片对脂多糖(LPS)引发脑微血管内皮细胞(BMECs)损伤的保护作用及潜在机制。方法原代培养和鉴定大鼠BMECs,并用LPS诱发炎性损伤。利用CCK-8法检测细胞的存活率,并以此优化冰片的给药剂量。继而通过ELISA检测TNF-α、IL-6和IL-8的生成,DCFH-DA探针检测ROS含量,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR4、p-p65、p65、p-IκBα和IκBα的表达。结果冰片剂量优化结果表明其在10 mg·L^(-1)和20 mg·L^(-1)具有良好的剂量-效应依赖性。以它们为低、高剂量,发现冰片可显著减少TNF-α、IL-6和IL-8的分泌和ROS的生成,降低凋亡细胞百分率,减少TLR4、p-p65和IκBα的表达,并增加p65和p-IκBα的表达。结论冰片可通过下调TLR4-NF-κB通路缓解BMECs的炎症反应,进而减少大脑损伤。

化痰通络汤对MCAO大鼠脑保护作用及HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路的影响

目的基于HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路探讨化痰通络汤对脑缺血再灌注(MCAO)大鼠脑保护作用。方法将54只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、化痰通络汤组,其中模型组及化痰通络汤组行MCAO术,各组均于灌胃1 d、3 d、7 d后取材;比较各组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、脑含水量、脑组织高迁移率族蛋白l(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达及炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)含量。结果各时间点神经功能缺损评分比较显示,化痰通络汤组较模型组有明显下降,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);脑梗死体积比较显示,化痰通络汤组在各时间点脑梗死体积均小于模型组,组间比较具有明显差异(P<0.01);化痰通络汤组1 d、3 d、7 d脑组织HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达均低于模型组,组间比较有明显差异(P<0.05或P<0.01);化痰通络汤组1 d、3 d、7 d脑组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量均低于模型组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);结论化痰通络汤对MACO大鼠的脑保护作用机制可能是通过抗炎症反应、阻断HMGB1-TLR4-NF-κB信号通路实现的。

针刺通过影响TLR4-NF-κB信号通路在治疗慢性神经退行性疾病中的作用

针刺在治疗慢性神经退行性疾病中不可或缺,疗效受到世界公认,特别是针刺抗炎的疗效不断受到国内外研究者的广泛关注、研究和认可,TLR4-NF-κB信号通路作为一条经典的神经炎症通路,一直以来备受观注。本研究详细介绍TLR4-NF-κB信号通路的组成并整理归纳国内外文献发现针刺可以调控该通路,在阿尔兹海默症、帕金森病与肌萎缩侧索硬化症等慢性神经退行性疾病中起着调节作用,期望为了解慢性神经退行性疾病的发病机制及临床治疗靶点提供思路。

栀子苷对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞TLR4-NF-κB通路的影响

目的研究栀子苷对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞中Toll样受体4(TLR4)表达和NF-κB活性以及前炎症细胞因子(TNF-α、IL-1和IL-6)释放的影响,以探讨栀子苷抗炎免疫的分子机制。方法 LPS处理RAW264.7巨噬细胞系建立炎性细胞模型。细胞分为正常对照组、实验对照组(LPS组)和实验组(LPS联合栀子苷处理组)。CCK-8方法检测细胞增殖情况;ELISA检测培养细胞上清TNF-α、IL-1和IL-6的表达;实时定量PCR检测TLR4和P65的表达;Western blot法检测P65、磷酸化的P65(p-P65)、p-NF-IκB和TLR4蛋白表达。结果栀子苷对细胞增殖无影响;栀子苷能下调TNF-α、IL-1和IL-6的表达及抑制TLR4表达和NF-κB的活化。结论栀子苷通过TLR4-NF-κB信号转导通路抑制NF-κB的活化进而控制细胞炎性因子释放而发挥抗炎免疫作用。

基于TLR4-NF-κB的柴胡黄芩水煎液抑制CCl4诱导大鼠肝星状细胞激活作用机制研究

目的探讨柴胡黄芩水煎液(CQ)对CCl_4诱导肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活的作用及机制。方法取对数生长的HSC,在无血清培养基中培养24 h后,以1.5×10~9·L^(-1)浓度接种到培养板中过夜。实验分组如下:空白对照组(无药物处理),CCl_4诱导组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h),给药组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h后,再用400、500、600 mg·L^(-1)的CQ作用24 h),TLR4阻断剂TAK-242、NF-κB阻断剂BAY 11-7082组(6 mmol·L^(-1)CCl_4作用6 h后,再用TAK-242 10 mol·L^(-1)、BAY 11-7082 2 mol·L^(-1)作用24h)。处理之后,应用ELISA法检测培养基中透明质酸酶(hyaluronidase,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,Ⅳ-C)浓度,RT-PCR方法检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)基因的表达,应用Western blot法检测细胞中TLR4、NF-κB蛋白的表达。结果研究发现,与CCl_4干预组比较,CQ量效相关性降低CCl_4诱导的HSC增殖。600 mg·L^(-1)的CQ可以明显降低HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及TLR4、NF-κB基因、蛋白的表达。NF-κB抑制剂TAK-242、BAY 11-7082也可降低CCl_4造成的HSC增殖,HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C细胞释放水平及NF-κB基因、蛋白表达,不能下调TLR4基因、蛋白表达。结论 CQ可以抑制CCl_4诱导的炎症因子基因、蛋白表达,减轻肝纤维化相关指标的含量,其作用机制可能与TLR4-NF-κB转录活性及蛋白活性相关,提示其在抗肝纤维中的作用及机制。

呼吸道合胞病毒合并肺炎克雷伯菌感染所致肺炎与TLR4-NF-κB信号通路关系的初步研究

目的探讨呼吸道合胞病毒(RSV)合并肺炎克雷伯菌(Kp)感染SD大鼠后,初步研究其所致肺炎与TLR4-NF-κB信号转导通路的关系。方法 60只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、RSV组、Kp组及RSV+Kp组,以RSV、Kp滴鼻感染SD大鼠,分别于感染后第0、1、3、5、7天不同时间点,测量其体重、肺指数(LI)的变化;HE染色观察肺的病理学改变;RT-PCR法检测肺组织中TLR4、NF-κB的mRNA表达;Western blot检测NF-κB蛋白的表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量的变化。结果与正常对照组相比,RSV组和Kp组均存在弥漫性肺泡间隔增厚和炎症细胞浸润,且随感染时间的延长,肺泡结构破坏逐渐加重,LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达均升高,并与RSV和Kp感染之间存在时间依赖性关系;RSV+Kp组LI、TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、NF-κB蛋白、TNF-α和IL-1β的表达量进一步升高,肺组织炎症明显加剧。结论 RSV和Kp混合感染具有协同作用,加重肺部炎症;RSV合并Kp感染可能通过TLR4-NF-κB途径诱导肺部炎症反应,释放细胞因子TNF-α和IL-1β等。

柴胡皂苷d-黄芩苷配伍对CCl4诱导大鼠HSC的TLR4-NF-κB通路作用研究

目的:探讨柴胡皂苷d-黄芩苷(SaikosaponinD-Baicalin,SB)对CCl4诱导肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)的作用机制。方法:HSC分空白对照(无药物处理),CCl4诱导(6mmol/L CCl_4作用6h),给药(6mmol/L CCl4作用6h后,2.5、5、10ug/ml的SB作用24h),TAK-242、BYA 11-7082组(6mmol/L CCl_4作用6h后,TAK-242 10mol/L、BYA 11-7082 2mol/L作用24h)。ELISA法检测透明质酸酶(Hyaluronidase,HA)、层粘连蛋白(Laminin,LN)、III型前胶原(ProcollagenⅢ,PCIII)、IV型胶原(Collagen Type IV,IV-C)浓度,RT-PCR、Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(Toll-like receptors4,TLR4)、核转录因子(NF-κB)基因、蛋白的表达。结果:与CCl4干预组比较,SB、TAK-242、BYA 11-7082可降低CCl4造成的HSC细胞增殖,HA、LN、PCIII、HA细胞释放水平及NF-κB基因、蛋白的表达。SB、TAK-242可下调TLR4基因、蛋白表达。结论:SB可以抑制CCl4诱导的炎症因子基因、蛋白表达,改善肝纤维化相关指标,其作用机制可能与TLR4-NF-κB转录活性及蛋白活性相关。

不同鼠龄小鼠甲型流感病毒H1N1/FM1株感染TLR4-NF-κB信号通路改变比较研究

目的比较不同鼠龄小鼠感染流感病毒后TLR4-NF-κB P65信号通路的改变情况。方法采用免疫组化和RT-PCR技术检测不同鼠龄鼠肺组织中TLR4和NF-κB P65的蛋白及mRNA的表达,比较不同鼠龄感染流感病毒后信号通路的改变情况。结果 (1)肺组织TLR4蛋白表达:幼龄模型组TLR4蛋白表达最强,与正常组和成龄模型组比较,差异均具有显著性(P<0.05)。(2)肺组织NF-κB P65蛋白表达:幼龄模型组表达最强,且随着时间变化表达逐渐增强,每一时间点与前一时间点比较差异具有显著性(P<0.05)。(3)肺组织TLR4 mRNA表达:幼龄模型组表达最强,明显高于正常组和成龄模型组,差异具有显著性(P<0.05)。(4)肺组织NF-κB P65mRNA表达:幼龄模型组表达最强,随着病程进展表达逐渐增强;与正常组和成龄模型组比较,差异具有显著性(P<0.05)。结论 TLR4-NF-κB P65信号通路的过度活化,可能是幼龄鼠肺脏免疫病理损伤严重的机制之一。

鳖甲煎丸含药血清通过调控TLR4-NF-κB通路抑制血小板衍生生长因子诱导的肝星状细胞激活

目的研究鳖甲煎丸(Biejiajian Pill,BJJ)含药血清对血小板衍生生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)诱导肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的抑制作用及其机制。方法通过PDGF诱导HSC激活并给予鳖甲煎丸含药血清处理,MTT实验检测PDGF处理后HSC细胞增殖活性,EdU染色检测HSC细胞增殖。ELISA实验检测HSC激活相关细胞因子,最后通过Western blotting实验研究Toll样受体-4(Toll-like receptor 4,TLR 4)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路相关蛋白表达情况。结果MTT和EdU实验结果显示鳖甲煎丸含药血清可显著抑制PDGF引起的HSC细胞增殖活性;ELISA实验结果显示鳖甲煎丸含药血清可显著降低PDGF处理后HSC中Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col-Ⅰ)、白介素-6(interleukin 6,IL-6)、PDGF-AA和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)含量;并可显著抑制PDGF处理后TGF-β1和α-SMA表达;免疫印迹实验显示鳖甲煎丸含药血清可抑制TLR4、p-IKK表达并升高p-IκBα表达。结论鳖甲煎丸含药血清可通过作用于TLR4-NF-κB信号通路抑制HSC细胞增殖和激活。

紫锥菊通过调控TLR4-NF-κB通路增强免疫抑制鸡的免疫功能

紫锥菊是一种重要的免疫增强剂,常作为替抗药物用于饲料添加剂,但其作用机制有待进一步研究。本试验旨在研究紫锥菊对免疫抑制鸡免疫功能的影响及其机制。将120羽7日龄的雏鸡随机均分为:对照组、环磷酰胺组、紫锥菊组、紫锥菊+环磷酰胺组(联合组)。环磷酰胺组和联合组雏鸡连续3 d胸肌注射生理盐水配制的环磷酰胺溶液(80 mg·kg^(-1)),同时对照组和紫锥菊组连续3 d注射等量生理盐水,除紫锥菊组和联合组每天饲喂含紫锥菊全草粉末(含量为1%)的基础日粮外,其余各组雏鸡饲喂基础日粮,每天称重并记录,连续饲喂21 d。试验结束时,分析体重及脾脏指数的变化,检测炎性因子(NF-κB、IκB、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ)和TLR家族(TLR2、TLR4、TLR7、MyD88)基因mRNA及蛋白的表达含量。结果显示,紫锥菊处理提高了雏鸡的生长性能,环磷酰胺抑制了雏鸡的生长并显著降低了脾脏系数(P<0.05),且环磷酰胺组脾组织病理变化明显,而在联合组中上述病理变化得到缓解。与对照组相比,环磷酰胺组的NF-κB、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ、TLR2、TLR4、TLR7、MyD88的mRNA水平均显著下调(P<0.05、P<0.01或P<0.001),而联合组相比于环磷酰胺组,除TLR7外,上述基因mRNA表达量均显著上调(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。此外,紫锥菊的添加显著提高了炎性因子和TLR家族相关蛋白的表达水平。结果表明:紫锥菊可通过调控TLR4/NF-κB通路增强免疫抑制鸡的免疫功能。

右美托咪定对脂多糖诱导的子宫内膜炎小鼠子宫组织中TLR4-NF-κB/NLRP3炎性小体介导的炎性反应的影响

目的探讨右美托咪定(DEX)对小鼠子宫内膜炎的作用及相关分子机制。方法将40只雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组及右美托咪定组(10、20、40μg/kg),共计5组;腹腔注射给药30min后,采用小鼠子宫注射LPS溶液建立小鼠子宫内膜炎模型;24h后小鼠眼球取血,脱颈椎处死,解剖分离小鼠子宫组织;采用HE染色法检测小鼠子宫组织的病理变化并评分;采用ELISA法检测小鼠血清中IL-1β、IL-18、TNF-α的分泌水平;采用RT-PCR法检测小鼠子宫组织中IL-1β、IL-18、TNF-α的表达水平;采用Western blot法检测小鼠子宫组织中TLR4-NF-κB介导的NLRP3炎性小体活化相关分子的表达水平。结果HE染色结果表明与对照组小鼠比较,模型组小鼠的子宫组织中出现明显的炎性细胞浸润和肌层水肿及黏膜增生等炎性反应,给予右美托咪定能够抑制子宫内膜炎小鼠的子宫炎性细胞浸润及肌层水肿等炎性反应;ELISA结果表明与对照组小鼠比较,模型组小鼠血清中IL-1β、IL-18、TNF-α的含量显著增加,给予右美托咪定呈剂量依赖性降低子宫内膜炎小鼠血清中IL-1β、IL-18、TNF-α的含量;RT-PCR结果表明与对照组小鼠比较,模型组小鼠子宫组织中IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA水平显著上调,给予右美托咪定呈剂量依赖性显著下调IL-1β、IL-18、TNF-αmRNA水平;Western blot法结果表明与对照组比较,模型组小鼠子宫组织中caspase-1、ASC、NLRP3、TLR4、p-p65/p65表达水平显著上调,给予右美托咪定能够显著抑制子宫内膜炎小鼠子宫组织中caspase-1、ASC、NLRP3、TLR4、p-p65/p65的表达。结论右美托咪定能够缓解脂多糖诱导的小鼠子宫内膜炎,并且与抑制子宫组织中TLR4-NF-κB/NLRP3炎性小体介导的炎性反应相关,对子宫内膜炎具有潜在的治疗作用。

益生菌VSL#3对DSS大鼠结肠炎TLR4-NF-κB通路的调节作用

目的阐明益生菌VSL#3对硫酸葡聚糖钠(DSS)诱导结肠炎大鼠TLR4-NF-κB通路的影响,深入探讨VSL#3对结肠黏膜炎症免疫调控机制。方法将33只Sprague-Dawly大鼠(SD大鼠)分为正常组、DSS造模组以及益生菌治疗组。5%DSS溶液自由饮用一周,构建溃疡性结肠炎模型。观察和评价大肠黏膜的组织学损伤,计算DAI评分以及病理学评分;使用real-time PCR检测结肠组织TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1βmRNA的表达水平;Western-Blot检测TLR4、NF-κB蛋白的表达水平;应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中TNF-α和IL-1β的表达。结果益生菌治疗组DAI评分、病理学评分均低于DSS造模组(P<0.05);益生菌治疗组大鼠结肠组织中TLR4、NF-κB、TNF-α、IL-1β的mRNA水平与DSS造模组相比表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05);与DSS造模组相比,益生菌治疗组SD大鼠结肠组织TLR4、NF-κB p65蛋白水平下调,血清TNF-α、IL-1β表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论益生菌VSL#3可能是通过抑制TLR4-NF-κB通路,发挥其抑制免疫,减轻炎症反应的作用,从而达到治疗溃疡性结肠炎的目的。

血必净对内毒素诱导血管内皮细胞TLR4-NF-κB炎症信号通路表达的影响

目的探讨血必净对内毒素(LPS)诱导血管内皮细胞TLR4-NF-κB炎症信号通路表达的影响。方法体外培养血管内皮细胞,将细胞分为3组:正常对照组、LPS组和血必净组。用Western blot检测TLR4和核转录因子-κB p65(NF-κB p65)蛋白的表达情况;用ELISA方法检测TNF-α含量。结果与对照组相比,LPS组TNF-α浓度明显增加,TLR4和NF-κB p65表达增加;血必净能明显抑制TNF-α浓度以及TLR4和NF-κB p65的表达(P<0.01)。结论血必净可能通过TLR4-NF-κB信号通路,抑制炎症反应,减少TNF-α蛋白含量。

巨噬细胞RAW264.7通过TLR4-NF-κB信号通路调控流感病毒A/PR/8/34(H1N1)增殖的实验研究

目的:检测巨噬细胞RAW264.7对H1N1型流感病毒增殖的抑制作用,初步探讨固有免疫细胞抗病毒的作用机制。方法:采用10 TCID_(50)、100 TCID_(50)和1000 TCID_(50)低、中、高剂量流感病毒A/PR/8/34(PR8,H1N1)感染RAW264.7细胞,光学显微镜和Hoechst染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡率,qPCR和流式细胞术检测Influenza NP、TLR4和NF-κB p65水平,免疫荧光染色对细胞Influenza NP、TLR4和NF-κB p65表达进行定位,qPCR和ELISA检测IL-6、TNF-α和IFN-β水平。结果:与10 TCID_(50)组比较,100 TCID_(50)组和1000 TCID_(50)组细胞凋亡率显著提高(P<0.01);qPCR、流式细胞术和免疫荧光染色显示,与对照组比较,RAW264.7细胞感染PR8后Influenza NP、TLR4和NF-κB p65水平显著提高(P<0.01),与10 TCID_(50)组比较,100 TCID_(50)组和1000 TCID_(50)组三者表达不同程度升高(P<0.05),且1000 TCID_(50)组TLR4和NF-κB p65上调幅度大于100 TCID_(50)组(P<0.05);细胞感染PR8后IL-6、TNF-α和IFN-βmRNA水平和培养液各因子浓度较对照组显著升高(P<0.01),与10 TCID_(50)组比较,100 TCID_(50)组和1000 TCID_(50)组各因子水平不同程度升高(P<0.05),且1000 TCID_(50)组较100 TCID_(50)组显著升高(P<0.01)。感染剂量与细胞凋亡率(FCM)和NP(FCM)、TLR4(FCM)、NF-κB p65(FCM)、IL-6、TNF-α和IFN-β(qPCR)水平呈正相关(r=0.634,P=0.002;r=0.747,P<0.001;r=0.812,P<0.001;r=0.790,P<0.001;r=0.805,P<0.001;r=0.874,P<0.001;r=0.863,P<0.001)。结论:巨噬细胞RAW264.7通过上调TLR4-NF-κB信号通路诱导下游炎症因子表达,发挥抗病毒增殖效应。

基于TLR4-NF-κB/MAPK-炎症轴的槐果碱药理作用研究进展

槐果碱为喹诺里西啶类生物碱,是从豆科槐属植物苦参、山豆根等中草药中提取而来。研究表明,槐果碱在多种疾病的进展中能抑制TLR4-NF-κB/MAPK通路,减少各类炎症因子如IL-6、IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE2和MCP-1等的释放,调节免疫细胞的分泌,抵抗炎症对机体的损害,进而发挥保护肝脏、改善心血管和抗自身免疫性疾病等多种药理作用。基于TLR4-NF-κB/MAPK-炎症轴对近年来槐果碱的多种药理作用作以综述,以期为槐果碱新药进一步研究提供参考。