基于TLR4-NF-κB/MAPK-炎症轴的槐果碱药理作用研究进展

槐果碱为喹诺里西啶类生物碱,是从豆科槐属植物苦参、山豆根等中草药中提取而来。研究表明,槐果碱在多种疾病的进展中能抑制TLR4-NF-κB/MAPK通路,减少各类炎症因子如IL-6、IL-1β、IL-8、TNF-α、PGE2和MCP-1等的释放,调节免疫细胞的分泌,抵抗炎症对机体的损害,进而发挥保护肝脏、改善心血管和抗自身免疫性疾病等多种药理作用。基于TLR4-NF-κB/MAPK-炎症轴对近年来槐果碱的多种药理作用作以综述,以期为槐果碱新药进一步研究提供参考。

基于TLR4-NF-κB信号通路的槐果碱改善人支气管上皮细胞炎症和黏液高分泌的机制

目的基于TLR4-NF-κB信号通路探讨槐果碱(SC)体外抗炎作用及其抗哮喘的潜在效应机制。方法采用脂多糖(LPS)刺激人支气管上皮细胞NCI-H292诱导体外炎症模型,给予不同浓度SC进行治疗。采用MTT法筛选LPS和SC对NCI-H292细胞的安全浓度;设Control组、LPS组(10μg/mL LPS)、SC组(10μg/mL LPS+不同浓度SC),ELISA法检测细胞中黏蛋白5AC(MUC5AC)的表达和上清液中白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)的分泌情况;RT-PCR法检测细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、髓样分化因子(MyD88)和核因子-κB(NF-κB p65)mRNA的表达;Western blot方法检测细胞中Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)、磷酸化p38(p-p38)和磷酸化p65(p-p65)以及细胞核内NF-κB p65的蛋白表达。结果MTT结果显示,LPS和SC分别在0~10μg/mL、0~40μg/mL浓度范围内对细胞活力无影响;ELISA结果表明,与Control组相比,LPS组细胞中MUC5AC含量极显著升高(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8也极显著升高(P<0.01);与LPS组相比,SC组细胞中MUC5AC含量极显著降低(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8也极显著降低(P<0.01);RT-PCR结果显示,与Control组相比,LPS组细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8、MyD88和NF-κB p65 mRNA表达均极显著升高(P<0.01),而SC组细胞中MUC5AC、IL-6、IL-8 mRNA的表达显著降低(P<0.05),MyD88和NF-κB p65 mRNA的表达极显著降低(P<0.01)。Western blotting结果表明,SC可极显著降低LPS诱导的NCI-H292细胞中TRAF6、TLR4、p-p38和p-p65以及细胞核内NF-κB p65蛋白表达(P<0.01)。结论SC可能通过抑制TLR4-NF-κB信号通路,改善气道炎症和黏液高分泌,进而发挥抗哮喘的作用。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号轴探讨闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎的影响

目的本研究旨在探讨闹羊花毒素Ⅲ调控TLR4、MyD88和NF-κB的机制,以及闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的影响。方法RA大鼠模型通过Ⅱ型胶原诱导构建。随机将Wistar大鼠分成6组(n=8):假手术组(Sham组)、RA模型组(Model组)、阳性药物雷公藤组[TWG组,50 mg·(kg·d)^(-1)]、闹羊花毒素Ⅲ低剂量组[R-ⅢLo组,0.06 mg·(kg·d)^(-1)]、中剂量[R-ⅢMi组,0.12 mg·(kg·d)^(-1)]和高剂量组[R-ⅢHi组,0.24 mg·(kg·d)^(-1)]。测定各组大鼠的关节炎指数(arthritis index,AI);采用HE染色、ELISA、Western blot和RT-qPCR检测闹羊花毒素Ⅲ对TLR4/MyD88/NF-κB信号轴及RA的影响。结果与Model组比较,闹羊花毒素Ⅲ处理显著降低了RA大鼠的AI评分(P<0.05)。闹羊花毒素Ⅲ对滑膜组织的恶性增生和炎症细胞浸润有明显的抑制作用。与Model组比,闹羊花毒素Ⅲ各剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、VEGF、MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB因子的水平降低且呈浓度依赖性(P<0.05)。与TWG组比,R-ⅢLo和R-ⅢMi组的。TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、VEGF、MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB因子的水平升高(P<0.05),而R-ⅢHi组无显著差异(P>0.05)。结论闹羊花毒素Ⅲ可以通过下调TLR4、MyD88、NF-κB因子的表达水平来改善RA。本研究为利用闹羊花毒素Ⅲ治疗RA提供了一定的实验基础。

TLR2/TLR4-NF-κB信号通路在痛风中的研究进展

痛风是由于血尿酸浓度升高,尿酸钠晶体在关节、肌腱和周围组织中沉积,从而导致炎症性关节炎间歇性发作。Toll样受体是先天免疫系统中模式识别受体的一种。痛风性关节炎是由于过饱和的尿酸钠晶体在血液中析出,并与巨噬细胞产生作用,导致中性粒细胞的趋化、聚集,从而激活TLR2/TLR4-NF-κB信号通路,释放IL-1β、IL-6、TNF-α等炎性因子和蛋白酶,导致痛风性关节炎的发生、发展。该文以痛风及TLR2/TLR4-NF-κB信号通路为主线,综述了TLR2/TLR4-NF-κB信号通路与痛风的相关性以及以该信号通路为靶点的治疗方法。

基于miRNA-30b-5p/TLR4/NF-κB轴探究针灸改善大鼠膝骨关节炎损伤的实验研究

目的:探究基于miRNA-30b-5p/TLR4/NF-κB轴针灸治疗膝骨关节炎(KOA)损伤大鼠的疗效。方法:40只大鼠随机分为5组(n=8):正常组、模型组、单一针灸治疗组、针灸+miRNA-30b-5p-mimics联合治疗组以及针灸+siRNA-TLR4联合治疗组。经过4周的治疗后,采用HE染色观察膝关节软骨组织病理变化;ELISA法检测各组大鼠滑膜液中TNF-α、IL-1β、IL-6和MMP-13的分泌水平;qRT-PCR检测软骨组织中miRNA-30b-5p、TLR4和NF-κB的表达水平;Western blot检测软骨组织中TLR4、NF-κB、IL-6和MMP-13蛋白水平的表达;TUNEL染色检测各组大鼠膝骨关节软骨中软骨细胞凋亡情况;双荧光素酶报告试验检测miRNA-30b-5p与TLR4的靶向关系。结果:与模型组比较,单一针灸及联合治疗显著改善了KOA大鼠软骨组织的病理学变化;显著下调了滑膜液中TNF-α、IL-1β、IL-6和MMP-13的分泌水平(P<0.05,P<0.01);显著抑制软骨组织中TLR4、NF-κB、IL-6和MMP-13的表达水平(P<0.05,P<0.01);同时促进miRNA-30b-5p的表达(P<0.01);显著抑制了膝关节软骨中软骨细胞的凋亡。此外,双荧光素酶报告试验证实TLR4为miRNA-30b-5p的靶基因。结论:针灸能显著改善KOA大鼠膝关节软骨组织的病理学变化,缓解炎症反应,抑制膝骨关节中软骨细胞的凋亡,这可能与其对miRNA-30b-5p/TLR4/NF-κB轴的调控密切相关。

基于P2X7R/TLR4/NF-κB/NLRP3轴探讨清解化攻方对重症急性胰腺炎炎症反应的作用机制

目的:研究P2X7R/TLR4/NF-κB/NLRP3轴在重症急性胰腺炎(SAP)炎症反应的作用机制及清解化攻方的干预作用。方法:采用雨娃素联合脂多糖建立SAP大鼠模型,分别设置空白组、模型组、不同剂量清解化攻方给药组和阳性对照组,通过HE染色观察胰腺组织病理,ELISA检测炎症指标,结合Western Blot和qRT-PCR检测胰腺组织中P2X7R、TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白和mRNA的表达情况。结果:与空白组比较,模型组胰腺组织水肿、坏死出血,大鼠血清中IL-8、IL-12、IL-17、IL-18的含量明显升高(P<0.05),胰腺组织中P2X7R、TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白和mRNA的表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,清解化攻方各剂量组和阳性对照组能够改善SAP胰腺组织水肿,减少坏死出血,可降低SAP模型大鼠血清中IL-8、IL-12、IL-17、IL-18的含量(P<0.05),中、高剂量组和阳性对照组胰腺组织中P2X7R、TLR4、NF-κB、NLRP3蛋白和mRNA表达量显著降低(P<0.05)。结论:清解化攻方可能通过下调P2X7R/TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的表达,从而控制SAP炎症反应,起到治疗SAP的作用。

人参、甘草、五味子复合醋提物对老年小鼠急性炎性肝损伤保护作用的研究

目的:本研究旨在通过脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导肝损伤小鼠考察复合醋提物(MVE)对老年小鼠炎性肝损伤的保护效果。方法:将小鼠随机分为正常对照组、MVE组、LPS组、LPS+MVE组。通过苏木精-伊红染色评估肝组织病理情况和免疫组织化学染色判断髓过氧化物酶的表达变化。同时,检测肝组织中白介素-1β、白介素-17、CXC趋化因子配体1、CXC趋化因子配体17等生化因子水平。免疫印迹法测定肝脏中Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和p-NF-κB p65蛋白表达量变化。结果:复合醋提物能减少中性粒细胞及炎症细胞浸润,极显著降低LPS模型小鼠肝脏谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、活性氧(ROS)水平(P<0.01),并降低促炎因子和中性粒细胞趋化因子水平(P<0.05),降低炎症通路TLR4和p-NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.001)。结论:MVE能改善LPS诱导急性炎症小鼠的肝损伤,此外,MVE还能通过平衡促炎和抗炎因子水平变化、抑制TLR4-NF-κB信号通路,最终达到发挥护肝作用效果。

PTEN对ox-LDL诱导的巨噬细胞炎性因子的影响及机制研究

目的:分析第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的巨噬细胞炎症因子影响及其作用机制。方法:将构建pc DNA3.1(+)-PTEN(r PTEN)重组表达载体及PTEN siRNA转染小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,用制备的50 mg/L的ox-LDL孵育24 h,RT-PCR及Western blot分析PTEN的mRNA及蛋白表达水平;ELISA检测炎性因子TNF-α和IL-6的水平;同时Western blot分析对Toll样受体4(TLR4)及转录因子-κB(NF-κB)的影响及其作用机制。结果:PTEN过表达增高了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6的水平;PTEN沉默抑制了ox-LDL诱导的TNF-α和IL-6炎性因子水平。进一步分析表明,PTEN过表达加强了巨噬细胞中ox-LDL诱导的TLR4及其下游NF-κB通路的活化,而抑制其表达后,TLR4-NF-κB通路明显受到抑制;用TLR4特异性抗体预处理后,PTEN过表达诱导的TNF-α和IL-6的水平明显下降。进一步机制分析证实,磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)抑制剂LY294002(1μmol/L)预处理后,PTEN沉默抑制的TLR4-NF-κB通路的活性明显增加,且伴随有TNF-α和IL-6水平的上调。结论:PTEN有可能通过负向调节PI3K/AKT抗炎通路来影响TLR4-NF-κB炎性通路,进而参与巨噬细胞介导的炎症进程。因此,本研究将为心脑血管疾病的防治提供新的靶标。

安菲博肽对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的研究安菲博肽(ANF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法取SD大鼠96只,随机分为正常组,模型组,地尔硫[艹卓]组,安菲博肽高、中、低(4、2、1μg·kg^(-1))组,每组16只。腹腔注射给药连续3 d后,结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min建立心肌缺血再灌注损伤模型。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积;HE染色观察心肌组织病理改变;生化试剂盒测定血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA法测定血清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western-blot法测定心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB(NF-κB p65/p-NF-κB p65)蛋白表达。结果与模型组比较,ANF高、中剂量组可明显减少心肌梗死面积,改善心肌组织病理改变;高、中、低剂量组可明显降低血清中CK-MB、LDH活性及cTnI、IL-6含量;高、中剂量组可明显降低血清中IL-1β、TNF-α含量以及心肌组织中TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白表达水平。结论ANF对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活从而减轻炎症反应有关。