Arl8a与树突状细胞TLR4-TRIF信号途径的相关性

目的 探讨ADP-核糖基化因子样8A（ADP-ribosylation factor-like 8A,Arl8a）与树突状细胞（dendritic cell,DC）中TLR4-TRIF-GEFH1-RhoB信号途径的相关性.方法 从野生型和TRIF敲除基因（TRIFKO）小鼠中分离和培养DC,LPS刺激后收集细胞扩增总cDNA,通过实时定量PCR检测Arl8a的mRNA表达.然后用鸟嘌呤核苷酸交换因子H1（GEFH1）的siRNA转染来自野生型小鼠的DC,进行LPS刺激或未刺激处理并检测Arl8a的mRNA表达.再用GEFH1和Arl8a的siRNA转染DC,LPS刺激后检测RhoB的mRNA表达.结果 在LPS刺激后,Arl8a的mRNA表达在野生型小鼠的DC中增加,在TRIFKO小鼠的DC中则未被上调.此外,在野生型小鼠中Arl8a的mRNA上调可被GEFH1的siRNA明显抑制（P＜0.01）.而Arl8a和GEFH1的siRNA均能显著抑制RhoB的mRNA表达（P＜0.01）.结论 Arl8a的表达与DC的TRL4-TRIF途径有关,并且在转录水平与GEFH1和RhoB相关.

LPS/TLR4信号途径在非酒精性脂肪性肝病中的作用

脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号途径参与非酒精性脂肪性肝病的发生发展,非酒精性脂肪性肝病肝脏中LPS受体TLR4表达上调,诱导炎症反应,促使肝细胞损伤.非酒精性脂肪性肝病时肠道菌群失调,LPS产生增多,肠壁通透性增强,形成肠源性内毒素血症,LPS上调Kupffer细胞TLR4的表达,分别通过MyD88-依赖途径和MyD88-不依赖途径,最终激活核因子B,诱导强力的炎症反应,从而介导肝损伤.本文就LPS/TLR4信号途径的构成、调节方式及与非酒精性脂肪性肝病的关系做一综述.

黄芩苷经由TLR4信号转导通路抗呼吸道合胞病毒作用的研究

目的研究黄芩苷经由Toll样受体4(TLR4)信号转导通路抗呼吸道合胞病毒的作用及机制。方法体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞与黄芩苷共孵后,用半定量RT-PCR和直接免疫荧光分别检测RAW264.7细胞上TLR4 mRNA和蛋白的表达量;Western-blot检测RAW264.7细胞核转录因子NF-κB活化表达量;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中IL-6水平。结果呼吸道合胞病毒感染诱导RAW264.7细胞TLR4 mRNA和蛋白表达上调,增加RAW264.7细胞NF-κB的活化,使细胞培养上清中IL-6水平升高;与感染组相比较,黄芩苷组RAW264.7细胞的TLR4 mRNA和蛋白的表达量明显下降,NF-κB活化减少,细胞培养上清中IL-6水平显著降低。结论黄芩苷可通过抑制TLR4信号转导途径来发挥抑制RSV感染的作用。

基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号途径研究慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉发病过程中炎性因子的表达

目的探讨基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号研究慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyp,CRSwNP)发病过程中炎性因子的表达。方法HE检测CRSwNP中的嗜酸细胞;免疫组织化学、qRT-PCR和Western blot检测CRSwNP中HMGB1的表达;qRT-PCR检测CRSwNP中IL-4和IL-13的表达;ELISA检测HMGB1(HMGB1/TLR4通路)对人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13表达的影响。结果CRSwNP中嗜酸细胞浸润增加(P<0.001),HMGB1表达上调(P<0.001),IL-4 mRNA和IL-13 mRNA的表达增加(P均<0.01);HMGB1使人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的表达增加(P均<0.001);与HMGB1(100 ng/ml)孵育组比较,加入抗TLR4抗体孵育后人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的表达水平降低(P均<0.001)。结论CRSwNP组织中HMGB1高表达。脂多糖刺激人鼻黏膜上皮细胞中HMGB1的产生,进而通过TLR4上调人鼻黏膜上皮细胞中IL-4和IL-13的产生。

升阳益胃汤对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织TLR4和IL-6的影响

目的:观察升阳益胃汤对慢性萎缩性胃炎大鼠发病过程中Toll样受体4(TLR4)及白细胞介素6(IL-6)的影响,并探讨其作用机制。方法:取体重200±20g SPF级Wistar大鼠,雌雄各半共60只,随机分为空白组、模型组、硫糖铝对照组、升阳益胃汤预防低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组均采用综合法复制大鼠的慢性萎缩性胃炎模型,从模型组中随机抽取1只大鼠,处死后经病理检查符合病理诊断标准。预防组自制模开始后用升阳益胃汤进行干预,硫糖铝组自造模开始后给予硫糖铝。连续用药10周后,处死大鼠,用放免法检测胃组织中IL-6的表达,用免疫组化法测量胃组织中TLR4的表达。结果:IL-6和TLR4的表达,均以预防高剂量组表达较低,与空白组比较,两者无统计学差异(P>0.05),预防低剂量组与高剂量比较,两者有统计学差异(P<0.05)。结论:升阳益胃汤可以保护慢性萎缩性胃炎大鼠胃黏膜。其机制可能在于抑制TLR4介导的信号转导途径,从而阻止下游的细胞因子(如:IL-6)信号转导,以阻止释放自由基,吸引炎性细胞造成的黏膜损伤;同时,也可能在于阻止胃内抗原物质直接参与黏膜免疫反应,造成的黏膜损伤。从而提高机体免疫力,使黏膜细胞得到修复,达到早期预防慢性萎缩性胃炎的目的。

模式识别受体TLR4与动脉粥样硬化的关系

天然免疫系统是宿主免疫防御机制中的重要部分之一。它在宿主对微生物的识别以及清除，细胞凋亡与坏死，炎症等有着重要作用。病原体相关分子模式（PAMPs）是病原体的基本成分或者为病原体的产物，能被天然免疫系统的模式识别受体（PPRs）所识别。存在着三种模式识别受体（PPRs）：可溶性的细胞外受体（如补体）、膜相关受体（如TLRs）、细胞内受体（如NOD蛋白）。其中Toll样受体被证明为天然免疫的关键模式识别受体；每种TLR识别一个成分广且大量的特殊配体库（内源性和外源性）后，始动相应的特定信号转导途径，激活人体的免疫应答。

Arl8a与树突状细胞TLR4两条下游途径的相关性

为探讨Arl8a(ADP-ribosylation factor-like 8A)与树突状细胞(dendritic cells,DCs)TLR4两条下游信号途径的关系,用Arl8a和GEFH1(guanine nucleotide-exchange factors H1)的siRNA转染来自野生型小鼠的DC,进行LPS刺激或未刺激处理后,检测TLR4-TRIF途径中RhoB靶蛋白MYH9的mRNA表达。然后从野生型和IFNα/β受体基因敲除小鼠中分离和培养DC,LPS刺激后收集细胞扩增总cDNA,通过实时定量PCR检测Arl8a的mRNA表达。再用Arl8a的siRNA转染DC,LPS刺激后检测IL-6和IL-12a的mRNA表达。结果表明,Arl8a和GEFH1的siRNA均能显著抑制LPS介导的MYH9的mRNA表达(P<0.01),而且在LPS刺激后,Arl8a的mRNA表达在野生型小鼠的DC中增加,在IFNα/β受体基因敲除小鼠的DC中则未被上调。此外,Arl8a的siRNA对IL-6和IL-12a的mRNA表达没有显著效应。以上结果提示,在转录水平,Arl8a和GEFH1均对MYH9的表达有影响,并且Arl8a基因的表达与TRIF-IFNβ途径有关,Arl8a可能与MyD88途径中细胞因子IL-6和IL-12a的表达无关。

黄芩苷对ESBLs大肠埃希菌感染RAW264.7细胞TLR4表达的影响

目的:体外研究黄芩苷经由TLR4信号转导途径抗ESBLs大肠埃希菌感染的作用及其机制。方法:用临床分离ESBLs大肠埃希菌接种于单层生长的RAW264.7细胞培养板中以及用黄芩苷(25,50 mg.L-1)预处理的单层生长的RAW264.7细胞培养板中,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测培养细胞TLR4 mRNA表达的变化,免疫荧光检测TLR4蛋白表达的变化,Western blot检测NF-κB表达的变化和酶联免疫吸附(ELISA)检测培养上清中TNF-α含量的变化。结果:ESBLs大肠埃希菌上调RAW264.7细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达,NF-κB表达量增加,培养上清中TNF-α含量升高。黄芩苷能抑制大肠埃希菌对RAW264.7细胞TLR4 mRNA和蛋白的上调作用,降低NF-κB的活化,减少TNF-α的分泌,抑制作用呈现黄芩苷剂量依赖性。结论:黄芩苷对ESBLs大肠埃希菌体外直接抑菌作用虽然较弱,但可通过抑制TLR4及其介导的信号转导途径减少炎性因子的生成,从而发挥抗炎作用。

丹参改善小鼠慢性酒精性肝损伤机制的研究

目的探讨丹参改善小鼠慢性酒精性肝损伤的机制。方法建立小鼠慢性酒精性肝损伤模型,采用苏木素伊红(Hematoxylin eosin ,HE)染色,观察丹参干预后肝组织形态学改变,逆转录多聚酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction ,RT -PCR)检测肝组织toll样受体4(tolllikereceptor 4,TLR4)mRNA及血红素氧合酶1(hemeoxygenase -1,HO -1)mRNA的水平,以免疫组织化学方法检测TLR4蛋白表达水平。结果丹参能减轻酒精所引起的肝细胞脂肪变性、坏死,下调TLR4mRNA表达及HO 1mRNA表达,并能使TLR4阳性细胞数明显减少。结论丹参可通过对TLR4信号传导途径的影响来减少酒精所引起的肝损伤。

TLR4在慢性重型肝炎患者中的表达及意义

Toll样受体4（TLR4）是细胞壁脂多糖（LPS）的特异性受体，可通过特定的细胞信号转导途径介导细胞免疫，以造成机体的损伤。本研究通过检测慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞（淋巴细胞、单核细胞）表面的TLR4表达水平，探讨其在慢性重型肝炎中的意义及作用机制。

Toll样受体4、Myd88在溃疡性结肠炎结肠组织中的表达及相关性研究

Toll样受体（Toll—like receptor，TLR）是与果蝇Toll蛋白具有同源性的表达于细胞膜上与免疫系统识别微生物有关的一类受体家族。TLR4是其中一种跨膜受体，髓样分化分子88（myeloid differentiation factor，Myd88）为TLR4信号转导途径中的主要接头蛋白，

GEFH1在LPS诱导树突细胞IL-6和IL-12a表达中的作用

为探讨GEFH1与树突细胞(dendritic cell,DC)TLR4两条下游信号途径的关系,从野生型和TRIF基因、IFNα/β受体基因敲除小鼠中分离和培养DC,LPS或IL-6刺激后收集细胞制备总cDNA,通过实时定量PCR检测GEFH1的mRNA表达。再用GEFH1的siRNA转染DC,LPS刺激后检测IL-6和IL-12a的mRNA表达。结果,在LPS刺激后,GEFH1的mRNA表达在野生型小鼠的DC中显著增加,在TRIF基因、IFN-α/β受体基因敲除小鼠的DC中则未被上调。此外,GEFH1siRNA处理后,IL-6和IL-12a的mRNA表达均上升显著(P>0.05),而在IL-6刺激的野生型小鼠的DC中,GEFH1的mRNA没有明显改变。以上结果提示在转录水平,TRIF-IFNβ信号通路、而非IL-6可诱导GEFH1基因表达。GEFH1可能对MyD88途径中细胞因子IL-6和IL-12a的表达有负调节作用。

有氧运动可提高脑缺血大鼠的神经功能和认知功能

为了揭示有氧运动对脑缺血大鼠神经功能和认知功能的改善作用机制,本研究建立了大鼠中脑动脉闭塞手术(MCAO)诱导缺血性中风大鼠模型。将大鼠在跑步机上以10 m/min的速度运动30 min,每天运动1次,共运动4周。用2,3,5-三苯四唑氯化物(TTC)染色评估MCAO手术是否成功建立。通过神经功能缺损评分来考察大鼠的神经功能、Morris水迷宫实验考察大鼠的认知功能、免疫荧光染色检测大鼠脑缺血半影区中的神经发生和血管生成。此外,通过蛋白质印迹法测定缺血半影区中的TLR4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、NLRP3和IL-1β的蛋白水平。结果表明,有氧运动不仅降低了大鼠的脑梗死面积和神经功能缺损评分(p<0.05),还降低了大鼠的逃避潜伏期,提高了穿越平台次数(p<0.01)及增加了缺血性中风后新生神经元的数量和脑微血管密度(p<0.05)。此外,有氧运动下调了大鼠脑缺血半影区中TLR4、p-NF-κBp65、NF-κBp65、NLRP3和IL-1β的蛋白水平(p<0.05)。研究发现,有氧运动可抑制TLR4/NF-κB/NLRP3信号传导途径来促进大鼠脑缺血半影区的神经发生和血管生成,从而提高脑缺血大鼠的神经功能和认知功能。

Stathmin mRNA在树突状细胞中的表达及其意义

目的探讨StathminmRNA在树突状细胞中的表达及其意义。方法分离和培养小鼠的树突状细胞,用细菌脂多糖(LPS)刺激0h、3h、12h后,收集细胞,并提取细胞总RNA,经RT-PCR反转录为cDNA,再通过荧光定量实时PCR检测Stathmin的mRNA水平。结果定量PCR标准曲线的相关系数为-0.99,且融解曲线峰单一,表明已成功建立了准确、特异的实时定量PCR方法。经LPS刺激后,树突状细胞Stathmin的mRNA表达水平降低,随时间的延长而递减(P<0.01)。结论树突状细胞的Toll样受体4信号途径与Stathmin的表达相关。