TLR4-P38MAPK信号通路在LPS诱导BV2细胞中的表达及意义

目的观察LPS诱导小胶质细胞后信号通路Toll样受体4(TLR4)-p38蛋白激酶(p38MAPK)的表达及意义。方法体外培养BV2小胶质细胞,分为对照组、LPS诱导组(LPS刺激12h及24h)及SB203580干预组(LPS+SB203580诱导12h及24h),应用ELISA法检测各组TNF-α、IL-6水平,RT-PCR法检测各组TLR4mRNA和p38MAPK mRNA的表达变化。结果 LPS诱导组细胞分泌TNF-α、IL-6水平显著提高,诱导24h后细胞上清液含量分别为(513.67±14.05)pg/mg和(396.84±15.41)pg/mg。给予SB203580抑制剂后TLR4mRNA和p38MAPK mRNA表达明显减弱,细胞分泌TNF-α、IL-6含量表达与感染组比较也明显降低。结论 LPS刺激小胶质细胞可引起TLR4-p38MAPK信号通路的活化并释放炎性细胞因子,而SB203580则对其有明显的抑制作用,证明TLR4-p38MAPK信号通路与小胶质细胞的炎性活化密切相关。

黄芪甲苷介导TLR4-p38 MAPK信号通路在幼鼠急性肺损伤中的研究

目的探究黄芪甲苷介导TLR4-p38 MAPK信号通路在幼鼠急性肺损伤模型中的作用。方法以7日龄SD新生仔鼠为实验对象,利用脂多糖构建幼鼠急性肺损伤模型,以地塞米松为阳性药对照,每只幼鼠腹腔注射10 m L/kg黄芪甲苷,造模后12 h和24 h观察肺组织病变,检测TLR4、p-p38蛋白和mRNA表达量,TNF-α、IL-6、IL-12炎症因子的mRNA表达量变化。结果模型组在建模后12 h呈现肺出血,大量肺泡萎陷,24 h呈现肺水肿,肺泡间隔明显增宽。和模型组相比,黄芪甲苷组肺组织的病变明显减轻。另外,蛋白检测结果表明,与模型组比较,黄芪甲苷组TLR4、p-p38蛋白表达量明显降低(P<0. 05,P<0. 001) q-PCR结果表明,与模型组比较,黄芪甲苷组TLR4 mRNA相对表达量均有明显的降低,并且和模型组有显著性差异(P<0. 05)。TNF-α、IL-6、IL-12各炎症因子均有下降的趋势,其中IL-12相对表达量和模型组有显著性差异(P<0. 05)。结论黄芪甲苷通过抑制TLR4-p38MAPK信号通路,在幼鼠急性肺损伤模型中起重要作用。

基于TLR4/p38MAPK/AP-1信号通路探讨心痛泰对兔动脉粥样硬化和血管重构的影响

目的:基于TLR4/p38MAPK/AP-1信号通路探讨心痛泰对兔动脉粥样硬化和血管重构的影响。方法:日本大耳白兔120只随机分为空白组,模型组,心痛泰低、中、高剂量组和瑞舒伐他汀组。采用前瞻性实验研究,造模的同时给予药物灌胃。8周后取胸主动脉,免疫组化法测定白介素-8(IL-8)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1);Masson染色观察胶原分解和平滑肌纤维;测定胸主动脉最大内膜厚度(MIT)、最小管腔直径(MLD)、管腔面积(LA)、内弹力膜围绕面积(IELa)、外弹力膜围绕面积(EELa),计算内膜面积(IA)、中膜面积(MA)、管腔狭窄百分比(LS);Western Blot法测定胸主动脉组织Toll样受体-4(TLR4)、丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、转录激活因子(AP-1)的蛋白表达。结果:与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组IL-8、MCP-1、MMP-9含量显著降低(P<0.01),TIMP-1含量显著升高(P<0.05,P<0.01),TLR4、p38MAPK、AP-1的蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰高剂量组及瑞舒伐他汀组IL-8、MCP-1、MMP-9显著降低(P<0.01),TIMP-1升高(P<0.01),TLR4、p38MAPK、AP-1的蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组的IA、MA、LS均显著降低(P<0.01)。与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组和瑞舒伐他汀组的IA、MA、LS均显著降低(P<0.01)。Masson染色显示,模型组管壁变薄,胶原分解增多,平滑肌纤维排列紊乱,管腔直径扩大,管腔内血栓形成;与模型组比较,心痛泰各剂量组和瑞舒伐他汀组动脉管壁胶原纤维分解减少,平滑肌细胞排列较为整齐,管腔、管壁结构有所改善。结论:心痛泰可能是通过调控TLR4/p38MAPK/AP-1信号通路及下游的细胞因子,减少血管胶原分解、抑制纤维细胞增生,改善动脉粥样硬化和血管重构。

小金丸治疗大鼠阴茎纤维化的作用及其机制研究

目的:研究小金丸对大鼠阴茎硬结症模型阴茎海绵体内Toll样受体4(TLR4)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、基质金属蛋白酶(MMP)1的表达调节及对大鼠阴茎纤维化作用的可能机制。方法:将雄性SD大鼠18只随机分为3组:对照组、模型组、小金丸治疗组;对照组阴茎海绵体白膜下注射生理盐水,饲养6周后双蒸水灌胃;模型组、小金丸治疗组阴茎海绵体白膜下注TGF-β1(转化生长因子-β1),饲养6周后用小金丸灌胃;模型组大鼠与小金丸治疗组等量双蒸水灌胃;3组灌胃处理4周后处死,留取大鼠阴茎组织。采用HE染色观察阴茎海绵体纤维化程度;PCR和Western Blot检测TLR4-p38MAPK-MMP1通路RNA和蛋白表达情况。结果:病理组织学HE染色发现,模型组比对照组纤维化明显增加;小金丸治疗组与模型组相比纤维化明显减少。对照组和小金丸治疗组的TLR4-p38MAPK-MMP1 RNA表达量及TLR4-p38MAPK-MMP1蛋白表达明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:阴茎硬结症大鼠模型阴茎海绵体内纤维化明显,TLR4-p38MAPK-MMP1表达增加;小金丸治疗后,纤维化明显改善,TLR4-p38MAPK-MMP1表达减少。小金丸治疗阴茎硬结症与TLR4-p38MAPK-MMP1介导的抗纤维化作用有关。