护心康对动脉粥样硬化兔TLR4mRNA的干预作用

目的:研究护心康对兔动脉粥样硬化防治的作用机制。方法:采用高脂喂饲复制兔动脉粥样硬化模型,将护心康分为低、中、高3个不同剂量组进行干预治疗,原位杂交法检测动脉管壁TLR4mRNA的变化。结果:护心康中、高剂量均有较好的降低兔动脉管壁TLR4mRNA的作用,高剂量作用优于低剂量,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:护心康具有降低动脉管壁TLR4mRNA的功效。

湿热证大鼠模型TLR4mRNA、NF-κBp65表达的对比研究

目的:通过多因素复合造模方法,观察模型大鼠内毒素特异性受体TLR4mRNA及NF-κBp65表达变化,探讨湿热致病机制。方法:将大鼠分为正常组、湿热模型组(高脂+高温高湿+大肠杆菌)、模型对照组(高脂+高温高湿)3组,每组8只;采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞TLR4mRNA,免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化。结果:在感染6h、12h、24h等不同时相点,湿热模型组TLR4mRNA、NF-κBp65表达与模型对照组、正常组比较均有非常显著增强(P<0.01);湿热模型组在6h、12h、24h等不同时相点,TLR4mRNA、NF-κBp65表达逐渐增强,且不同时相点之间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:靶细胞TLR4mRNA适量表达及NF-kB激活既是湿热病证的主要致病机理,又是湿热病证的相关性指标。

戊乙奎醚预处理对内毒素性脑损伤大鼠CD14和TLR4mRNA的影响

目的探讨盐酸戊乙奎醚预处理对内毒素性脑损伤大鼠CD14和TLR4mRNA的影响.方法将40只Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组),内毒素性脑损伤模型组(LPS组),低剂量戊乙奎醚干预组(PL组),高剂量戊乙奎醚干预组(PH组)4组,每组各10只,实验大鼠注射内毒素4h后处死,留取脑组织标本.光镜下观察脑组织病理变化,RT-PCR法检测CD-14和TLR4 mRNA表达,ELISA法测定TNF-a的含量.结果光镜下LPS组脑细胞损伤严重,PL组、PH组与LPS组对比脑损伤减轻.与NS组相比较,LPS组、PL组及PL组脑组织TLR4和CD14 mRNA表达水平均升高(P<0.05);与LPS组比较,PL组和PH组脑组织TLR4和CD14 mRNA表达水平均降低(P<0.05);与PL组比较,PH组TLR4和CD14 mRNA表达水平降低(P<0.05).与NS组相比较,TNF-α含量升高(P<0.05);与LPS组比较,PL组和PH组脑组织TNF-α含量降低(P<0.05);与PL组比较,PH组TNF-α降低(P<0.05).结论盐酸戊乙奎醚预处理可减轻大鼠内毒素的脑损伤,机制可能与降低CD14及TLR4mRNA的表达,阻断炎症信号传导通路,减轻炎症介质的释放有关.

哮喘患者外周血单个核细胞TLR4mRNA及NF-_κBmRNA的表达及临床意义

目的检测外周血单个核细胞TLR4mRNA及NF-_κBmRNA在哮喘患者中的表达,探讨其在哮喘发病机制中的作用以及临床意义。方法选取80例确诊哮喘患者,根据哮喘分级标准,分为急性发作组(A组)和慢性持续期组(B组),每组40人,经治疗症状体征好转后,分别作为临床缓解期组,选取同期健康体检者40例作为健康对照组(C组),应用RT-PCR法检测PBMC中TLR4mRNA及NF-_κBmRNA的表达,应用ELISA法检测血清IL-6的表达水平。结果 A组患者的TLR4mRNA及NF-_κBmRNA的水平及IL-6表达均明显高于B组(P<0.05)。A组和B组患者的TLR4mRNA及NF-_κBmRNA的水平及IL-6的表达均明显高于C组(P<0.05)。A组和B组哮喘患者经治疗后的TLR4mRNA及NF-_κBmRNA的水平及IL-6表达明显低于治疗前,且高于C组(P<0.05)。哮喘患者TLR4mRNA、NF-_κBmRNA及IL-6三者的表达相成正相关(P<0.05)。结论 TLR4mRNA、NF-_κBmRNA及IL-6共同参与了哮喘的发生和发展,三者可能存在于同一传导通路。

甘露消毒丹对湿热证大鼠内毒素转导信号的动态干预

目的:观察甘露消毒丹对温病湿热证大鼠细胞内毒素特异性受体LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA及NF-κBp65表达变化的动态干预,深入探讨清热化湿方的治疗机制。方法:分为正常组、湿热模型组(高脂+高温高湿+大肠杆菌)、清热化湿组;采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA,免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化。结果:模型组在感染6h、12h、24h等不同时相点LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达非常显著增强,且不同时相点之间比较均有显著性差异,说明随着病程的发展,湿热模型LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA、NF-κB表达逐渐增强。治疗组6h、12h、24h等不同时相点比较,LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA表达减弱,具有非常显著性差异;24h时相点治疗组与模型组比较LBPmRNA、CD14mRNA、TL-R4mRNA表达减弱有非常显著性差异,但仍未恢复正常,与正常组比较仍有极显著性差异,说明LBPmR-NA遏制衰减是一个缓慢的过程。而治疗组NF-κB激活6h、12h、24h各时相点间比较均无显著性差异;且与正常组比较NF-κB激活均无显著性变化。结论:甘露消毒丹对温病湿热证大鼠肝巨噬细胞LBPm-RNA及NF-κB的激活具有较好的干预调控作用,能中止炎症介质的转录,限制急性炎症反应。

CD14 mRNA、TLR4 mRNA在急性和亚急性MPTP帕金森病小鼠模型中的表达

目的研究急性和亚急性1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）帕金森病小鼠模型腹侧中脑与纹状体中脂多糖受体CD14 mRNA、TLR4 mRNA的表达。方法腹腔注射MPTP制作急性（20 mg/kg,4次,每次间隔2 h）和亚急性（20 mg/kg,每天1次,共7 d）帕金森病小鼠模型。实验分为4组：正常对照组（8~10周龄小鼠）、中年小鼠组（8月龄）、急性模型组（8~10周龄）、亚急性模型组（8~10周龄）,每组6只C57BL/6小鼠。模型组小鼠在末次注射MPTP 1d后取脑组织。用酪氨酸羟化酶（TH）免疫组织化学染色,观察亚急性小鼠模型黑质多巴胺能神经元数目改变情况。用RT-PCR方法检测CD14 mRNA、TLR4 mRNA的表达水平。结果亚急性小鼠模型黑质TH阳性细胞减少。急性和亚急性模型组小鼠黑质与纹状体CD14 mRNA表达水平明显增高,高于正常对照组和中年小鼠组（均P〈0.05）,TLR4mRNA表达各组间没有明显差异（P〉0.05）。结论 CD14 mRNA作为内毒素受体在MPTP帕金森病小鼠表达增高,可能涉及脂多糖介导的免疫反应,从而参与神经损伤和帕金森病病理生理过程,针对CD14的阻断中和处理可能作为一种新的帕金森病治疗措施。

LPS诱导鼠肝脏和腹腔巨噬细胞TLR4表达和肝损伤的动态分析

目的观察LPS刺激后不同时间点肝脏和腹腔巨噬细胞的TLR4表达,以及分析TLR4动态变化规律。方法以BALB/c小鼠为模型,腹腔注射LPS后不同时间取肝脏和腹腔巨噬细胞抽提RNA,逆转录-聚合酶链式反应半定量分析TLR4mRNA各时相的表达。体外培养的腹腔巨噬细胞不同剂量LPS刺激后观察TLR4mRNA的表达规律。结果注射LPS3h后肝脏和腹腔巨噬细胞TLR4mRNA开始明显下降,第6、12h基本检测不到,24h后逐渐恢复,30h小鼠死亡时基本恢复到正常。不同浓度LPS均下调腹腔巨噬细胞TLR4mRNA的表达,剂量之间差异无显著性。血中ALT在3h开始升高,6h达高峰,肝细胞病理变化出现在12h,随时间的延长而加重。结论LPS可直接损伤肝细胞,这种损伤与TLR4无关。LPS可能通过TLR4介导肝组织的病理改变。

Toll样受体4与运动的抗炎作用

慢性炎症反应状态是一种常见的亚健康状态，常存在于衰老过程中及心血管疾病、代谢综合征等慢性疾病中。众多研究表明，长期有规律的运动锻炼可降低体内炎性因子水平，即运动具有抗炎作用，但其机制还不明了。Toll样受体4（TLR4）是TLRs家族的主要成员，可识别革兰氏阴性菌细胞壁的脂多糖（LPS），是介导LPS信号转导的主要受体，与炎症反应关系密切。研究显示运动锻炼可降低体内TLR4水平和TLR4mRNA表达，

湿热证模型大鼠内毒素转导信号的动态研究

目的:通过多因素复合造模方法,观察模型大鼠内毒素特异性受体LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA及NF-κBp65表达变化,探讨湿热致病机制。方法:24只大鼠分为正常组、湿热模型组(高脂+高温高湿+大肠杆菌)、模型对照组(高脂+高温高湿)各8只,采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活性。结果:在感染6h、12h、24h等不同时相点湿热模型组LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达与模型对照组、正常组比较均有非常显著增强(P<0.01);湿热模型组在6h、12h、24h等不同时相点LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA、NF-κB表达逐渐增强。之间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:靶细胞LBPmRNA、CD14mRNA、TLR4mRNA适量表达及NF-κB激活既是湿热病证的主要致病机理,又是湿热病证的相关性指标。

血吸虫卵及环丙沙星对小鼠TNBS肠炎的预防作用

目的研究腹腔注射血吸虫卵及1：2服环丙沙星对TNBS肠炎小鼠肠道炎症及Toll样受体4（Toll-like receptor4，TLR4）的影响。方法Balb／c小鼠50只随机分为正常对照组（10只）、TNBS肠炎组（20只）、血吸虫卵组（10只）及环丙沙星组（10只）。血吸虫卵组于造模前第3、14天腹腔注射冰冻灭活血吸虫卵10。个，环丙沙星组于制作肠炎模型前予小鼠口服环丙沙星50mg·kg^-1·d^-1共2周。分别评价小鼠一般情况、死亡率、肠壁炎症程度、肠壁TLR4蛋白表达、肠壁tlr4mRNA表达及血清TNF-α水平。结果血吸虫卵组小鼠死亡率较TNBS肠炎组明显降低（20％vs70％，P〈0．05），肠壁炎症明显改善（Ameho criteria评分1．43±0．52vs4．21±0．61，P〈0．01），肠壁TLR4表达下调（0．33±0．03vs0．76±0．05，P〈0．01）；血清TNF-α表达下调，但尚无统计学显著意义（29．62±9．71vs40．50±12．48，P〉0．05）。环丙沙星组小鼠死亡率较TNBS肠炎组亦明显降低（20%vs70％，P〈0．05），肠壁炎症改善（Ameho criteria评分1．54±0．71vs4．21±0．61，P〈0．05）肠壁TLR4表达下调（0．40±0．03vs0．76±0．05，P〈0．01），血清TNF-α表达下调，但尚无统计学显著意义（27．85±16．17vs40．50±12．48，P〉0．05）。结论血吸虫及环丙沙星可有效预防TNBS诱导的小鼠肠炎，其作用机制可能与调节Th1／Th2平衡及下调TLR4表达有关。

以ALI为表现的脓毒症患者外周血PBMC TLR4 mRNA及IL-34、IL-36的表达

目的观察以ALI为表现的脓毒症患者外周血PBMC TLR4 mRNA及IL-34、IL-36的表达及与该病的相关性,探讨其对以ALI为表现的脓毒症诊断的敏感度与特异度。方法以ALI为表现的脓毒症住院患者38例为ALI组,正常体检者30例为对照组。收集研究d1及d7血液标本,应用Real Time PCR测定外周血单个核细胞(PBMC)的TLR4 mRNA,应用ELISA法检测IL-34、IL-36。结果 d7 ALI组外周血PBMC TLR4mRNA及IL-34、IL-36含量均明显低于相同患者治疗前水平(P均<0.001),治疗前ALI外周血PBMC TLR4mRNA及IL-34、IL-36含量均明显高于对照组(P均>0.001)。相关分析表明,IL-34浓度均与外周血PBMC TLR4 mRNA及IL-36浓度呈正相关(r=0.5746及0.968,P<0.05),IL-36浓度与外周血PBMC TLR4 mRNA浓度不相关(r=-0.0679)。脓毒症患者治疗前血清中上述细胞因子的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.932、0.957和0.901。外周血PBMC TLR4 mRNA取949、IL-34取88.10ng/ml、IL-36取1.03ng/ml为截断值,诊断以ALI为表现的脓毒症敏感性均为100%,特异性为0.73%、77%及84%。结论以ALI为表现的脓毒症患者外周血PBMC TLR4 mRNA及IL-34、IL-36的含量与疾病发生发展关系密切,通过监测上述细胞因子的含量可以对脓毒症病情诊断及评估做出一定的判断。

解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭大鼠肝组织TLR2、TLR4和TNF-α mRNA表达的影响

目的：探讨解毒化瘀颗粒对急性肝衰竭（ALF）大鼠Toll样受体2（TLR2）、Toll样受体4（TLR4）及细胞因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA表达的影响及其拮抗肝衰竭的机制。方法：将120只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、中药组和阳性对照组,各30只。一次性腹腔注射D-氨基半乳糖（D-Gal）/脂多糖（LPS）构建急性肝衰竭大鼠模型。观察各组大鼠存活率,检测各组大鼠血清ALT、AST水平,RT-PCR法检测肝组织中TLR2、TLR4和TNF-αmRNA的表达。结果：（1）与模型对照组比较,中药组及阳性对照组均能提高肝衰竭大鼠48 h的存活率（均P〈0.05）,虽然中药组48 h存活率高于阳性对照组,但差异无统计学意义（P=0.464）;（2）模型对照组大鼠血清AST、ALT水平均高于空白对照组（均P=0.000）,中药组和阳性对照组均低于模型对照组（均P〈0.000）,虽中药组与阳性对照组AST、ALT比较差异无统计学意义（均P〉0.05）;（3）RT-PCR结果显示,中药组和阳性对照组TLR2、TLR4、TNF-αmRNA表达较模型对照组明显降低（均P=0.000）,与阳性对照组比较,中药组TLR2、TLR4、TNF-αmRNA表达差异无统计学意义（均P〉0.05）。结论：解毒化瘀颗粒可通过降低TLR2、TLR4、TNF-αmRNA的表达,从而降低促炎因子的生成、提高肝衰竭大鼠存活率和拮抗肝衰竭。

HBV感染者外周血PBMC中TLR4 mRNA与病毒载量的相关性研究

目的探讨乙型肝炎病毒感染者外周血PBMC中TLR mRNA与乙肝病毒复制的相关性。方法采用逆转录PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中TLR4 mRNA的含量,实时荧光定量Real Time PCR的方法检测HBV DNA,进行相关性分析。结果不同病毒载量组(<1×103copies/μg DNA,1×103copies/μg DNA<且<1×105copies/μg DNA,>1×105copies/μg DNA)TLR4 mRNA水平差异具有显著性(P<0.01),HBV病毒载量的对数值与TLR4 mRNA的含量存在负相关(r=-0.537,P<0.01)。TLR4 mRNA的相对表达量与患者的ALT、AST呈正相关(r=0.608、r=0.659,P<0.01)。结论HBV在患者体内复制活跃、病毒载量增高与外周血单个核细胞TLR4mRNA的表达下调有关。