中医药干预TLRs/MyD88信号通路治疗痛风性关节炎的研究进展

痛风性关节炎(gouty arthritis, GA)作为一种炎症反应性疾病,其发病的关键是尿酸钠盐(monosodium urate, MSU)结晶沉积在关节及其周围组织,而引起的一系列炎症阶连反应。研究表明,TLRs是决定MSU结晶沉积导致GA的主要因素,TLRs/MyD88信号通路在GA的炎症反应过程中发挥着至关重要的作用,是GA最重要的信号转导通路之一,越来越多学者集中于对该通路的研究。中医药治疗充分发挥其“多途径、多环节、多靶点”的优势,近年来在GA的机制研究上取得显著成果。该文通过概述了TLRs/MyD88信号通路的结构和功能,对近5年来中医药基于TLRs/MyD88信号通路治疗GA的作用机制进行总结和分析,以期揭示现代中医药作用的靶点和调控机理,为中医药靶向防治GA及中医药现代化研究开拓思路。

多发性硬化中TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的作用及机制

背景:多发性硬化是以T细胞介导的中枢神经系统慢性炎性脱髓鞘疾病,Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核转录因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路在疾病发生发展过程中有重要作用,探究出信号通路的具体作用机制对进一步治疗该疾病,改善患者的预后至关重要。目的:综述TLRs/MyD88/NF-κB信号通路及其在多发性硬化/实验性自身免疫性脑脊髓炎模型中的作用,并就抑制该信号通路为多发性硬化的治疗提供新的思路和策略。方法:检索中国知网、万方及PubMed数据库在2002年1月至2022年12月与文章主题相关的文献,最终纳入61篇文献进行分析。结果与结论:①TLRs/MyD88/NF-κB信号通路是介导炎性免疫反应的重要信号通路;②TLRs/MyD88/NF-κB信号通路通过调节树突状细胞的抗原提呈、破坏血脑屏障的完整性、促进T细胞、B细胞和小胶质细胞的激活等途径,在多发性硬化的发展中发挥了重要的作用;③通过靶向作用于TLRs、MyD88和NF-κB分子,抑制TLRs、MyD88和NF-κB的激活或信号传导,减少促炎因子的分泌可以达到治疗多发性硬化的目的;④动物实验研究表明,中药的活性成分如黄酮类和苷类、中药复方如补阳还五汤也可通过影响TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎,这为寻找靶向TLRs/MyD88/NF-κB信号通路治疗多发性硬化的药物指明方向。

TLRs/MyD88信号通路在膝骨性关节炎患者滑膜炎症中的作用

目的探讨Toll样受体/人髓样分化因子88(TLRs/MyD88)信号通路在膝骨性关节炎患者滑膜炎症中的作用。方法2017年1月-2019年1月,回顾性收集广东省佛山市中医院收治的膝骨性关节炎患者120例,同时收集健康志愿者50例作为对照组,观察2组患者膝关节液中TLRs/MyD88信号通路相关炎症指标[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)],同时检测观察组滑膜中TLRs/MyD88信号通路中相关指标(TLR2、TLR4、MyD88),分析TLRs/MyD88信号通路相关指标与膝骨性关节炎病情严重度的相关性。结果与对照组比较,观察组关节液中TNF-α、IL-1和MMP-13表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。滑膜细胞中TLR2阳性细胞比为(53.93±12.73)%,TLR4阳性细胞比为(59.73±14.74)%,MyD88阳性细胞比为(63.85±15.96)%。Pearson线性相关性分析显示滑膜厚度、髌上囊液体深度、髌下囊液体深度、关节腔液体深度与TLR2、TLR4、MyD88、TNF-α、IL-1、MMP-13均显著正相关(P<0.05)。膝骨性关节炎患者Lysholm膝关节评分与TLR2、TLR4、MyD88、TNF-α、IL-1、MMP-13均显著负相关(P<0.05)。结论TLRs/MyD88信号通路可能在膝骨性关节炎患者中被激活,加速膝关节退变的发展过程。

补中益气汤对慢性肾炎患者微炎症状态及TLRs/MYD88信号通路的影响

慢性肾炎即慢性肾小球肾炎(chronic glomeru-lonephritis,CGN),是最常见的慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD),临床表现为蛋白尿、血尿、水肿和高血压,病程长,迁延难愈,可进展为终末期肾病(end stage renal disease,ESRD),严重影响患者身心健康和生活质量[1-2]。西医以对症治疗为主,包括利尿、降尿蛋白、降压、免疫抑制等,不良反应较多,停药后易复发。中医药在治疗CGN中,可发挥保护肾功能,延缓病情进展,减少不良反应等作用[3-4]。研究显示,全身微炎症在CGN进展过程中发挥重要促进作用[5]。本研究探讨补中益气汤对CGN微炎症状态和Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)/髓样分化因子88(myeloid differenttiation factor 88,MYD88)信号通路的影响,报道如下。

痛风宁颗粒对急性痛风性关节炎模型大鼠关节局部炎证因子及TLRs/MyD88的影响

目的探讨痛风宁颗粒对急性痛风性关节炎的抗炎机制。方法 36只雄性SD大鼠,随机设立正常组、模型组、痛风宁颗粒组及秋水仙碱组,以尿酸钠混悬液关节腔注射建立急性痛风性关节炎动物模型,运用病理学、放射免疫及RT-PCR等技术方法,观测大鼠膝关节液中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β含量及关节滑膜组织TLR-2、4及MyD88 mRNA的表达情况。结果痛风宁颗粒能显著降低急性痛风性关节炎模型大鼠关节液中中性粒细胞数、TNF-α、IL-1β含量及滑膜组织TLR-2、4及MyD88 mRNA的表达。结论痛风宁颗粒对急性痛风性关节炎的抗炎机制可能是通过抑制TLR-2、4及MyD88基因的表达,阻止TLRs/MyD88信号通路的激活,减少TNF-α、IL-1β的生成,进而减轻急性痛风性关节炎症反应。

刺血疗法结合壮医药线点灸对急性痛风性关节炎大鼠TLRs/MyD88信号通路的影响

背景随着环境及人们饮食结构的改变,急性痛风性关节炎(AGA)已成为临床常见疾病,AGA易反复发作对患者健康造成危害,临床工作中刺血疗法结合壮医药线点灸对AGA有确切的疗效,但其作用机制尚未明确。目的基于Toll样受体(TLRs)/髓样分化因子88(MyD88)信号通路探讨刺血疗法结合壮医药线点灸治疗AGA的作用机制。方法实验时间为2021年5月—2022年3月,将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、刺血组、药线组、秋水仙碱组、刺血结合药线组,每组10只。除空白组外,其余各组均将尿酸钠悬浮液注入大鼠右踝关节腔内制备AGA模型,于造模24 h后秋水仙碱组予秋水仙碱悬浮液灌胃治疗,刺血疗法组予阿是穴点刺放血治疗,药线组予壮医药线围灸病灶处,刺血结合药线组先予阿是穴点刺放血再行围灸法。观察造模后6、12、24、72 h右踝关节肿胀程度;苏木素-伊红染色观察右踝关节滑膜组织病理改变;采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清中白介素(IL)-10、IL-8及环氧化酶2(COX-2)水平;蛋白质印迹法检测右踝关节滑膜组织中MyD88和IKK-β蛋白表达。结果模型组、刺血组、药线组、秋水仙碱组造模后6、12、24、48、72 h右踝关节外踝横截面直径均高于空白组,刺血结合药线组造模后6、12、24、48 h右踝关节外踝横截面直径高于空白组,刺血组、药线组、秋水仙碱组、刺血结合药线组造模后48、72 h右踝关节外踝横截面直径低于模型组(P<0.05)。刺血组、药线组、秋水仙碱组及刺血结合药线组右踝关节其炎性细胞的浸润情况较模型组有所改善。模型组、刺血组、药线组、秋水仙碱组以及刺血结合药线组大鼠IL-8、COX-2水平高于空白组,IL-10水平低于空白组,秋水仙碱组、刺血结合药线组、刺血组、药线组IL-8、COX-2水平低于模型组,IL-10水平高于模型组,刺血组、药线组大鼠IL-8、COX-2水平高于秋水仙碱组,IL-10水平低于秋水仙碱组,刺血组、药线组大鼠IL-8、COX-2水平高于刺血结合药线组,IL-10水平低于刺血结合药线组(P<0.05)。模型组、药线组、刺血组、刺血结合药线组MyD88、IKK-β水平高于空白组,秋水仙碱组MyD8水平高于空白组,药线组、秋水仙碱组MyD88、IKK-β水平低于模型组,刺血组、刺血结合药线组MyD88水平低于模型组(P<0.05)。结论刺血疗法结合壮医药线点灸能通过调节TLRs/MyD88信号通路来改善AGA关节炎性症状,起到治疗作用,刺血疗法结合壮医药线点灸可能是AGA的潜在替代疗法。

黄芩苷对实验性结肠炎小鼠TLRs/MyD88通路的作用研究

本文研究黄芩苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的结肠炎小鼠模型的疗效,并从TLRs/MyD88通路探讨其作用机制。C57BL/6小鼠24只,分为空白对照组、模型组和黄芩苷组,用3.5%DSS诱导结肠炎模型,黄芩苷(30 mg/kg)干预7天,记录小鼠的疾病活动指数(DAI)评分,HE染色观察病理改变并评分,检测结肠髓过氧化物酶(MPO)活性,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-6浓度,Real-time PCR法检测TLR2、TLR4和MyD88 mRNA表达水平。结果显示黄芩苷能有效抑制结肠炎小鼠DAI评分、结肠组织病理学评分和MPO活性,降低IL-6和TNF-α表达,降低TLR2、TLR4和MyD88 mRNA的表达。表明黄芩苷能有效缓解DSS诱导的结肠炎小鼠模型的症状,降低炎症反应,其作用机制可能是与TLRs/MyD88通路相关。

健脾养血祛风方对树突状细胞TLRs/MyD88/NF-kB信号通路的干预机制

目的探究健脾养血祛风方对树突状细胞(DCs)Toll样受体(TLRs)经典MyD 88-NF-κB信号通路的影响。方法从小鼠骨髓分离单核细胞并诱导培养为树突状细胞。采用流式细胞术检测小鼠DCs表面分子CD80和CD86的表达情况;CCK8检测健脾养血祛风方对DCs细胞活力的影响;RT-q PCR检测TLR2、TLR3、TLR4和TLR9表达水平,同时检测下游信号相关蛋白IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB表达;ELISA检测IL-4、IL-10、INF-γ、IL-12水平。结果在不影响细胞活力的前提下,50μg/mL健脾养血祛风方能明显增加TLR2、TLR3、TLR4和TLR9的表达(P<0.01),同时能促进DCs中IRAK-1、IRAK-4、TRAF6、p38、MyD 88、NF-κB水平(P<0.01)。此外,50μg/mL、75μg/mL健脾养血祛风方还可增加INF-γ、IL-12的释放(P<0.01),抑制IL-4、IL-10的生成(P<0.01)。结论健脾养血祛风方可促进DCs的TLRs/MyD 88/NF-κB信号通路激活,从而调控炎症因子表达,使Th1/Th2细胞因子网络平衡体系向Th1方向倾斜,缓解特应性皮炎(AD)。

复方蜥蜴散不同微粒组合剂干预大鼠溃疡性结肠炎模型TLRs/MyD88信号通路及下游炎症因子的实验研究

目的探讨复方蜥蜴散不同微粒组合剂干预大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型TLRs/My D88信号通路中肠组织髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白表达、下游炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及其对UC的作用机制。方法雄性SD大鼠84只,随机分为6组,即正常对照组、模型组、柳氮磺吡啶片治疗组、蜥蜴散80目、100目、80+100目等量混合治疗组,分别编号A^F组。A组予0.9%Na Cl溶液灌肠处理,B^F组均采用三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠诱导制备UC模型。造模成功后,治疗组(C^F组)分别给予对应药物灌胃治疗,A组及B组给予0.9%Na Cl溶液灌胃治疗,连续14 d,频次相同。14 d后麻醉全部大鼠,行腹主动脉取血,离心低温保存,取血后取结肠组织病变处包埋。采用HE染色观察大鼠结肠黏膜病理改变,采用免疫组化法检测My D88、TRAF6蛋白的原位表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA试验)检测血清TNF-α水平。结果与正常对照组比较,其他组My D88、TRAF6蛋白表达量及TNF-α水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);各治疗组与模型组比较,各项指标水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05);复方蜥蜴散各治疗组与柳氮磺吡啶片治疗组比较,复方蜥蜴散80+100目组治疗效果最佳,差异有统计学意义(P<0.05),蜥蜴散80目、100目组与柳氮磺吡啶片治疗组比较,差异无统计学意义(P>0.05);复方蜥蜴散各治疗组间比较,80+100目等量混合组各项指标水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论复方蜥蜴散不同微粒组合剂能抑制TLRs/My D88信号通路下游信号传递分子My D88、TRAF6蛋白表达及降低下游炎症因子TNF-α水平,提示其治疗溃疡性结肠炎的主要作用机制在于阻断溃疡性结肠炎的炎症反应,调节免疫,恢复肠道屏障,维持肠道稳态,促进肠黏膜修复。

HMGB1/TLRs/MyD88信号通路与神经病理性痛

HMGB1/TLRs/MyD88信号转导通路是生物体内重要的信号通路之一,在免疫功能调节中发挥着重要作用。近年来有研究表明,HMGB1/TLRs/MyD88信号转导通路激活后可诱导和维持不同条件下的痛敏反应,参与神经病理性痛的发生、发展过程。随着在细胞、分子水平对这一信号通路参与神经病理性痛的机制研究,将为神经病理性痛的临床治疗提供新靶点和理论依据。

基于TLRs/MyD88信号通路探讨丹蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠的作用机制研究

目的基于Toll样受体(TLRs)/髓样分化因子88(MyD88)通路探讨丹蛭降糖胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的干预作用及机制。方法将60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、缬沙坦组和丹蛭降糖胶囊组,干预16周,观察各组大鼠一般状况的变化、生化法测定糖脂代谢、肾功能相关指标;酶联免疫吸附法检测相关炎症因子水平;实时荧光定量聚合酶链式反应检测TLR2、TLR4、MyD88 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测自噬相关因子Beclin1、LC3-I、LC3-II的表达水平;透射电镜观察大鼠肾组织细胞;流式细胞仪检测肾足细胞活性氧水平;细胞计数法检测细胞增殖情况。结果与模型组大鼠相比,丹蛭降糖组及缬沙坦组大鼠生存质量提高,糖脂代谢、肾功能相关指标显著改善(P<0.01),IL-1β、TNF-α水平降低,IL-10水平升高(P<0.05),肾组织细胞中TLR2、TLR4、MyD88 mRNA表达增加(P<0.05),Beclin1、LC3-I、LC3-II蛋白表达水平降低(P<0.05),肾脏组织病理均有不同程度改善,氧化应激水平减少,细胞增殖增加(P<0.05)。结论丹蛭降糖胶囊能提高糖尿病肾病大鼠生存质量,减少细胞过度自噬,减轻肾脏细胞损伤,其作用机制可能与调节TLRs/MyD88信号通路有关。

羊肺炎支原体感染对贵州不同品种羊TLRs MyD88通路因子转录水平的影响

羊肺炎支原体(Mo)可引起山羊、绵羊发生支原体肺炎。本研究旨在分析Mo感染对贵州不同品种羊Toll样受体(TLRs)MyD88通路因子基因转录水平的影响,进而分析不同品种羊对Mo感染的差异性。本研究以Mo人工感染贵州5个主要品种羊,应用TaqMan RT-qPCR方法对不同品种试验羊肺脏和血液样本TLRs MyD88通路因子基因转录水平进行定量检测与分析。结果显示,不同品种羊感染Mo后,MyD88、TRAF6、NF-κB、FOS、JUN基因mRNA相对表达量均显著上调(P<0.01)。同时发现,感染死亡的贵州黑山羊、贵州白山羊血液和肺脏样本中MyD88、FOS基因转录水平上调倍数均显著高于感染未死亡的波尔山羊、湖羊(P<0.05);感染未死亡的波尔山羊血液中NF-κB基因转录水平上调倍数均极显著高于其余四种羊(P<0.01),这种差异表达出现的原因可能是Mo对不同品种羊的致病机理不同。以上研究结果表明,贵州不同品种羊对Mo的易感程度与TLRs MyD88通路因子转录水平有关,为研究Mo对于不同品种羊的致病机制提供基础研究资料。

纳-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂调控TLRs/MyD88通路对高糖诱导HAECs自噬及凋亡的影响

目的:探讨纳-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT-2i)调控TLRs/My D88通路对高糖诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)自噬及凋亡的影响。方法:选用HAECs,将细胞分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖)、HG组(30 mmol/L葡萄糖)和SGLT-2i+HG组(30mmol/L葡萄糖+50μmol/L的SGLT-2抑制剂)。检测出各细胞生长活力、细胞凋亡水平、细胞TLRs、My D88 m RNA表达水平,细胞TLRs、My D88、Bax、Bcl-2、Beclin 1、LC3II蛋白表达以及自噬水平。结果:与NG组相比,HG组细胞增值率显著降低(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞增值率显著上升(P<0.05)。12 h时24 h时时间点,与NG组相比,HG组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞凋亡率均显著下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞Bax、Bcl-2表达水平下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组自噬相关蛋白Beclin 1、LC3II水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞Beclin 1、LC3II水平下降(P<0.05)。与NG组相比,HG组TLRs、My D88蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组相比,SGLT-2i+HG组细胞TLRs、My D88表达水平下降(P<0.05)。结论:SGLT-2通过调控TLRs My D88通路抑制高糖诱导的人主动脉内皮细胞自噬及凋亡。

“运腹通经推拿法”对单纯性肥胖症模型家兔TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的研究"运腹通经推拿法"对单纯性肥胖症模型家兔TLRs/MyD88/NF-κB信号通路的影响,探讨该疗法对脂肪细胞炎性反应的调控机制。方法 34只6月龄清洁级新西兰家兔,随机选取7只为空白组进食普通饲料,剩余27只采用经典高脂饲料喂养进行造模,6周后去除空白组和肥胖组内体质量最低和最高的家兔各2只以缩小误差。肥胖组重新随机分为模型组5只、对照组(盐酸西布曲明片)5只、推拿1组(低刺激量)、推拿2组(中刺激量)和推拿3组(高刺激量)各5只;五组家兔连续治疗6周,每周治疗6天。治疗结束后通过光镜分别观察六组家兔腹部脂肪组织HE染色病理切片结果;荧光定量PCR和Westtern blot分别检测各组家兔腹部脂肪组织TLR4、MyD88、NF-κB基因和蛋白表达。结果空白组家兔脂肪细胞正常,模型组可见间质脂肪增生,部分区域有坏死、水肿;推拿1组脂肪细胞形态与模型组相类似;推拿2组、推拿3组和对照组脂肪细胞形态尚可,但尚未恢复到空白组水平,且三组之间未见明显差异;与模型组比较,对照组、推拿2组、推拿3组脂肪组织TLR4、MyD88、NF-κB基因和蛋白表达均显著下调(P<0.05);与对照组比较,推拿2组、推拿3组脂肪组织mRNA及蛋白表达均显著下调(P<0.05)。结论运腹通经推拿法治疗单纯性肥胖具有一定的优势,并且取得了和盐酸西布曲明片相当的治疗效果,作用机制通过躯体刺激可能调控单纯性肥胖症家兔TLR信号转导通路,从而抑制下游MyD88、NF-κB表达,阻断脂肪炎性细胞因子的分泌,改善脂肪细胞形态变化。

黄褐斑患者血清氧自由基和TLRs/MYD88信号通路表达与病情的关系

目的探讨黄褐斑患者血清氧自由基和TLRs/MYD88信号通路表达水平与患者病情严重程度的关系。方法选择本院2016年9月-2017年6月治疗的90例黄褐斑患者作为研究对象,所有患者采用放射性免疫吸附法检测血清中氧化应激水平,黄褐斑患者外周血单个核细胞TLRs/MYD88信号通路表达水平。结果显效皮损患者氧化应激物MDA、AOPP水平均低于无效、有效患者;抗氧化物质GSH-PX、SOD水平均高于无效、有效患者;无效患者TLR2、TLR4、MYD88表达水平均高于有效、显效患者;重度皮损患者氧化应激物MDA、AOPP水平均低于轻度、中度患者;抗氧化物质GSHPX、SOD水平均高于轻度、中度患者;重度皮损患者TLR2、TLR4、MYD88表达水平均高于轻度、中度患者,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。结论黄褐斑患者氧自由基和TLRs/MYD88水平与患者病情和治疗效果密切相关。

秃疮花异紫堇碱对LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞炎症因子和TLR2/MYD88/NF-κB通路的影响

试验旨在探究秃疮花异紫堇碱(ICD)对脂多糖(LPS)诱导的牛肺微血管内皮细胞(CPA 47)炎症因子和Toll样受体2/髓样分化因子88/核转录因子-κB(TLR2/MYD88/NF-κB)通路的影响。选取CPA 47分为5组接种于6孔板中,每组设置4孔,对照组细胞加入1640培养基,LPS组加入脂多糖处理建立炎症模型,ICD高剂量组细胞加入20 mg/L ICD+50μg/L LPS,ICD中剂量组细胞加入15 mg/L ICD+50μg/L LPS,ICD低剂量组细胞加入10 mg/L ICD+50μg/L LPS。分别利用ELISA检测各组的炎性因子含量,实时荧光定量PCR检测TLR2/MYD88/NF-κB通路中关键基因的表达量,免疫印迹法(Western blot)检测上述通路中各蛋白含量。结果显示,与对照组相比,LPS处理组和ICD低剂量组牛肺微血管内皮细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量显著升高(P<0.05),TLR2、NF-κB、MYD88的mRNA表达量和蛋白含量显著升高(P<0.05)。与LPS组相比,ICD高、中剂量组中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α含量显著降低(P<0.05),TLR2、NF-κB、MYD88的mRNA表达量和蛋白含量显著降低(P<0.05)。研究表明,15~20 mg/L ICD可以有效缓解LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞的炎症反应,抑制LPS诱导的牛肺微血管内皮细胞TLR2/MYD88/NF-κB炎症通路的激活。

基于TLRs/MyD88通路探讨益气清湿化瘀法治疗气虚血瘀夹湿证盆腔炎性疾病反复发作疗效及机制

目的:从Toll样受体/人髓样分化因子88(TLRs/MyD88)通路入手探讨益气清湿化瘀法治疗气虚血瘀夹湿证盆腔炎性疾病(PID)反复发作疗效及机制。方法:随机选择PID反复发作患者50例,采用益气清湿化瘀综合方案治疗3个月。检测治疗前后外周血单核细胞中TLR2、TLR4蛋白及mRNA,MyD88、suPAR、hs-CRP的表达水平。结果:疼痛、中医证候、体征评分均较治疗前下降(P<0.05),总有效率分别为94.00%、96.00%、96.00%,复发率为6.67%。与治疗前比较,治疗后外周血单核细胞中TLR2、TLR4蛋白及mRNA、MyD88、suPAR表达水平均降低(P<0.01)。hs-CRP治疗后有降低趋势。MyD88与suPAR的表达呈正相关,相关系数为0.841,相关性有统计学意义(P<0.05)。结论:益气清湿化瘀综合方案治疗气虚血瘀夹湿证PID反复发作在改善盆腔疼痛症状、中医证候以及体征方面疗效确切,停药3月后复发率低,可能通过下调血清MyD88的表达从而改善免疫功能。初步认为suPAR比hs-CRP可能更适合作为PID反复发作患者疗效评价的检测指标之一。

基于TLR-4/MyD88/NF-κB对健脾化滞丸治疗溃疡性结肠炎的机制进行拆方研究

目的:通过建立脾虚湿蕴型溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型,探讨健脾化滞丸及其不同拆方对TLR-4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:64只Wistar大鼠随机分为正常对照组8只、模型组56只,采用中医证候联合乙醇-2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后,将模型大鼠随机分为模型组(M)、美沙拉嗪组(A)、健脾化滞丸全方组(B)、健脾清化方组(C)、健脾清化活血方组(D)、健脾清化导滞方组(E)、清化导滞活血方组(F),每组8只,给予相应药物灌胃4周,疗程结束后处死所有大鼠并取材,观察大鼠体质量变化、疾病活动度及结肠病理改变,ELISA及免疫组化检测大鼠结肠组织TNF-α表达;RT-PCR及Western blot检测大鼠结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达。结果:健脾化滞丸全方、健脾清化方、健脾清化活血方组及健脾清化导滞方组大鼠体质量明显高于模型组(P<0.01),各治疗组均能明显改善UC模型大鼠结肠组织病理损伤及疾病活动指数,其中健脾化滞丸全方组及健脾清化活血方组作用最好。各治疗组均可抑制结肠组织TLR-4、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达(P<0.001),其中美沙拉嗪组、健脾化滞丸全方组、健脾清化导滞方组及清化导滞活血方组在降低NF-κB mRNA及蛋白表达上明显优于健脾清化方组及健脾清化活血方组(P<0.05)。各组均能降低结肠组织TNF-α表达(P<0.001),组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:健脾化滞丸及各拆方均可能通过TLR-4/MyD88/NF-κB通路发挥作用,其中黄连、煨木香、凤尾草、炮姜可能为本方核心药物,对临床具有一定指导意义。

鸦胆子苦醇通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的机制研究

目的探究鸦胆子苦醇(Brusatol,BRU)通过TLR9-MyD88信号通路调控Hela细胞凋亡的分子机制。方法针对本实验室保存的Hela细胞,使用不同浓度(0、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0 nmol·L^(-1))的鸦胆子苦醇处理细胞。并将Hela细胞分为Control组(正常培养的Hela细胞)、BRU-L组(使用10.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)BRU-H组(使用20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇处理细胞)、BRU+pcDNA-NC组(转染pcDNANC+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)、BRU-H+pcDNA-TLR9组(转染pcDNA-TLR9+20.0 nmol·L^(-1)的鸦胆子苦醇)。使用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和EdU法检测各组细胞增殖情况;TUNNEL染色法,经流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白免疫印迹(Western blot)检测各组细胞TLR9、MyD88、Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)情况、ELISA检测各组细胞三磷酸腺苷(ATP)和活性氧基团(ROS)含量。结果与0 nmol·L^(-1)组比较,10 nmol·L^(-1)组细胞活存活率、IC50值开始显著降低(P<0.05)。不同浓度的BRU刺激细胞后,细胞增殖能力显著降低,且呈剂量依赖(P<0.05)。。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(EDU)阳性细胞率、缺口末端标记法(TUNEL)阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著降低,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显增加(P<0.05);Control组、BRU-L、BRU-H组/BRU-H+pcDNA-NC呈持续递减/递减趋势(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组EDU阳性细胞率、TUNEL阳性细胞率、细胞凋亡率、细胞Bcl-2蛋白均显著升高,TLR9和MyD88蛋白、Bax、Bax/Bcl-2、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平均明显降低(P<0.05)。与Control组比较,BRU-L、BRU-H组、BRU-H+pcDNA-NC组细胞JC-1水平和ATP含量显著降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平显著增加(P<0.05);与BRU-L组比较,BRU-H组、BRU-H+pcDNANC组JC-1水平和ATP含量进一步降低,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平进一步增加(P<0.05);与BRU-H+pcDNA-NC组比较,BRU-H+pcDNA-TLR9组细胞JC-1水平和ATP含量增加,而ROC含量、mitotracker染色阳性细胞水平降低(P<0.05)。结论鸦胆子苦醇可通过调控TLR9-MyD88信号通路制Hela细胞增殖。

还原性谷胱甘肽对血液透析患者TLRs/MYD88信号通路和微炎症状态的影响

目的探讨还原型谷胱甘肽对血液透析患者TLRs/MYD88信号通路和微炎症状态的影响。方法选取2016年1月-2017年1月在本院血液净化中进行维持性透析治疗的患者200例作为研究对象,采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组各100例,所有患者均给予透析常规治疗,观察组患者在常规治疗的基础上给予还原型谷胱甘肽进行临床干预,对比2组患者治疗前后单个核细胞TLRs/MYD88信号通路和微炎症状态及氧化应激水平。结果治疗后观察组TLR2、TLR4、MYD88水平低于对照组,血清中IL-2、IL-6、IL-8水平低于对照组,治疗后观察组MDA、AOPP均较治疗前下降,氧化物GSH-PX、SOD较治疗前明显上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论还原型谷胱甘肽有助于抑制TLRs/MYD88信号通路活化,抑制微炎症状态。