TMB-酶联免疫吸附方法检查特异性抗核抗体应用的研究

本文应用TMB-酶联免疫吸附试验(TMB-ElISA)对380例连续受检的病人血清中的特异性抗核抗体进行了检查。结果显示ANA与抗DNP,抗ECA及抗DNA的符合率为70％。SLE的阳性率为100％,而且抗体效价高。其它疾患的阳性率在40～54％,再障患者几乎无显著阳性病例。TMB-ELISA方法操作简便、灵敏度高,不需特殊设备,可以目测,有利于推广。可为自身免疫病的诊断提供依据。

ELISA测定中TMB显色体系的优化及其稳定性研究

通过对间接酶联免疫测定中显色体系的各影响因素的研究,确定了酶联免疫测定的最优显色体系为二甲基亚砜(DMSO)配制四甲基联苯胺(TMB)浓度为0.3 mg/mL的溶液为A液,pH5.5,0.2 mol/L磷酸氢二钠与0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制过氧化脲素浓度为0.74 mg/mL的溶液为B液,两者按一定比例混合后使用。试验结果表明,此显色体系在25-40℃内进行都可得到较为准确的结果,且A、B液混合后在室温下放置4 h仍可使用。A液及B液分别在4℃放置60 d后混合使用仍不影响测定结果。

3,3',5,5'-四甲基联苯胺-H_2O_2-辣根过氧化物酶伏安酶联免疫分析法测定人血清免疫球蛋白E

A differential pulse voltammetric immunoassay associated with the TMB-H2O2-HRP for the determination of IgE antibody was developed. The enzymatic reaction product produced by HRP catalyzing the oxidation of H2O2 with TMB exhibits a sensitive voltammet-ric response at 0.10V(vs.Ag/AgCl) in pH4.0 phosphate-citrate buffer solution. The de-tection limit of the present method for IgE antibody was 4.0IU/mL, which was four times lower than that obtained by traditional spectrophotometric ELISA procedure. It has been ap-plied to the determination of IgE in human serum with satisfactory results.

ELISA方法检测抗体中两种显色系统的比较研究

目的 用TMB（3,3,5,5-四甲基联苯胺）替代OPD（邻苯二胺）作为ELISA实验中的显色剂,以减少OPD对实验操作人员的危害及对环境的污染. 方法 依据国家标准ELISA法进行操作,对小鼠肝炎病毒（MHV）抗体ELISA法的OPD和TMB两种显色系统的稳定性、特异性、敏感性及重复性进行比较. 结果 TMB系统较OPD系统：TMB比OPD稳定,相对偏差（15.3%）小于OPD（17.7%）;TMB系统特异抗原孔P/N值高于OPD特异抗原孔P/N值,差异显著（P〈0.05）;酶的使用浓度TMB是OPD的0.25倍,检测灵敏度是OPD的2倍;使用TMB,正常抗原和特异抗原孔批内和批间变异系数分别为3.9%、4.7%和13.0%、11.3%：而OPD分别为2.7%、4.5%和11.2%、9.5%. 结论 TMB较OPD稳定性、重复性好,敏感性、特异性强,可以替代OPD作为MHV抗体ELISA法的显色剂.

间接酶联免疫吸附试验显色系统主要影响因素的探讨

酶联免疫吸附试验(ELISA)易受多种因素影响,其中包括显色系统。本文就ELISA常用的四甲基联苯胺(TMB)显色系统的成份、含量及反应条件对ELISA显色状态的影响进行了探讨,制订了一种通用的调整包括pH值、底物成份及含量、反应时间等在内的显色系统参量的方法,应用该方法为确定适用于任一特定ELISA的显色系统以及建立稳定的ELISA体系奠定了基础。

正交试验优化ELISA检测中TMB/HRP显色体系的研究

目的:建立ELISA显色体系的优化方法,优化TMB/HPR显色系统的反应参数。方法:首先采用单因素试验,研究显色体系中的缓冲溶液pH、TMB浓度、H2O2浓度、反应时间和温度对显色的影响,在此基础上,再进行5因素4水平的正交试验。结果:TMB/HRP体系的最佳工作条件:缓冲液pH为5.0,TMB浓度为2.5mg/ml,H2O2浓度为0.03%(V/V),反应温度为30～50℃,反应时间为10min。结论:优化的TMB/HRP最佳反应条件,可以满足一般反应的要求,所建立的TMB/HRP体系的优化方法也适用于其它ELISA显色系统的优化。

硫代硫酸钠在四甲基联苯胺贮液保存中的应用

为解决试剂四甲基联苯胺（TMB）贮液在储藏时容易变色的问题，本研究改良了TMB贮液的配方，即在原有每毫升TMB贮液中加入3μL 2mg／mL的抗氧化剂五水硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O）溶液。试验结果表明，新配方TMB贮液至少能在4℃下贮存3个月不变色且不影响显色效果。同时，对照原有配方中已经变色的TMB贮液，发现根据变色深浅，每毫升中加入2～6μL 2mg／mL Na2S2O3·5H2O溶液，3～6h后会变回无色，颜色消失的TMB贮液可重新利用而不影响显色效果。

ELISA测定中HRP/TMB显色体系的优化及稳定性研究

为建立ELISA测定中HRP/TMB显色体系的优化方法,开发一种灵敏度高、性能稳定的HRP/TMB显色液,实验采用单因素试验,考察了pH、TMB质量浓度、过氧化脲质量浓度、DMSO体积分数、甘油体积分数和显色时间对显色效果的影响;采用L9(34)正交实验,进行了工作条件优化;最后,对自制的显色液进行了贮藏稳定性研究,并与3种商品化同类产品进行了质量对比.结果显示:HRP/TMB显色体系的最佳工作条件为pH 5.0,TMB质量浓度0.4 g/L,过氧化脲质量浓度0.4 g/L,DMSO体积分数2%,甘油体积分数5%,显色时间10 min;4℃储藏90 d,稳定性良好;与商品化产品对比,自制显色液的灵敏度较高,显色时间较短,但稳定性较差.实验提供了一种HRP/TMB显色体系的优化方法及显色液配方,能满足大部分实验室ELISA研究需求,但其稳定性尚不能达到商品化产品需求,需进一步研究.