TMEM119在乳腺肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的:研究TMEM119在正常及乳腺良恶性肿瘤组织中的表达差异,探讨其在乳腺上皮肿瘤鉴别诊断及恶性肿瘤中的临床及预后价值。方法:利用cBioPortal下载TCGA乳腺癌基因表达谱资料及临床相关资料。免疫组化分析TMEM119在肿瘤组织及正常组织中的表达差异;进一步探讨TMEM119的表达差异与乳腺癌患者临床病理特征的相关性及其对预后的影响。结果:乳腺癌组织中的TMEM119表达明显高于配对的正常组织及良性肿瘤(P<0.01),TMEM119表达与肿瘤组织的淋巴结转移、远处转移、病理分期及预后相关(P<0.05)。结论:TMEM119可为良恶性肿瘤鉴别诊断、预测乳腺癌转移及判断预后的有效分子标记物,是影响患者预后的不良因素之一。

Tmem119基因敲入荧光示踪工具小鼠的构建及表型验证

[目的]通过将tdTomato基因片段插入到Tmem119基因终止密码子位置建立了Tmem119-tdTomato工具小鼠模型,并对该小鼠进行表型验证。[方法]制备Tmem119 sgRNA、Cas9 mRNA和donor vector,利用CRISPR/Cas9技术通过显微注射共同注射到C57BL/6小鼠受精卵中,通过交配及基因型鉴定获得F1代阳性小鼠;通过荧光检测验证小鼠Tmem119蛋白在大脑各区域的表达情况。[结果]基因型检测结果表明,tdTomato表达片段成功插入到Tmem119基因终止密码子前;免疫荧光检测结果表明,tdTomato蛋白荧光在小胶质细胞内与经典标记蛋白Iba1荧光重叠,与星形胶质细胞标记蛋白GFAP不重叠。[结论]成功构建特异性标记小胶质细胞的红色荧光示踪工具小鼠,为小胶质细胞的动态深入研究提供模式工具。

小鼠角膜上皮细胞诱导获得小胶质样细胞

背景:小胶质细胞是中枢神经系统最主要的免疫细胞,对研究多种疾病的发生和治疗有重要意义,但体外个体化细胞的获得受限。目的:建立一种新的小胶质细胞诱导培养体系,将小鼠角膜上皮细胞诱导成为小胶质样细胞并对其进行鉴定。方法:裂解2周龄小鼠角膜上皮组织获得上皮细胞,先后加入含有白细胞介素34(100 ng/mL)、集落刺激因子1(5 ng/mL)和转化生长因子β(1 ng/mL)、白细胞介素6(1 ng/mL)、重组血管内皮生长因子(1 ng/mL)的改良培养基,并且持续处理到16 d。通过转录水平、蛋白表达水平、亚细胞定位、流式分析和形态学观察多角度评估诱导后的细胞性质。结果与结论:诱导后获得表达TMEM119、CXCL11、CD11b、CD68小胶质细胞特征分子的细胞,形态学观察、流式分析和荧光检验后确定其表达产物具有较高丰度,与小胶质细胞极为相似。