TMEM64在肝癌组织中高表达并促进肝癌细胞的增殖和侵袭

目的分析TMEM64在肝癌中的表达情况及对肝癌患者预后评估价值,探讨TMEM64对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法采用癌症基因组图谱(TCGA)数据库和基因型组织表达项目(GTEx)分析TMEM64在肝癌中表达水平。采用Wilcoxon秩和检验方法比较分析TMEM64基因在肝癌和癌旁组织中的表达差异。利用Kaplan-Meier曲线和Cox回归分析评估TMEM64的表达水平对肝癌患者总生存期的影响及预后预测价值。通过单样本基因富集分析评估TMEM64的表达与免疫细胞浸润水平之间的相关性。依据TMEM64表达水平及相关临床变量构建基于总体生存率的nomogram图并进行验证。细胞实验中,在HCCLM3细胞中敲低TMEM64,分为si-NC(对照组)、si-TMEM64#1(敲低组1)、si-TMEM64#2(敲低组2)3个组;在Huh7细胞中过表达TMEM64,并分为vector(对照组)和TMEM64(过表达组),采用CCK-8、EdU和克隆形成实验检测TMEM64对肝癌细胞增殖的影响,使用Transwell和细胞划痕实验验证TMEM64对肝癌细胞迁移和侵袭能力的改变。结果TMEM64在肝癌中的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.001)。Kaplan-Meier生存分析显示,TMEM64高表达与肝癌患者不良总生存时间相关,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,TMEM64高表达是肝癌患者OS的独立危险因素(P<0.05)。TMEM64的表达与NK细胞、CD8+T细胞和p DCs细胞的免疫细胞浸润水平呈负相关(P<0.05)。GO、KEGG和GSEA富集分析结果显示TMEM64与信号传递及肿瘤转移相关通路显著富集。列线图和校准曲线显示模型预测效能与实际结果相符。敲低TMEM64能抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.01),过表达TMEM64能促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.01)。结论TMEM64在肝癌中高表达,TMEM64高表达是肝癌患者不良预后的独立危险因素。TMEM64能促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

TMEM64基因真核表达载体的建立与表达

目的构建带有GFP标签的TMEM64真核表达质粒，探求TMEM64在293T细胞中的表达特点。方法首先用RT—PCR的方法扩增白血病细胞株NB4中的TMEM64基因，并将其克隆到pEGFP—N2载体，然后用该质粒转染293T细胞，最后运用Western印迹检测TMEM64蛋白的表达情况，免疫荧光检测该蛋白亚细胞定位。结果在转染pEGFP—N2-TMEM64质粒的293T细胞中，能够检测到TMEM64一GFP重组蛋白的表达，而且该重组蛋白主要表达在细胞膜中。结论我们成功构建了带GFP标签的TMEM64真核表达质粒，为进一步研究TMEM64的功能奠定了分子基础。