下调TMEM97对卵巢癌细胞SKOV3增殖、凋亡的影响及其相关机制探讨

目的观察下调跨膜蛋白97(TMEM97)对卵巢癌细胞SKOV3增殖和凋亡的影响,并探讨其相关机制。方法将卵巢癌细胞SKOV3分为转染组(si-TMEM97组)、阴性对照组(siNC组)和空白对照组(Control组)。采用实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot法分别在mRNA和蛋白表达水平评估转染siRNA-TMEM97后TMEM97的沉默效果;分别在转染后采用CCK-8法、PI染色法、Annexin V-FITC/PI染色法和流式细胞术检测下调TMEM97对细胞的增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响,并检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白质(Bax)及P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)通路相关蛋白(P38/MAPK、p-P38/MAPK)的表达变化。结果si-TMEM97组细胞的增殖能力相比Control组和siNC组降低,而早期凋亡率增高(均P<0.01)。si-TMEM97组细胞Bcl-2的蛋白相对表达量较Control组和siNC组降低,而Bax、p-P38/MAPK的蛋白相对表达量较Control组和siNC组增高(均P<0.05)。结论下调TMEM97的表达使卵巢癌细胞SKOV3增殖减少,凋亡增加,这可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax表达及P38/MAPK信号通路的激活有关。

TMEM97蛋白对神经母细胞瘤侵袭迁移的影响及机制研究

目的探究跨膜蛋白(TMEM97蛋白)对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)转移的影响及潜在作用机制。方法从GEO和TARGET数据库中下载NB的基因测序数据,分析TMEM97与预后的关联性。免疫组织化学检测患儿NB组织和对照组织中TMEM97的蛋白表达。共表达基因富集分析预测TMEM97生物学作用,并在NB细胞株SH-SY5Y中干扰或过表达TMEM97,Transwell和细胞划痕实验检测细胞迁移和侵袭的变化,Western blot检测转移相关蛋白表达水平。分析预测TMEM97与MYCN扩增的关联性并结合荧光素酶实验检测N-myc对TMEM97转录的影响。结果TMEM97 mRNA在高危型NB中的表达量显著高于低危型,并与NB患儿总生存率、无病生存率呈负相关。TMEM97蛋白表达水平在NB组织中显著高于对照组织。TMEM97主要与细胞黏附相关,可显著促进NB细胞的侵袭和迁移能力,伴随有LMO1、GPC2、Syntenin-1和MMP9转移相关蛋白的显著上调。在MYCN扩增组织中TMEM97 mRNA表达显著高于无扩增组织,并且N-myc可以直接靶向结合启动子促进TMEM97转录,干扰TMEM97的表达可显著抑制N-myc对侵袭和迁移的促进作用。结论TMEM97是一个不良预后因素,受转录因子N-myc直接激活转录并介导NB细胞侵袭和迁移的发生。