TMPRSS3基因的VUS变异在1个耳聋家系中的致病性分析

目的针对一对耳聋夫妇和其胎儿进行家系全外显子组检测,为该家系遗传咨询提供参考和依据。方法收集该家系的临床资料,采集孕妇和其配偶的外周血和孕妇羊水,并提取基因组DNA,应用家系全外显子组测序技术进行产前遗传学检测,发现疑似致病位点进行Sanger测序验证;通过Minigene技术针对可能导致异常选择性剪切突变位点进行分析。结果孕妇携带跨膜丝氨酸蛋白酶3基因(transmembrane serine protease 3,TMPRSS3)的复合杂合疑似致病突变,孕妇配偶携带GJB2基因c.235delC的纯合致病突变。胎儿携带TMPRSS3基因复合杂合突变,分别来源于父亲的意义未明的c.323-8T>C杂合突变以及来源于母亲的c.325 C>T杂合突变;采用Minigene技术检测发现c.323-8T>C杂合突变未导致明显的剪切改变。结论TMPRSS3基因的复合杂合突变可能是导致孕妇耳聋的原因,GJB2基因纯合突变是导致孕妇配偶耳聋的原因,胎儿携带的TMPRSS3基因复合杂合突变不会导致耳聋,夫妇再生聋儿的几率很小。

跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3与遗传性耳聋

跨膜丝氨酸蛋白酶TMPRSS3(transmembrane protease,serine3)属于TTSPs(typeⅡtransmembrane serine proteases)家族成员,在分子结构上,TMPRSS3具有典型的TTSPs结构域,如丝氨酸蛋白酶、LDLRA、SRCR等.TMPRSS3有不同的蛋白异构体,其中异构体A是体内最主要的存在形式,主要在内耳表达,亚细胞水平定位于内质网膜上,TMPRSS3基因缺陷是遗传性耳聋DFNB8/10的遗传基础,因此目前对TMPRSS3的功能研究主要集中在听觉系统方面,此外蛋白异构体D还可能是卵巢癌的生物学标志物.TMPRSS3是迄今为止发现的第一个基因突变能引起耳聋的蛋白酶,表明听觉通路上的某些关键调控因子可能作为它的生理学底物被水解激活,从而介导相应的信号转导途径,但它激活了哪些信号通道,目前尚不清楚.借鉴mCAP(mouse channel activating protease)的功能预测ENaC(epithelial sodium channel)可能是TMPRSS3的作用底物,推测TMPRSS3参与内耳Na+平衡调控,但仍有待于体内实验证实.当前酶学领域研究技术的革新发展,尤其酶降解组学的应用,为认识蛋白酶TMPRSS3的功能及其复杂的分子调控机制提供了新的捷径.

增龄相关性听力损失大鼠耳蜗TMPRSS3和ENaC-α蛋白的表达

目的通过检测增龄相关性听力损失SD大鼠耳蜗中跨膜丝氨酸蛋白酶3(transmembrane protease,serine 3,TMPRSS3)、表皮钠通道α(epithelial sodium channel-a,ENaC-α)蛋白的表达,初步探讨其在增龄相关性听力损失中的作用。方法选用3、12及24月龄SD大鼠各30只,应用免疫组化、Western blot技术检测各组大鼠耳蜗中TMPRSS3、ENaC-α蛋白表达水平。结果随月龄增大,大鼠ABR阈值逐渐升高,耳蜗TMPRSS3、ENaC-α蛋白表达水平逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论增龄相关性听力损失大鼠的耳蜗TMPRSS3、ENaC-α蛋白随月龄增大而降低。ENaC-α蛋白的变化与TMPRSS3呈相关性,提示TMPRSS3可能通过调节ENaC-α蛋白而起作用。

两个耳聋家系TMPRSS3基因突变分析及产前诊断

目的对两个耳聋家系进行遗传性耳聋基因突变检测,为家系遗传咨询与产前诊断提供参考。方法2018年3—12月,郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心应用二代测序技术对两个家系患儿进行耳聋基因检测(包含168个已知致病基因,包括核基因、相关线粒体区域及miRNA),并对可疑基因在患儿及家系成员中进行Sanger双向测序验证,确定致病突变后,对两个家系的高危胎儿进行产前诊断。结果家系1患儿检测到TMPRSS3基因c.432delA和c.617-2_617-1insTC复合杂合突变,家系2患儿检测到TMPRSS3基因c.271C>T(p.R91X)和c.147dupT复合杂合突变,两家系患儿父母均为携带者。产前诊断结果显示两家系胎儿均只携带1个杂合突变。随访至2019年8月,两家系二胎分别为15月龄和13月龄,听力未见异常。结论TMPRSS3基因突变可能是两个耳聋家系的致病基因,用二代测序技术可以高效、经济准确地对遗传性耳聋患者进行基因诊断,为家系遗传咨询和产前诊断提供参考。

TMPRSS3/ERK1/2信号通路在卵巢癌细胞对顺铂外排中的作用及机制

目的探讨卵巢癌细胞HO8910对化疗药物顺铂的外排作用及机制。方法采用载体表达及siRNA技术构建过表达/低表达TMPRSS3卵巢癌细胞HO8910细胞系。用顺铂处理不同TMPRSS3表达量的卵巢癌细胞,检测其细胞存活率及细胞内顺铂的浓度及不同TMPRSS3表达量的卵巢癌细胞中药物外排相关因子的表达差异。结果提高/降低TMPRSS3的表达量显著提高/降低了卵巢癌细胞HO8910的存活率及增殖能力。提高/降低TMPRSS3的表达量提高/降低了卵巢癌细胞中ATP结合基因蛋白家族(ATP-binding cassette,ABC)转运子(ABC transports)的表达量。同时,TMPRSS3调控了卵巢癌细胞中TRK1/2的表达。结论TMPRSS3能够通过TRK1/2介导增加卵巢癌细胞HO8910对顺铂的外排能力。