基于TMT蛋白质组学和网络药理学探讨常春藤皂苷元抑制宫颈癌SiHa细胞线粒体自噬的作用机制

目的基于TMT蛋白质组学和网络药理学探讨常春藤皂苷元(Hed)抑制宫颈癌SiHa细胞线粒体自噬的作用机制。方法首先,利用TMT蛋白质组学技术鉴定Hed干预的差异蛋白并进行KEGG富集分析;然后,通过自拟的网络关联算法确定与线粒体自噬关联度最高的信号转导通路并构建关联网络;随后,通过TOPSIS及k核分解法确定潜在关键靶点及靶网络;最后,通过JC-1荧光染色及Western印迹等方法验证Hed抑制线粒体自噬的分子机制。结果TMT蛋白质组学鉴定了1270个差异蛋白,包括655个上调和615个下调蛋白。关联分析结果显示HIF-1信号通路与线粒体自噬密切相关。TOPSIS及k核分解显示Hed可能通过调控以HIF-1α、Src、Akt、Stat3这4个潜在关键靶点为主的靶网络以抑制线粒体自噬。JC-1结果表明Hed能诱导线粒体膜电位下降。Western印迹结果表明Hed能降低HIF-1α、Src、Akt的表达,增加Stat3的表达,同时能增加p62的水平及提高LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比例。结论Hed可能通过调控以HIF-1α、Src、Akt、Stat3为主的靶网络阻滞自噬效应部分,从而抑制宫颈癌细胞的晚期线粒体自噬。

TMT定量蛋白质组学解析Rummeliibacillus suwonensis 3B-1生长及己酸代谢机制

【目的】从蛋白水平阐明水源拉梅尔芽孢杆菌(Rummeliibacillus suwonensis)的生长及己酸代谢机理,为水源拉梅尔芽孢杆菌的基因工程改造提供一定技术基础。【方法】以R.suwonensis 3B-1为研究对象,应用串联质谱标签(tandem mass tags,TMT)蛋白组学技术对该菌在好氧与厌氧条件下的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)进行挖掘,并对鉴定到的DEPs进行亚细胞定位、GO功能富集、KEGG信号通路注释、蛋白相互作用等生物信息学分析。【结果】从比较组中共鉴定获得810个DEPs,其中上调蛋白423个,下调蛋白387个,亚细胞定位到6个条目上,主要涉及细胞质蛋白,细胞膜蛋白和细胞壁等蛋白。GO功能富集分析结果显示,肽的生物合成、翻译和肽代谢过程等生物学过程;核糖体的结构组成和结构分子活性等分子功能;核糖体和核糖核蛋白复合物等细胞组分发生了显著变化。810个DEPs注释到113条KEGG信号通路,主要涉及辅因子生物合成,双组分系统,磷酸戊糖代谢,糖酵解/糖异生,以及氧化磷酸化等信号通路。苯丙氨酸-tRNA连接酶β亚基和核黄素生物合成蛋白RibD在蛋白互作网络中关联度最高。【结论】厌氧条件下,糖酵解途径中丙酮酸脱氢酶和丙酮酸激酶表达下调,氨基酸代谢和生物素蛋白连接酶等辅因子相关蛋白表达均呈现下调,表明该菌适合在好氧环境中生长。己酸合成方面,酰基辅酶A硫酯酶的表达量显著上调,同时,糖酵解/糖异生途径、三羧酸循环和磷酸戊糖途径为己酸合成提供了充足的前体物质和还原当量,共同促进了己酸合成。

单增李斯特菌感染人绒毛膜滋养层细胞比较蛋白质组学研究

目的分析单核细胞增生李斯特氏菌(简称单增李斯特菌)感染人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo过程中引起的细胞蛋白质组变化。从宿主细胞分子水平对单增李斯特菌感染胎盘的机制进行研究。方法运用TMT(Tandem Mass Tags)蛋白质组学技术对HTR-8/Svneo感染组和非感染组蛋白质组进行定量分析,运用GO(Gene Ontology)、KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)数据库对差异表达蛋白进行分子功能、生物过程及代谢途径富集分析。结果共鉴定肽段76285个,可定量蛋白6979个。HTR-8/Svneo感染过程中356个蛋白发生了显著性差异表达。153个表达量上调,203个表达量下调。差异表达量倍数最高的蛋白为微管马达蛋白(B4DYE2),最低为翻译起始因子1(Q6IAV3)。GO功能富集和KEGG代谢途径富集结果表明,上调蛋白参与的生物过程和代谢途径集中在微管、微丝运动,细胞自噬等方面,下调蛋白集中在碳代谢、氮代谢、氨基酸生物合成、核酸代谢等初级代谢途径和泛素介导的蛋白质水解等方面。结论单增李斯特菌侵袭HTR-8/Svneo过程中,宿主细胞的基础代谢可能发生了显著降低,并处于较高的自噬水平。细胞迁移诱导透明质酸酶CEMIP(Q8WUJ3)的显著上调说明该蛋白可能在调节滋养层细胞迁移、侵袭能力进而造成不良妊娠方面具有重要作用,为单增李斯特菌感染胎盘分子机制研究提供新的思路。

基于TMT标记定量蛋白质组学技术研究中药复方益糖康改善db/db小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的作用机制

目的研究db/db小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的发病机制及中药复方益糖康对其的改善作用。方法9周龄健康雄性SPF级db/db小鼠16只、db/m小鼠8只,分别设置模型组、益糖康组、空白组,益糖康组使用30 g·kg^(-1)·d^(-1)的中医复方益糖康煎剂进行灌胃,其余两组予以等体积的生理盐水灌胃,5周后进行取材,分离各组小鼠的骨骼肌组织。所有样本经TMT 10标试剂进行标记定量、蛋白酶解、TMT肽段标记与肽段分级、LC-MS/MS分析后,用数据库检索方法确定差异蛋白,并进行生信分析。结果所选取的样本稳定,有较高的科学价值;与db/m正常小鼠相比,db/db小鼠骨骼肌胰岛素抵抗总共导致Amd1、Serpina1e、Sorbs3、Fabp4、Myl3、Upf2等109个蛋白的表达变化,涉及了糖酵解、脂肪酸氧化、ATP的合成及供能等生物过程及PPAR、支链氨基酸代谢等信号通路;中药复方益糖康可以改善db/db小鼠骨骼肌胰岛素抵抗,总共涉及了Pcolce、Pgk2、Trip11、Tmem41b、Mrps9、Bola2等49个蛋白的表达变化,通过调节三羧酸循环,乙醛酸和二羧酸代谢等通路实现;中药复方益糖康可以产生心血管受益,并能缓解由2型糖尿病及胰岛素抵抗导致的帕金森病、亨廷顿病。结论db/db小鼠是研究2型糖尿病及胰岛素抵抗的理想模型,TMT标记定量蛋白质组学技术可以精准发现相关差异蛋白,结果较权威;脾虚导致的骨骼肌线粒体功能障碍是2型糖尿病及胰岛素抵抗发病的原因之一;中药复方益糖康可以对2型糖尿病及胰岛素抵抗异常的生物过程起到纠正作用,与健脾修复线粒体损伤、促进线粒体自噬有关;整个实验过程筛选的差异蛋白及所涉及的生理病理变化是课题组下一步研究的重点。

基于RNAi和蛋白质组学研究胶孢炭疽菌CgCDC2基因的功能

【目的】CDC2是调控细胞周期的主要因子之一,对植物病原菌的生长发育有着重要作用,但目前还未有胶孢炭疽菌CDC2蛋白生物学功能方面的研究。本试验的目的是获得胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)CgCDC2的RNAi突变体菌株,并分析CgCDC2基因的功能。【方法】利用RNAi技术和PEG介导法获得CgCDC2的RNAi突变体菌株,通过表型分析、TMT蛋白质组学分析和酶活性测定来确定该基因的生物学功能。【结果】通过PCR扩增获得CgCDC2基因,编码一个326个氨基酸的蛋白,其RNAi突变体菌株与野生型相比,生长速率减缓、分生孢子产量显著下降、对H2O2敏感性增强,PG、PL蛋白质含量、基因相对表达量和酶活性均显著降低,致病力减弱。【结论】CgCDC2参与调控胶孢炭疽菌的生长,分生孢子产量,氧化应激反应以及PG、PL的酶活性,从而降低病原菌的致病力。

不同月龄新西兰兔肝中差异蛋白质鉴定与验证

兔出血症是由兔出血症病毒(Rabbit haemorrhagic disease virus,RHDV)引起的一种兔急性、高度致死性传染病,成年兔死亡率超过90%,但2周龄幼兔不发病。基于幼年兔与成年兔对RHDV的易感性差异,采用串联质谱标记(tadem mass tags,TMT)蛋白质组学技术对幼年兔(2周龄)和成年兔(6月龄)肝中的蛋白质进行检测和定量分析,从幼年兔和成年兔肝中定量获得4353个蛋白质,筛选出821个差异蛋白质;相较于幼年兔,成年兔肝中294个蛋白质显著上调,527个蛋白质显著下调。GO功能富集分析结果显示,生物学过程主要富集到145个小分子代谢蛋白质、111个与氧化还原过程相关的蛋白质和478个参与代谢过程的蛋白质,细胞组分主要富集到528个细胞外成分蛋白质、139个线粒体蛋白质和366个细胞质蛋白质等,分子功能主要富集到342个催化活性蛋白质、93个氧化还原活性蛋白质和50个辅酶结合蛋白质等。821个差异蛋白质在KEGG Pathway数据库中共注释到47条KEGG信号通路,主要涉及代谢途径、糖代谢、氧化磷酸化作用和剪切小体等通路。幼年兔和成年兔肝中差异蛋白质互作网络分析发现,MRPS15的关联度最高,且差异蛋白质胆固醇酰基转移酶1(ACAT1)在互作网络中具有更多相互作用关系。从蛋白质水平探讨幼年兔和成年兔的感染差异机制,筛选并分析幼年兔和成年兔肝中的差异蛋白质,筛选出的差异蛋白质有望成为RHDV体外扩增细胞系构建的突破点,为构建适宜RHDV体外扩增的细胞系提供新的研究思路。

基于蛋白质组学探讨电针治疗血管性痴呆的作用机制

目的:基于串联质谱标签(TMT)定量蛋白质组学技术,探讨电针治疗血管性痴呆(VD)的可能作用机制。方法:选用SPF级雄性SD大鼠80只,采用Morris水迷宫实验筛选出符合标准的78只SD大鼠,将其随机分为假手术组(18只)和手术组(60只)。手术组采用四血管阻断(4-VO)法复制VD模型,将造模成功的36只大鼠随机分为模型组(18只)和电针组(18只)。每组进一步按干预时间分为3个亚组,每亚组6只。造模后7 d对电针组大鼠行电针干预,穴取左右“四神聪”和双侧“风池”,予连续波,频率2 Hz,电流强度1 mA,每日1次,每次30 min,3个亚组分别干预7、14、21 d。采用Morris水迷宫实验于干预前后评估大鼠学习记忆能力,并选择干预后学习记忆能力最优的电针组亚组及相应假手术组、模型组亚组进行蛋白质组学检测,鉴定电针干预VD相关差异表达蛋白并进行生物信息学分析,采用平行反应监测(PRM)技术和Western blot法验证差异表达的目标蛋白。结果:与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长、穿越原平台次数减少(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠干预7、14、21d逃避潜伏期缩短、穿越原平台次数增加(P<0.01,P<0.05)。与干预7、14 d比较,电针组大鼠干预21 d逃避潜伏期缩短、穿越原平台次数增加(P<0.01,P<0.05),选择该亚组进行后续蛋白质组学检测、PRM分析及Western blot验证。与假手术组比较,模型组大鼠差异表达蛋白有71种,其中上调的有50种,下调的有21种;与模型组比较,电针组大鼠差异表达蛋白有54种,其中上调的有30种,下调的有24种。功能富集分析、聚类分析发现,差异表达蛋白主要与细胞过程、代谢过程、吞噬识别、免疫反应、细胞外基质组织的调节等生物过程有关。在哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路及神经营养因子信号通路中均富集到了糖原合成酶激酶3β(GSK3β)和丝裂原活化蛋白激酶激酶2(Map2k2)蛋白,PRM分析和Western blot验证与蛋白质组学分析结果一致,即与模型组比较,电针组大鼠海马GSK3β和Map2k2蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05)。结论:电针“四神聪”“风池”可改善VD大鼠认知功能,其作用机制涉及多靶点、多通路,可能与GSK3β、Map2k2蛋白及mTOR、神经营养因子信号通路相关。

基于肝脏TMT标记定量蛋白质组学技术研究越鞠丸防治“双心疾病”的作用机制

目的:观察越鞠丸治疗“双心疾病”的效果,并研究其中的作用机制。方法:选用6周龄健康雄性SPF级载脂蛋白E敲除(AopE^(-/-))小鼠30只、同源C57BL/6J小鼠10只进行实验。将30只AopE^(-/-)小鼠分为模型组、越鞠丸低剂量组(7.58 g·kg^(-1)·d^(-1))、越鞠丸高剂量组(30.32 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只;C57BL/6J小鼠10只作为空白组,各组灌胃12周。饲养期间通过慢性不可预知应激刺激(CUMS)联合高脂饲料诱导的方法构建“双心疾病”模型。灌胃给药后,通过各组小鼠行为学实验结果[旷场实验(OFT)、糖水偏嗜实验(SPT)]、全自动生化分析仪检测小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量及小鼠主动脉、肝脏油红O、苏木素-伊红(HE)染色,心肌组织Masson染色进行模型评价。最后通过肝脏TMT标记定量蛋白质组学技术研究其中的作用机制。结果:模型小鼠出现明显的抑郁、焦虑、兴趣丧失、绝望等表现,主动脉、肝脏病理观察也出现明显脂质沉积,心肌组织出现明显心肌纤维化增多的表现,越鞠丸灌胃给药后能改善“双心疾病”模型小鼠的上述症状与指标。与空白组比较,第12周模型组小鼠站立次数、中心区域累计时间、总移动距离、移动速度、糖水偏嗜率均显著下降(P<0.01),与模型组比较,越鞠丸低、高剂量组小鼠上述指标均显著降低(P<0.01)。取材后,与空白组比较,模型组AST、ALT、TG水平显著增多(P<0.01),5-HT、NE、HDL-C水平均显著下降(P<0.01)。肝脏TMT标记定量蛋白质组学结果提示“双心疾病”模型小鼠主要引起ApoE、UDP葡醛酸基转移酶家族1成员A5(UGT1A5)、FASN等蛋白表达水平的变化,涉及乙酰辅酶A代谢、对细菌的反应、细胞氨基酸分解代谢等过程,与肝脏代谢功能异常有关。越鞠丸防治“双心疾病”涉及了高迁移率族核小体结合域2(HMGN2)、CALD1、Mup7等蛋白表达水平的变化,并对“双心疾病”发病有关的生物过程和异常的通路起到纠正作用,主要有肌肉收缩、紧密连接通路、心肌收缩通路、黏着斑通路等。结论:CUMS联合高脂饲料诱导AopE^(-/-)小鼠构建“双心疾病”模型方法合理;越鞠丸可以纠正“双心疾病”模型小鼠抑郁、焦虑状态,同时能减轻其主动脉斑块并纠正异常的血脂、肝功水平;可纠正“双心疾病”模型小鼠的异常生物过程与通路;实验筛选的差异蛋白及所涉及的生理病理变化是下一步研究的重点。

T10脊髓损伤后T10~L2脊髓组织中差异表达蛋白的生物信息学分析

目的利用TMT标记定量蛋白质组学技术筛选出T10脊髓损伤后T10~L2脊髓组织的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs)并对其进行生物信息学分析,以期挖掘出T10脊髓损伤后膀胱颈功能障碍(bladder neck dysfunction,BND)的潜在治疗靶点。方法40只大鼠采用随机数字表法分为假手术组(12只)和造模组(28)只,造模组28只大鼠采用Hassan Shaker脊髓横断法制备T10脊髓损伤模型,从符合要求的模型大鼠中随机抽取12只作为模型组。所有大鼠行尿流动力学检测和HE染色,采用TMT检测出T10~L2脊髓组织中表达的蛋白质,将差异倍数(fold change,FC)>1.2或<1/1.2、P<0.05、unique peptide≥2的蛋白质定义为DEPs,使用KOBAS 3.0对DEPs进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。利用STRING及Cytoscape软件构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,利用cytoHubba插件及DEPs的度(Degree)值筛选出排名前35位的关键DEPs,并通过GluGO插件对35个关键DEPs所参与的生物过程进行分析。结果与假手术组相比,模型组大鼠漏尿点压力和最大膀胱容量明显增大(P<0.01);HE染色结果显示,模型组膀胱颈组织中出现炎细胞浸润,平滑肌壁增厚;模型组T10~L2脊髓组织出现神经元崩解,坏死后空洞形成,神经胶质细胞增生。TMT结果显示,在T10~L2脊髓组织中共筛选出了151个DEPs,其中84个蛋白上调、67个蛋白下调;KEGG分析发现151个DEPs,主要参与趋化因子信号通路、NOD-样受体信号通路、细胞坏死、细胞凋亡、多巴胺能神经突触和谷氨酸能突触等16条信号通路。35个关键DEPs主要参与了巨噬细胞活化、神经胶质细胞的激活、小胶质细胞的激活和神经炎症反应等生物过程。结论T10脊髓损伤后,T10~L2脊髓组织中C1qa、Clu、Snca、Pycard、Glul、Capn1、Ctsz和Ctsd可能是降低脊髓继发性损伤风险的潜在治疗靶点;T10~L2脊髓组织中多巴胺能突触和谷氨酸能突触信号途径可能成为治疗T10脊髓损伤后BND的新方向。

不同海拔下黄牛乳蛋白差异表达的蛋白组学分析

通过对黄牛乳进行乳成分分析及TMT定量蛋白质组学分析,筛选不同海拔黄牛乳成分差异表达蛋白,结合DAVID数据库分别进行乳清蛋白、乳脂肪球膜蛋白(MFGM)的GO和KEGG富集分析,使用STRING在线工具和Cytoscape 3.8.2软件构建不同海拔地区黄牛乳清、MFGM蛋白的蛋白质互作网络。结果,两种海拔中,3 850 m海拔地区(后记作HA)黄牛乳营养成分高于2 700 m海拔地区(后记作LA)黄牛乳;HA黄牛乳清蛋白、MFGM蛋白浓度显著高于LA黄牛乳清蛋白与MFGM蛋白。乳清蛋白中123个差异表达蛋白上调,122个差异表达蛋白下调;MFGM蛋白中172个差异表达蛋白上调,95个差异表达蛋白下调。黄牛乳清蛋白、MFGM蛋白共同参与免疫调控过程、代谢过程、发育过程;共同涉及的分子功能包括调节酶活性、能量结合、脂质结合。补体和凝血级联、溶酶体代谢、Ig A产生的肠道免疫网络、抗原加工和呈递、B细胞受体信号通路、NOD样受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性是主要的免疫相关信号通路。结果表明,HA黄牛乳的蛋白浓度更高,可使犊牛血清总蛋白(STP)升高,从而可影响犊牛成年后的繁殖性能。HA黄牛乳清、MFGM蛋白可能在抑制肿瘤发生、增强宿主免疫防御的信号通路中发挥重要作用,LA黄牛乳汁在抑制炎症反应过程中发挥作用。

羽扇豆醇对结直肠癌HCT116细胞的抑制作用及机制研究

目的探讨羽扇豆醇对结直肠癌HCT116细胞的抑制作用及潜在分子机制。方法体外培养结直肠癌HCT116细胞,采用CCK-8法、克隆形成试验、划痕愈合试验、Transwell试验及流式细胞术评估不同浓度羽扇豆醇对HCT116细胞的增殖,克隆形成、迁移和侵袭能力,以及凋亡的影响;进一步通过TMT标记定量蛋白质组学分析及生物信息学分析羽扇豆醇抑制HCT116细胞生长的潜在机制,并运用蛋白质免疫印迹法验证相关蛋白的表达水平。结果羽扇豆醇具有抑制HCT116细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力,以及促进细胞凋亡,并且均呈浓度依赖性。羽扇豆醇干预HCT116细胞后共发现490种蛋白表达差异明显。经生物信息学分析发现,羽扇豆醇主要参与了HCT116细胞的分裂、增殖、凋亡及营养物质代谢等生物学过程,可能与糖酵解/糖异生、缺氧诱导因子(HIF)-1信号通路、淀粉和蔗糖代谢途径等信号通路有关。蛋白质免疫印迹法结果显示,羽扇豆醇可下调HIF-1α、α-烯醇化酶(ENO1)和乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达水平。结论羽扇豆醇对人结直肠癌HCT116细胞的生长及转移有明显抑制作用,其机制与下调糖酵解信号通路中HIF-1α、LDHA和ENO1蛋白的表达水平有关。

宣白承气汤加味联合西药改善流感病毒与肺炎链球菌共感染小鼠肺炎作用机制

目的 基于TMT(tandem mass tag)标记定量蛋白质组学技术探究流感病毒/肺炎链球菌(IV/Spn)共感染肺炎小鼠的发病机制及中药复方宣白承气汤加味对其的改善作用。方法 选用幼龄健康雄性SPF级Balb/c小鼠40只,分别设置正常组、模型组、中药组、西药组、中西医结合组,每组8只。造膜成功后,分别给予小鼠宣白承气汤加味(0.15 g/mL)、奥司他韦(0.25 mg/mL)/头孢克洛干(0.48 g/mL)及中西药联合干预治疗,正常组与模型组予以等体积的生理盐水灌胃,7天后进行取材,分离各组小鼠肺部组织样品。所有样本经TMT 10标试剂进行标记定量、蛋白酶解、TMT肽段标记与肽段分级、LC-MS/MS分析后,用数据库检索方法确定差异蛋白,并进行生信分析。结果 与正常组比较,模型组小鼠的肺指数明显升高(P<0.05);与模型组比较,各给药组小鼠肺指数明显降低(P<0.05,P<0.01),中药组、西药组及中西结合组的肺指数抑制率分别为68.66%、77.61%、85.07%。与正常组比较,IV/Spn共感染肺炎小鼠共导致259个蛋白的表达变化,涉及补体和凝血级联、氨基糖和核糖代谢、Fcγ介导的吞噬作用等信号通路;宣白承气汤加味干预后共涉及了13个蛋白的表达变化,主要富集于丙酸、丁酸、半乳糖代谢等通路;西药组干预后共涉97个蛋白的表达变化,主要富集于补体和凝血级联、氨基糖和核糖代谢、视黄酸诱导基因蛋白1样受体等通路;中西医结合组干预后共涉144个差异蛋白,主要富集于细胞外基质相互作用、小细胞肺癌、视黄酸诱导基因蛋白1样受体等通路。结论 小鼠肺脏组织中发生的免疫炎性反应是导致IV/Spn共感染肺炎发病的主要原因;宣白承气汤加味可以通过调节肠道菌群失调及物质能量代谢对IV/Spn共感染肺炎起到纠正作用;西药组可以通过免疫调控缓解IV/Spn共感染后的肺部炎症;中西医结合组可以在调节机体免疫、炎症反应的同时为机体提供物质能量。

人皮肤成纤维细胞和脐带间充质干细胞分泌蛋白差异比较研究

该文探讨人皮肤成纤维细胞(NCF)和脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)分泌蛋白的差异,从而初步阐明脐带间充质干细胞分泌蛋白对于治疗退行性疾病的可能分子机理。基于串联质谱(LC-MS/MS)的方法,收集用无血清培养基培养48 h的NCF和hUC-MSCs上清样品,进行TMT(tandem mass tags for relative and absolute quantitation)检测,从而对蛋白质酶解之后的肽段进行同位素标记,之后对分泌蛋白的表达差异进行精确的鉴定和定量。通过生物信息学分析,建立NCF和hUC-MSCs分泌蛋白谱图,并通过GO(gene ontology)对这些分泌蛋白进行功能分析,对于在蛋白分子互作图中处于中心位置的CCL2、COL4A1、TGFβ1、SERPINE1、SEMA7A我们进行了Real-time PCR定量分析。通过TMT以及生物信息学分析,该文鉴定出1000多种共有蛋白,其中有704种蛋白在hUC-MSCs中的表达量比NCF中高。通过Real-time PCR,我们证实了CCL2、COL4A1在hUC-MSCs中的分泌量的确高于其在NCF中的分泌量,且差异具有显著性。通过检索文献以及Uniprot的相应数据库数据,该文发现,这两种分子在炎症的消除方面起到十分重要的作用,而炎症反应在帕金森病等退行性疾病的发生与发展过程中起到重要作用。通过对NCF和hUC-MSCs培养基中分泌的蛋白进行检测分析,该研究为探讨脐带间充质干细胞分泌蛋白治疗神经退行性疾病的可能分子机制提供启示。