重组蛋白sCAR-TMTP1增强腺病毒对骨肉瘤细胞基因转染效率的研究

目的提高腺病毒(adenovirus,ADV)在缺乏柯萨奇腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)的骨肉瘤细胞中的转染效率。方法通过昆虫(Bac-to-Bac)杆状病毒表达系统表达含有CAR胞外段(s CAR)及TMTP1肽的重组蛋白(s CAR-TMTP1),并对其纯化、鉴定。流式细胞仪分别检测骨肉瘤细胞及人胚肾细胞293(HEK293)的CAR表达水平,ADV对其的感染效率及FITC-TMTP1的结合能力。重组蛋白s CAR-TMTP1与ADV共同孵育形成复合物,流式细胞仪研究其在缺乏CAR的骨肉瘤细胞(MG-63)中的转染效率。结果表达及纯化的s CAR-TMTP1蛋白在相对分子质量约31 000处可见特异蛋白条带,感染的sf9细胞裂解上清可与兔抗小鼠s CAR单克隆抗体发生特异性反应。MG-63可与FITCTMTP1特异结合,其CAR表达水平低,ADV转染效率低。经s CAR-TMTP1修饰后的ADV/GFP对MG-63细胞的感染效率显著高于未经修饰的含报告基因GFP的ADV(ADV/GFP)。结论重组蛋白s CAR-TMTP1可显著提升ADV对缺乏CAR的骨肉瘤细胞的转染效率。