犬Ⅰ型腺病毒TN株的分离鉴定

应用 MDCK细胞采用单层吸附接毒和带毒传代的方法 ,从新疆阿克苏送检的犬粪便中分离出 1株犬腺病毒 ,并对其进行了形态学、理化学、血清学、动物感染试验、分子生物学鉴定。结果证明所分离的 TN株为 1株CAV-

犬瘟热病毒TN株血凝基因的克隆与序列分析

用RT PCR方法对分离的TN野毒株H基因进行了扩增 ,并将其克隆到pGEM T载体上 ,进行核苷酸序列测定。结果TN野毒株H基因ORF全长 1 ,81 5bp ,编码 60 4个氨基酸。与GenBank中己报道的 7个CDV毒株相比 ,H基因核苷酸序列的同源性在 92 %～ 99%之间 ,推导的H蛋白氨基酸序列的同源性在 91 %～ 99%之间。TN株H蛋白潜在的N 联糖基化位点为 8个 ,而Onderstepoort弱毒株H蛋白为 4个 ;其中N端第 1 9～ 2 1、 30 9～ 31 1、 5 84～ 5 86位氨基酸所形成的 3个潜在的糖基化位点是野毒株拥有而疫苗株所没有的。预测的TN株和Onderstepoort株H蛋白的疏水性及抗原表位存在一定差异。研究结果提示TN野毒株H蛋白免疫原性可能与弱毒株有较大差别 。

犬瘟热病毒TN野毒株核蛋白基因的克隆与序列分析

根据GenBank中收录的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株核蛋白基因(N)序列,设计了1对特异性引物,用该引物对分离的TN野毒株进行了RT PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T质粒连接,得到重组质粒pTN。经核苷酸序列测定,CDVTN株N基因的ORF全长1569bp,编码523个氨基酸;将TN野毒株与GenBank中收录的其他CDV毒株进行比较,N基因核苷酸序列的同源性为94%～99%,推导的N蛋白氨基酸序列的同源性为97%～99%。TN株与Onderstepoort疫苗株氨基酸序列的差异主要集中在N端(17～159位)和C端(408～519位),中间的区域则高度保守。此外,在CDVN蛋白N端281～289位上也发现存在与麻疹病毒(MV)N蛋白完全相同的Y P A L G L H E F9肽序列,推测可能是诱导CTL活性的靶蛋白的抗原表位之一。氨基酸组成分析发现,推导的N蛋白氨基酸序列中亮氨酸、丝氨酸和异亮氨酸所占比例很高,提示该蛋白具有高度螺旋和缠绕的分子结构。

广藿香青枯病菌致病相关基因的筛选及分析

目的对广藿香青枯病菌致病相关基因进行筛选及分析。方法以广藿香青枯病菌菌株PRS-84的Tn5转座子插入突变株为材料,通过伤根浸泡法分别接种于广藿香植株,筛选致病性减弱的突变株;对筛选获得的突变株进行生长速率、泳动性和生物膜形成等表型分析;再利用反向PCR扩增致病性减弱突变株Tn5转座子插入位点的侧翼序列并进行序列测定与生物信息学分析。结果筛选得到了2个致病性减弱的突变株(PRS-84-11-33、PRS-84-11-123),它们对广藿香植株的致病性均明显低于野生株PRS-84。与野生株相比,致病性减弱突变株的菌落形态无明显变化,突变株PRS-84-11-123在培养后期生长速率有所升高。突变株PRS-84-11-33及PRS-84-11-123的泳动能力及生物膜形成能力均低于野生株。突变株Tn5转座子插入位点侧翼序列的生物信息学分析表明,这2个致病性减弱突变株的Tn5转座子插入位点基因分别为lptE基因和lon基因。结论该研究筛选获得了与广藿香青枯病菌致病性相关的基因,为了解青枯病菌的致病机制、寻找有效防治广藿香青枯病的方法提供了基础信息。