TNBS诱导的草鱼肠炎模型

通过建立草鱼肠道炎症模型，为经济鱼类炎症性肠病发病机理研究及药物筛选提供实验平台。于水温28℃条件下，从草鱼肛门插管注入0．25mL浓度为2．5％的三硝基苯磺酸（TNBS）50％乙醇溶液，诱发草鱼肠炎，注入等体积0．7％生理盐水作为对照，观察草鱼机体损伤程度、肠道组织病理，分析不同肠段组织内髓过氧化物酶（MPO）活性及IL-1β、IL-8和TNF-a等炎性相关基因表达量。病理观察结果显示，实验期间实验鱼未出现死亡现象，经TNBS诱导后出现较严重的肠道炎症，肠灌TNBS后1d，草鱼肠粘膜严重充血溃烂，肠道组织中出现大量炎性细胞浸润；3d后出现腹水，损伤部位招募大量炎性细胞，溃疡开始愈合；7d后炎性细胞逐渐减少，出现杯状细胞，呈慢性炎症；14d时腹水减少，肠粘膜中杯状细胞丰富，21d仅有少量炎性细胞，肠道组织基本恢复正常。TNBS诱导后1d，MPO活性极显著升高，3d后明显下降，至第7天趋于正常，与组织病理变化趋势一致。TNBS致炎后第1天，IL-1β、IL-8和TNF-a等炎性相关基因表达量极显著升高，3d时开始下降，3～14d表达量略高于对照组，急性炎症转为轻微的慢性炎症，21d时基本恢复到正常水平。结果还显示，不同肠段间的炎症反应存在差异，第三、四肠段明显较第一、二肠段严重。本研究构建的草鱼TNBS肠炎模型稳定，可作为鱼类肠炎病理机制研究和新型药物筛选的良好工具。

溃疡性结肠炎动物模型构建方法的研究进展

溃疡性结肠炎(UC)是一种病因不明的慢性非特异性肠道炎症性疾病,其确切发病机制尚不完全清楚。目前,UC诊断尚无金标准,主要结合临床表现、影像学检查、结肠镜检查及肠组织病理检查等综合分析。但UC病程往往较长,病情迁延难愈,缓解期与活动期交替出现,病例收集和随访难度较大。而UC动物模型可模拟UC肠黏膜屏障损伤、肠道炎症状态及菌群紊乱情况。因此,通过构建合理的动物模型对揭示UC的发病机制、探索高效的治疗策略至关重要。目前,UC动物模型的构建方法主要有诱导法、基因敲除法和联合法。根据诱导剂不同,诱导法可分为化学药物诱导法、微生物诱导法和食物诱导法。根据敲除基因不同,基因敲除法可分为屏障蛋白基因敲除法和抗炎因子基因敲除法。而联合法一般采取两种及以上方法构建UC动物模型。这些模型构建方法各有利弊,应根据自身实验需求和实验条件选择最适合的动物模型。

溃结康胶囊对TNBS诱导大鼠结肠炎治疗作用的研究

目的:探讨溃结康胶囊对TNBS诱导大鼠结肠炎的治疗作用。方法:制备TNBS结肠炎大鼠模型,实验设正常对照组、模型对照组、阳性药物对照组(柳氮磺吡啶, 0. 50g/kg)、溃结康给药组( 0. 64, 0 .32, 0 .16g/kg),采用灌胃方式给药,给药时间从制备模型6d后开始,连续12天。实验结束后观察大鼠结肠粘膜损伤指数(CMDI)、粪便隐血(OB)、髓过氧化物酶(MPO)活性和粘膜病理组织学情况,并检测结肠组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH- Px)含量;胸腺、脾脏称重。结果:溃结康可减轻TNBS结肠炎大鼠的CMDI和OB程度,降低MPO水平,可改善结肠粘膜病理损伤;并可明显对抗胸腺萎缩和脾脏肿大;同时溃结康可明显降低MDA含量,增加SOD和GSH- Px水平。结论:溃结康对TNBS诱导的大鼠结肠炎有良好的治疗作用,其机理可能与抗炎、免疫调节和抗氧化损伤有关。

IL-21/IL-21R信号在TNBS诱导小鼠炎症性肠病病变形成中的作用研究

探讨IL-21/IL21R信号在炎症性肠病病变形成中对肠固有层辅助T细胞应答的调控机制。利用IL-21R基因敲除小鼠(IL-21R KO),建立TNBS诱导的炎症性肠病动物模型。监测小鼠体重及生存率;HE染色观察小鼠肠组织形态结构及炎症反应情况;分离和提取肠固有层淋巴细胞(lamina propria lymphocyte,LPL),应用流式细胞仪检测Th1、Th2、Th17、Treg细胞比例和绝对数;ELISA法检测LPL培养上清中的细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10)的分泌。结果显示:与WT小鼠相比,IL-21R KO小鼠体重下降更快,生存率明显降低;HE染色显示IL-21R KO小鼠肠管上皮损伤严重、隐窝大面积消失、大量炎性细胞浸润,并侵犯到黏膜肌层;IL-21R KO小鼠肠固有层Th1细胞应答显著增强,相反Th2、Th17和Treg应答明显抑制。因此,IL-21/IL-21R信号通过调节小鼠肠固有层Th细胞应答,在TNBS诱导的肠炎病变形成中发挥重要的保护性作用。

化学诱导型结肠炎动物模型的研究进展

实验动物模型对于发现抗炎症性肠病的药物及探讨其发病机制具有重要作用。通过文献查阅,综述了目前用于炎症性肠病药理学研究的化学诱导型结肠炎动物模型的研究进展,从制备方法、模型特征、可能的致病机制和用途等方面进行了详细的论述。对于认知和了解炎症性肠病的发病机制及在实验中对IBD实验动物模型的选择提供一定的依据。

血吸虫卵及环丙沙星对小鼠TNBS肠炎的预防作用

目的研究腹腔注射血吸虫卵及1：2服环丙沙星对TNBS肠炎小鼠肠道炎症及Toll样受体4（Toll-like receptor4，TLR4）的影响。方法Balb／c小鼠50只随机分为正常对照组（10只）、TNBS肠炎组（20只）、血吸虫卵组（10只）及环丙沙星组（10只）。血吸虫卵组于造模前第3、14天腹腔注射冰冻灭活血吸虫卵10。个，环丙沙星组于制作肠炎模型前予小鼠口服环丙沙星50mg·kg^-1·d^-1共2周。分别评价小鼠一般情况、死亡率、肠壁炎症程度、肠壁TLR4蛋白表达、肠壁tlr4mRNA表达及血清TNF-α水平。结果血吸虫卵组小鼠死亡率较TNBS肠炎组明显降低（20％vs70％，P〈0．05），肠壁炎症明显改善（Ameho criteria评分1．43±0．52vs4．21±0．61，P〈0．01），肠壁TLR4表达下调（0．33±0．03vs0．76±0．05，P〈0．01）；血清TNF-α表达下调，但尚无统计学显著意义（29．62±9．71vs40．50±12．48，P〉0．05）。环丙沙星组小鼠死亡率较TNBS肠炎组亦明显降低（20%vs70％，P〈0．05），肠壁炎症改善（Ameho criteria评分1．54±0．71vs4．21±0．61，P〈0．05）肠壁TLR4表达下调（0．40±0．03vs0．76±0．05，P〈0．01），血清TNF-α表达下调，但尚无统计学显著意义（27．85±16．17vs40．50±12．48，P〉0．05）。结论血吸虫及环丙沙星可有效预防TNBS诱导的小鼠肠炎，其作用机制可能与调节Th1／Th2平衡及下调TLR4表达有关。

人参皂苷Rb1干预DSS诱导结肠炎模型小鼠转录组高通量测序及分析

目的研究人参皂苷Rb1干预葡聚糖硫酸钠盐(Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS)诱导结肠炎模型小鼠转录组学信息特征。方法C57BL/6雄性小鼠构建动物模型,将15只小鼠分为正常组、模型组和Rb1组,每组5只。模型组和Rb1组给予4%DSS并自由饮水,第2天给Rb1组40 mg/kg Rb1进行干预。持续9 d,处死小鼠后,取结肠组织。利用Illumina高通量测序平台分别对三组小鼠结肠组织进行转录组测序。利用测定的转录组学数据对Rb1组和模型组两两比较之后进行重叠分析,筛选差异基因进行GO和KEGG分析。结果Rb1干预后各项指标均有改善;GO富集后其有10450个有效差异表达基因得到GO注释,其中分子功能占13.5%,生物过程占68.73%,细胞组成占17.77%;富集最显著的前20个KEGG通路中与Rb1干预后密切相关的有钙离子信号通路、神经活动配体-受体相互作用通路以及c AMP信号通路。结论人参皂苷Rb1能够缓解DSS诱导结肠炎模型小鼠的症状。通过构建Rb1干预后DSS诱导结肠炎模型小鼠结肠组织转录组序列数据库,为以后Rb1功能基因的挖掘和参与代谢途径提供数据支撑,为临床应用提供新的思路。

三硝基苯磺酸结肠炎动物模型的建立

目的：建立三硝基苯磺酸（ＴＮＢＳ）诱导的结肠炎动物模型，探讨炎症性肠病（ＩＢＤ）的发病机制。方法：每只实验组大鼠用０．８５ ｍｌ含３０ ｍｇ ＴＮＢＳ的５０％乙醇灌肠１次诱发远端结肠炎，对照组大鼠仅以５０％乙醇或ＴＮＢＳ盐水溶液灌肠。观察结肠大体形态和组织学改变，并检测肠粘膜髓过氧化物酶（ＭＰＯ）活性。结果：灌肠后第１～３周，实验组大鼠远端结肠表现为充血、水肿及溃疡形成，组织学以中性粒细胞浸润为主；第４～８周，溃疡逐渐愈合，组织学表现为淋巴细胞和浆细胞浸润；组织ＭＰＯ活性于ＴＮＢＳ／乙醇灌肠后第１天即开始升高，持续３周，第４周起明显降低。对照组大鼠结肠大体形态、组织学改变及ＭＰＯ活性在第１周即恢复正常。结论：ＴＮＢＳ／乙醇诱导大鼠远端结肠炎是一种较理想的ＩＢＤ动物模型，可作为研究ＩＢＤ发病机制及评估药物疗效的有益工具。

溃疡性结肠炎造模中化学诱导剂的优化

目的探讨三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法制备溃疡性结肠炎模型的最佳乙醇浓度及动物造模环境。方法 SPF级30只雌性Wistar大鼠,按数字表法随机分为5组,正常对照组与模型4组,每组6只。将正常对照组、模型1组(50 m L/L TNBS与无水乙醇)、模型2组(50 m L/L TNBS与300 m L/L乙醇)、模型3组(50 m L/L TNBS与500 m L/L乙醇)放入普通环境内,模型4组(50 m L/L TNBS与500 m L/L乙醇)放入高温高湿气候箱内,观察5组的疾病活动指数(DAI)和病理组织学。结果溃疡性结肠炎造模过程中化学诱导剂—乙醇的不同浓度对溃疡性结膜炎造模效果不同,呈浓度正相关(P<0.05)。结论无水乙醇对于提高造模效率、增加模型的稳定性是较佳的。

溃疡性结肠炎动物模型的研究进展

根据流行病学统计,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)发病人数在国内外均呈上升趋势,且该疾病反复发作,部分患者会进一步发展为结肠癌,极大降低患者生活质量。目前,关于UC的作用机制研究尚无定论,临床治疗效果不理想,因此,简单、方便、有效的动物模型对于机制及治疗方法的研究具有重要意义。对化学模型和基因模型的诱导机制、影响因素、优缺点、造模方式以及UC临床表现、分子变化和组织变化做了详细综述。

巴西和西班牙联合研究山羊乳清减轻乙酸诱导大鼠结肠炎炎症的作用

补充或替代医学对于治疗炎性肠病很有意义，其目的是减轻常用药物副作用或改善治疗效果。近期，一个由巴西和西班牙研究人员组成的课题组评价山羊乳清对乙酸诱导大鼠模型肠道炎症的预防作用并与柳氮磺胺吡啶效果作比较。结果表时：

β-arrestin1在实验性大鼠结肠炎发生机制中的作用及氧化苦参碱的干预作用

目的研究β-arrestin1在实验性大鼠结肠炎发生机制中的作用,δ阿片受体-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路是否参与实验性大鼠结肠炎的病理过程,氧化苦参碱(OMT)能否通过干预δ阿片受体-β-ar-restin1-Bcl2信号转导通路减轻实验性大鼠结肠炎。方法将26只SD大鼠随机分为4组:分别为正常对照组6只、模型组6只、美沙拉嗪组6只和OMT组8只。正常对照组未行造模,其余3组大鼠均采用三硝基苯磺酸(TNBS)造模。OMT组大鼠给予苦参素注射液肌肉注射,美沙拉嗪组大鼠给予美沙拉嗪混悬液灌胃,模型组和正常组大鼠均以蒸馏水3mL灌胃。治疗15天,观察实验大鼠结肠病理组织学改变,并分别用免疫组化和Western免疫印迹技术分别检测实验大鼠结肠黏膜组织和脾脏T淋巴细胞δ阿片受体、β-arrestin1和Bcl-2表达变化。结果与正常对照组比较,模型组δ阿片受体、β-arrestin1和Bcl-2表达明显增高(P<0.01)。与模型组比较,美沙拉嗪组和OMT组δ阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2表达均显著下降(P<0.01)。结论δ阿片受体-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路参与TNBS诱导的实验性大鼠结肠炎的发病机制;OMT抑制δ阿片受体-β-arrestin1-Bcl-2信号转导通路,是OMT改善TNBS诱导的实验性大鼠结肠炎的机制之一。

溃疡性结肠炎大鼠β2AR-β-arrestin2-NF-κB信号转导通路及氧化苦参碱的干预作用

目的:探讨溃疡性结肠炎大鼠β2AR-β-arrestin2-NF-κB信号转导通路及氧化苦参碱的干预作用.方法:SD♂大鼠40只随机分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪组和氧化苦参碱组4组,每组10只.正常对照组未造模,其余3组大鼠均采用TNBS造模诱导实验性大鼠结肠炎.其中氧化苦参碱组大鼠予苦参素(氧化苦参碱)注射液肌肉注射,美沙拉嗪组大鼠予美沙拉嗪混悬液灌胃,模型组和正常组大鼠均以3mL蒸馏水灌胃.注意观察实验大鼠腹泻、便血症状.第7天,每组随机处死2只大鼠,比较各组结肠组织大体组织病理变化,取病变明显的结肠组织石蜡包埋切片并HE染色,镜下观察各组结肠病理组织学改变.第16天禁食24h后处死大鼠,用免疫组织化学技术和Western blot检测实验大鼠结肠组织和脾脏淋巴细胞β2肾上腺素受体(β2AR)、β-arrestin2和NF-κBp65表达的变化.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织及脾脏淋巴细胞NF-κBp65表达均显著上升(均P<0.01),β2AR和β-arrestin2表达均显著下降(均P<0.01).与模型组比较,美沙拉嗪组和氧化苦参碱组大鼠结肠黏膜组织NF-κBp65表达均显著下降(16.26±5.51,18.34±3.34vs61.90±17.75,均P<0.01),β2AR表达均显著上升(47.27±12.40,61.75±10.40vs12.20±2.70,均P<0.01),β-arrestin2表达均显著上升(70.71±12.84,76.14±8.77vs16.80±7.17,均P<0.01).与模型组比较,美沙拉嗪组和氧化苦参碱组大鼠脾脏淋巴细胞NF-κBp65表达均显著下降(114.23±11.56,145.62±13.05vs249.70±18.94,均P<0.01),β2AR表达均显著上升(1006.50±226.89,1102.11±297.72vs594.97±209.59均P<0.01),β-arrestin2表达均显著上升(189.97±21.12,162.04±15.69vs111.77±19.43,均P<0.01).但美沙拉嗪组和氧化苦参碱组之间比较β2AR、β-arrestin2、NF-κBp65表达无显著差异.结论:β2AR-β-arrestin2-NF-κB信号转导通路参与溃疡性结肠炎的病理过程,氧化苦参碱可以通过调节β2AR-β-arrestin2-NF-κB信号转导通路减轻溃疡性结肠炎.

Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2在溃疡性结肠炎大鼠脾脏组织中的表达及乌梅丸的干预作用

目的:观察溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠脾脏组织Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达及乌梅丸的干预作用,旨在研究乌梅丸治疗结肠炎的机制.方法:56只SD大鼠随机分成空白对照组、结肠炎模型组、美沙拉嗪组、乌梅丸组(每组14只).除空白对照组外,其他3组均应用2,4,6-三硝基苯磺酸灌肠.模型建成2 d后,空白对照组和结肠炎模型组分别以蒸馏水3 mL/只灌胃,美莎拉嗪组用美莎拉嗪混悬液(浓度50 g/L)、乌梅丸组用乌梅丸液(浓度0.51 g/L)以3 mL/只灌胃,连续给药15 d后取脾脏组织,应用Realtime-PCR检测Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA的表达,应用Western blot技术检测Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2蛋白的表达.结果:空白对照组Delta阿片受体、β-arrestin1及Bcl-2 mRNA的相对表达分别为1.11±0.10、1.05±0.06及1.06±0.04;蛋白的相对表达分别为0.48±0.08、0.62±0.07及0.76±0.10.结肠炎模型组Delta阿片受体、β-arrestin1及Bcl-2的mRNA的相对表达分别为2.50±0.25、3.27±0.41及2.48±0.43;蛋白的相对表达分别为1.04±0.17、1.50±0.15及1.26±0.20.美沙拉嗪组Delta阿片受体、β-arrestin1及Bcl-2 mRNA的相对表达分别为1.52±0.09、1.63±0.27及1.56±0.09;蛋白的相对表达分别为0.68±0.17、0.77±0.15及0.96±0.16.乌梅丸组Delta阿片受体、β-arrestin1及Bcl-2 mRNA的相对表达分别为1.54±0.13、1.54±0.14及1.57±0.15;蛋白的相对表达分别为0.68±0.14、0.74±0.19及0.93±0.11.与空白对照组相比,结肠炎模型组Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著升高(P<0.05);与结肠炎模型组相比,乌梅丸组、美沙拉嗪组Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),且乌梅丸组和美沙拉嗪组Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均无显著差异(P>0.05).结论:乌梅丸下调UC大鼠脾脏组织Delta阿片受体、β-arrestin1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达发挥治疗结肠炎的作用.

TNBS/乙醇溃疡性结肠炎大鼠模型差异表达 miRNA 与 mRNA 共表达分析

目的 研究2,4,6-三硝基苯磺酸（ TNBS）/乙醇溃疡性结肠炎（ UC）大鼠中,UC相关miRNA的调控作用,即miRNA与mRNA互作关系. 方法 用TNBS/乙醇灌肠,诱导UC大鼠模型.经过造模与14 d生理盐水灌胃后,解剖处死. 留取正常组与模型组大鼠相应的结肠组织. 通过大体及镜下观察,验证造模效果. 同时对相应结肠组织进行miRNA芯片检测,根据芯片结果及相关文献报道,筛选出与UC发病密切相关的miRNA并对其进行RT-PCR验证. 另外,利用miRWalk数据库对差异miRNA的靶基因进行预测. 为了验证预测结果与实际情况的相符度,又同步进行了mRNA水平的表达谱芯片实验,筛选出与差异miRNA确有互作作用的mRNA. 为了更好地说明miRNA与mRNA的互作关系,又利用David数据库对靶基因进行注释,最终形成miRNA与mRNA共表达网络. 结果模型组大鼠结肠大体及镜下表现均符合UC 的发病特征. 通过 miRNA芯片筛选出了68 个差异miRNA[倍数变化（fold change）〉2, P〈0.05,表达值（expression mean）〉7],结合相关文献报道,筛选出6个与UC发病密切相关的miRNA. 同时对这6个miRNA进行了RT-PCR实验,结果提示,与正常组相比,4个差异miRNA（ miR-146a-5p、miR-146b-5p、miR-126a-3p和miR-21-5p）表达明显上调（ P〈0.01,P〈0.05）,2个差异miRNA（miR-200b-3p、miR-145-5p）表达明显下调（P〈0.01）. 结合miRWalk数据库对这6个差异miRNA的靶基因预测结果和表达谱芯片结果,本研究发现IL-6、Ccl5、Mapk3、Smad7这4个mRNA与上述6个miRNA有互作关系. 最终通过David数据库对这种互作关系进行注释,以阐明其在UC发病中的重要作用. 结论 一个miRNA可以调控多条信号通路,而一条信号通路又受到多个miRNA的调控. 如果仅仅单纯抑制某条信号通路,可能并不能从根本上抑制炎症的发生. 而从其上游出发,研究miRNA作用,阐明相互关系,并调控mRNA的作用,可能可以从根本上逆转疾病的进程.

5-氨基水杨酸治疗结肠炎的抗氧化作用及对细胞因子表达的影响

目的探讨5-氨基水杨酸(5-ASA)灌肠治疗对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导大鼠结肠炎的抗氧化作用及对细胞因子表达的影响。方法建立TNBS结肠炎模型,给予5-ASA灌肠治疗,同时设正常对照组和模型组。于治疗后1、2周,评价结肠大体、组织学损伤及髓过氧化物酶(MPO)活性,检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平,逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测结肠组织白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-αmRNA表达水平。结果5-ASA灌肠治疗能明显降低结肠炎大鼠的大体、组织学评分及MPO活性(P<0.05),升高SOD活性(P<0.05),降低MDA水平(P<0.05),降低IL-1β和TNF-α表达水平(P<0.05)。结论5-ASA灌肠治疗TNBS诱导的大鼠结肠炎疗效显著,其机制与抗氧化作用及抑制IL-1β和TNF-α的表达有关。