TNF-α抑制剂注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白/注射用依那西普致葡萄膜炎2例分析

目的探讨TNF-α抑制剂与葡萄膜炎发病的关系并分析TNF-α抑制剂诱发性葡萄膜炎的临床特点。方法回顾性分析2021年7月至2023年2月某院收治的2例使用TNF-α抑制剂注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白注射用依那西普后出现葡萄膜炎患者的临床特征并复习相关文献。结果2例患者葡萄膜炎发生时间分别在用药后2周和6周,其中前葡萄膜炎1例,前、中间葡萄膜炎1例,经对症治疗后均有好转。在持续生物制剂治疗过程中2例患者均有反复发作倾向。查阅文献发现目前引起葡萄膜炎的TNF-α抑制剂主要包括英夫利昔单抗、阿达木单抗等,多用于治疗类风湿性关节炎、肿瘤、强直性脊柱炎、眼内葡萄膜炎患者等。患者年龄区间在5~77岁,发病时间为用药后1周~4年。经系统治疗,停止免疫抑制剂后,绝大多数诱发性葡萄膜炎患者视力可恢复。结论TNF-α抑制剂可以诱发葡萄膜炎的发生,发病类型以前葡萄膜炎为主,且有复发倾向。及时诊疗后患者的视力预后较好。

TNF结合肽和TNFR封闭肽对TNF-α体外介导的生物学抑制效应的实验研究

目的检测TNF-α结合肽(TBP)和TNFR封闭肽(TRBP)的生物学特性及功能。方法以GFP-TNF融合蛋白竞争结合实验,检测TBP和TRBP的特异性。用非变性PAGE检测TBP和TRBP的互补结合性。用细胞毒抑制实验,观察TBP和TRBP对TNF-α杀伤U937细胞的抑制作用。用硝基蓝四氮唑(NBT)还原能力和RT-PCR技术,检测TBP和TRBP对TNF-α诱导的人外周血单核细胞的呼吸爆发和对促炎症因子IL-1β和IL-8mRNA水平的抑制作用。结果TBP和TRBP能抑制GFP-TNF融合蛋白与细胞膜上TNFR的结合。非变性PAGE证明,TBP与TRBP之间的结合,为非配体和受体的结合;TBP和TRBP对TNF-α的细胞毒效应均有抑制作用,且随着剂量的增加而增强,二者联用(即pep.38+X4)效果更好。TBP和TRBP联用,能有效地抑制TNF-α和IFN-γ诱导的单核细胞呼吸爆发的强度,抑制TNF-α诱导的IL-1β和IL-8mRNA的转录。结论TBP和TRBP具有结合TNF-α和TNFR的特异性,但二者的结合为非配体和受体的相互结合。TBP和TRBP对TNF-α介导的各种生物学效应均具有抑制作用,二者联用效果更显著。

创伤性多器官功能不全综合征患者血浆sTNFR-P55和TNFα比值变化临床意义

目的 探讨血浆可溶性肿瘤坏死因子受体P55(sTNFR P55)与肿瘤坏死因子α(TNFα)浓度比值(sT NFR P55/TNFα)变化在创伤患者多器官功能不全综合征(MODS)中的诊断价值。方法 测定正常对照组、创伤 MODS生存组和MODS死亡组血浆sTNFR P55和TNFα的浓度,观察血浆sTNFR P55/TNFα比值变化及主要器 官功能受损指标和预后的关系。结果 创伤MODS各组患者sTNFR P55/TNFα比值明显低于正常对照组(P< 0.01),且MODS死亡组低于MODS生存组(P<0.01)。创伤MODS患者sTNFR P55/TNFα与主要器官功能受 损指标呈明显负相关。结论 创伤MODS患者血sTNFR P55浓度升高幅度不如TNFα。sTNFR P55/TNFα比值 可作为判断MODS患者器官功能不全程度及预后转归的预警指标。

IL-12诱导T细胞凋亡对Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响

目的 :探讨白介素 12 (IL - 12 )诱导T细胞凋亡过程中对T细胞的Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响作用。方法 :dUTP缺口末端标记法和AnnexinV法 ;用FITC标记TNFR1,PE标记CD95 ,生物素标记FasL ,流式细胞仪检测 3种T细胞 (人淋巴瘤T细胞株HTB176、人急性白血病T细胞株TIB15 2和正常人T细胞 )的百分率 ;用半定量PCR的方法检测FasL和TNFα的mRNA的表达作用。结果 :HTB176和TIB15 2的细胞在IL - 12处理 1h ,生物素标记FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加 ,2 4h达到高峰 ,但正常T细胞在 2 4h后才有反应 ;正常T细胞经IL -12处理 1h内细胞FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加 ,在以后的试验期 6、12、2 4h始终保持恒定水平 ;但 3种T细胞在IL - 12作用下不促进细胞CD95和TNFR1及TNFα的表达。结论 :IL - 12诱导T细胞凋亡中有许多调节因子的协调作用 。

TNF结合肽和TNFR封闭肽对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

目的检测TNF-α结合肽和TNFR封闭肽对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用。方法以TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎为模型,联合给予TNF-α结合肽和TNFR封闭肽[2.5mg/(kg·次)]处理,同时设各种对照;观察大鼠的症状、体重、结肠组织病理改变等;采用一般的生物化学检测方法检测大鼠血清和结肠组织中NO含量、活性氧以及结肠组织中MP0活性等炎性介质;采用RT-PCR技术检测大鼠腹腔MIL-1β和IL-8等mRNA水平的变化;采用免疫组织化学SP法检测大鼠结肠组织中TNF-α蛋白质表达水平的改变。结果TNF结合肽和TNFR封闭肽联合多肽组大鼠的体重、结肠组织形态学评分、组织病理学评分及血清和结肠组织中NO含量、MP0活性等指标均显著低于模型组及无关肽组(P<0.01);其腹腔M的IL-1β和IL-8 mRNA水平和结肠组织中TNF-α蛋白的表达水平及阳性细胞率也显著低于显著低于模型组及无关肽组(P<0.01)。结论TNF结合肽和TNFR封闭肽联用可显著减轻TNBS诱导大鼠实验性溃疡性结肠炎的病理损伤,改善症状,有效抑制大鼠血清和结肠组织中NO含量以及结肠组织中MP0活性的活性,抑制大鼠腹腔巨噬细胞中Il-1β、IL-8的mRNA转录和结肠组织中TNF-α蛋白的表达,对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎具有治疗作用。本研究为进一步研制和开发拮抗TNF-α的新型肽类药物提供了重要的实验依据。

ICAM-1协同参与TNFRI介导的TM-TNF-α杀瘤作用

目的 :寻找协同参与TM TNF α杀瘤作用的膜表面分子 ,探讨TM TNF α杀瘤及两型TNF α生物学效应差异的分子机制。方法 :利用抗体封闭实验及RT PCR ,检测ICAM 1及VCAM 1对TNFR1或TNFRII介导的TM TNF α杀瘤效应是否具有协同作用。结果 :封闭表达TNFRI的MCF 7细胞表面的ICAM 1,可显著降低TM TNF α对其杀伤的作用 ;而封闭VCAM 1无明显效应。封闭表达TNFRII的HL 6 0细胞表面的ICAM 1或VCAM 1,均对TM TNF α的杀伤作用无影响。结论 :ICAM 1对于TM TNF

胃癌外周血及胃左静脉血sTNFR Ⅱ检测及其临床意义

目的探讨胃癌患者血清中可溶性肿瘤坏死因子受体 Ⅱ（ｓＴＮＦＲⅡ）的水平及临床意义。方法应用Ｅｌｉｓａ方法检测 ３９例胃腺癌患者术前、术后 １４天外周血及术中胃左静脉血ｓＴＮＦＲⅡ水平，并以正常献血员作正常对照组。所有病例术后随访 １年以上。结果（１）胃癌外周血及胃左静脉血ｓＴＮＦＲⅡ均高于正常对照组；且胃左静脉血ｓＴＮＦＲⅡ明显高于外周静脉血；（２）术前外周静脉血ｓＴＮＦＲⅡ水平与肿瘤大小、肿瘤侵犯深度、有否淋巴结转移及远处转移、ＵＩＣＣ分期、肿瘤分化程度无关；胃左静脉血ｓＴＮＦＲ Ⅱ水平在肿瘤侵出或侵犯浆膜、有远处转移及肿瘤低～未分化组明显高于肿瘤局限于肌层或粘膜内、无远处转移及高～中分化腺癌者；（３）随访期间复发或死亡１８例，健在组 ２１例术中胃左静脉血及术后 ２周外周静脉血ｓＴＮＦＲⅡ明显低于复发或死亡组。结论胃癌患者存在高水平的 ｓＴＮＦＲⅡ．且肿瘤的引流静脉存在更高水平的 ｓＴＮＦＲⅡ，在肿瘤累及浆膜时其增高更加明显。显示肿瘤坏死因子可能在其生成的局部发挥短程作用；术后仍维持较高水平ｓＴＮＦＲⅡ者常提示预后不良。

人可溶性TNF受体(sTNFRI)在大肠杆菌中的表达及其活性鉴定

目的 :构建人可溶性TNF受体I(sTNFRI)基因表达载体 ,并在大肠杆菌中高效表达。方法 :用RT PCR扩增编码人TNFRI胞外段基因片段 ,将其插入到表达载体pET 2 8a ,并转入大肠杆菌进行表达。结果 :在IPTG诱导下 ,转入外源基因的大肠杆菌BL 2 1可高效表达sTNFRI蛋白 ,SDS PAGE显示在 2 7kD处有一特异表达条带 ,其表达量占菌体蛋白总量的 31%。纯化的sTNFRI可有效封闭TNF对L92 9细胞的胞毒效应 ;间接免疫荧光显示它可特异性抑制TNF与靶细胞TNFR的结合。结论 :通过基因工程技术获得了人sTNFRI重组蛋白。

sTNFR-IgGFc融合基因在内皮细胞中的表达及其对小鼠关节炎模型的基因治疗研究

可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)可以拮抗肿瘤坏死因子的活性,因此已被用来治疗与TNF相关的炎性疾病。本研究将sTNFR与IgGFc片段的融合蛋白基因克隆到真核表达载体pStar上,转染到人的内皮细胞中,获得了表达。表达的sTNFR-IgGFc能够拮抗TNFα对L929细胞的细胞毒活性。将该质粒DNA与脂质体混合,经尾静脉注射到Ⅱ型胶原诱导的关节炎小鼠体内后,应用RT-PCR在鼠的肝脏检测到了sTNFR-IgGFc的表达,并显著地改善了治疗组小鼠关节炎症状和病理反应。这表明抗TNF基因治疗有可能作为治疗类风湿性关节炎的新的途径。

磁场对荷瘤小鼠TNF及TNFR水平的影响

目的 观察磁场对荷瘤鼠瘤组织内肿瘤坏死因子 (TNF)及肿瘤坏死因子受体 (TNFR)的影响。方法 采用磁场照射荷瘤小鼠瘤区。结果 磁疗组小鼠体内TNF活性明显增强 ,TNFR表达量增多 ,与非磁疗组相比 ,差异有高度显著性 (P <0 .0 1)。结论 磁场具有增强荷瘤小鼠TNF活性并促进TNFR表达的作用。

脂多糖对大鼠小气道上皮细胞TNF-α,TNFR表达和结构的影响

探讨脂多糖（LPS）引起大鼠小气道上皮细胞损伤及机制。将SD大鼠随机分为脂多糖气管注射组（LPS100μg /100μl L1组,50μg/100μl L2组）和对照组（生理盐水100μl,C组）。光镜和透射电镜动态观察小气道上皮细胞损伤改变,以原位分子杂交方法检测小气道上皮细胞TNFαmRNA和TNF受体mRNA表达的变化。结果:L1组和L2组病理改变趋势相似。LPS注射2d后,小气道上皮细胞轻度变性;LPS注射4d后,上皮细胞坏死,脱落明显,周围炎症也加重。与C组比较,L1组各时间处死大鼠小气道上皮细胞TNFαmRNA和TNF受体mR-NA表达均增高（P<0.01）;L1组:d8 TNFαmRNA比 d4TNFαmRNA表达明显增强（P<0.05）。L1组d4和d8TNF受体mRNA分别比d2 TNF受体mRNA表达增强（P<0.01）。脂多糖在体内可引起大鼠小气道上皮细胞明显损伤;小气道上皮细胞TNFαmRNA表达上调在脂多糖引起上皮细胞损伤中具有重要作用。

乳腺癌患者化疗前后血清leptin、TNF-α和STNFR检测的临床意义

目的:探讨乳腺癌患者化疗前后血清瘦素(leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和可溶性肿瘤坏死因子受体(STNFR)水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析和ELISA对33例肺癌患者进行了化疗前后血清leptin、TNF-α和STNFR测定,并与35名正常健康人作比较。结果:在化疗前,乳腺癌患者血清leptin、TNF-α和STNFR水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),经化疗后3个月与正常人组比较仍有差异(P<0.05)。结论:检测乳腺癌患者血清leptin、TNF-α和STNFR水平的变化对了解病情、观察疗效和预后均有重要的临床价值。

rhTNFR:Fc对兔正畸微种植体周围炎模型炎症反应的抑制作用研究

[目的]评价注射用重组人Ⅱ型TNF受体-抗体融合蛋白(tumour necrosis factor FC fusion protein,rh TNFR:Fc)(商品名:益赛普)在兔正畸微种植体周围炎模型的作用。[方法]选用新西兰兔12只,随机分为模型对照组和治疗组。分别在兔下颌无牙区植入正畸微种植体,采用钢丝结扎法建立实验性微种植体周围炎模型,结扎56d,治疗组给予rh TNFR:Fc,剂量1.1mg mg/(kg·d)1周,模型对照组给予等量生理盐水,两组在造模后第14、56、63d检测改良菌斑指数(m PLI)、改良龈沟出血指数(m BI)和种植体周探诊深度(PD);造模后63d取种植体周围牙龈行组织病理学检查,常规HE、免疫组化染色,观察炎性细胞浸润及TNF-α分布情况。[结果]造模后63d,治疗组m PLI、m BI、PD较模型对照组均明显下降(P<0.05)。组织病理学检查显示:造模后63d治疗组牙龈组织内炎症细胞浸润、TNF-α均较模型对照组减少(P<0.05)。[结论]rh TNFR:Fc可影响微种植体周围炎炎症反应过程。

扁平苔藓中TNF-α和TNFRⅠ的表达及意义

目的:探讨扁平苔藓皮损中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及其受体TNFRⅠ的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测TNF-α和TNFRⅠ在32例扁平苔藓皮损中的表达,30例正常皮肤作为对照。结果:扁平苔藓皮损中TNF-α和TNFRⅠ的阳性表达率分别是71.88%和65.63%;30例正常皮肤中,TNF-α无一例表达,TNFRⅠ的阳性表达率为20%;扁平苔藓皮损中二者表达高于正常皮肤组织(P<0.01)。结论:TNF-α和TNFRⅠ高表达可能参与扁平苔藓的发病。

肺癌患者化疗前后血清IL-2、TNF-α和STNFR检测的临床意义

目的:探讨了肺癌患者化疗前后IL-2、TNF-α和STNFR水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析和酶联法对36例肺癌患者进行化疗前后血清IL-2、TNF-α和STNFR的检测并与35名正常健康人作比较。结果:肺癌患者化疗前血清IL-2水平非常显著的低于正常人组(P<0.01),而TNF-α、STNFR水平明显高于正常人组(P<0.01),化疗后6个月在未复发的25例中明显下降,接近于正常人组,而复发组5例又回升至化疗前水平(P<0.05)。结论:检测肺癌患者血清中IL-2、TNF-α和STNFR含量的变化可作为诊断和疗效观察的参考。

特异性提高TNFR55在内皮细胞中的表达量的研究

以KDRp为启动子 ,实现TNFR5 5基因在内皮细胞中的特异表达 ,提高其表达量 .构建特异表达TNFR5 5的逆转录病毒载体pLXN D2 99 KDRp TNFR5 5 ,将编码TNFR5 5的cDNA转入内皮细胞中 ,检测感染后的内皮细胞中TNFR5 5表达量的变化及其对TNF细胞毒作用的影响 .结果显示 ,TNFR5 5在内皮细胞中的表达量有显著提高 (P <0 .0 1) ,TNF对内皮细胞的细胞毒作用增强 .而同样经病毒感染的NIH3T3细胞表面TNFR的表达量无明显变化 .编码TNFR5 5的cDNA能够在KDRp指导下实现在内皮细胞中的特异表达 ;内皮细胞表面TNFR数量提高后能加强TNF对其的细胞毒作用 .

肝癌患者PBMC的TNFRⅠ、Ⅱ的表达及治疗对表达率的影响

目的进一步了解肝癌患者的异常免疫状态,揭示免疫生物治疗可能的作用机制。方法用流式细胞仪技术和S-P一步法检测了30例健康成人和31例肝癌患者外周血单个核细胞(PBMC)的肿瘤坏死因子受体(TNFR)Ⅰ、Ⅱ的表达率以及生物治疗、化疗对表达率的影响。结果健康成人PBMC的TNFRⅠ、TNFRⅡ的表达阳性率分别为(38.54±8.51)%、(44.89±9.08)%;而肝癌患者分别为(28.35±9.09)%、(37.45±9.05)%,均显著低于健康成人(P<0.001)。12例肝癌患者用LAK细胞1×109加IL-2 20万U/d治疗,连续用6 d,其PBMC的TNFRⅠ阳性率明显升高[(42.86±9.02)%,P<0.001];TNFRⅡ表达略有升高,但尚无统计学意义。结论肝癌患者存在明显的免疫异常,生物治疗具有一定的理论依据。

饮食诱导肥胖大鼠sTNFR2与胰岛素抵抗关系

目的探讨饮食诱导肥胖(DIO)大鼠血清可溶性肿瘤坏死因子受体2(sTNFR2)与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法采用双抗体夹心ELISA法检测大鼠血清sTNFR2水平,放免法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、空腹胰岛素(FINS)水平。结果DIO大鼠血清sTNFR2、TNF-α水平显著高于对照组和饮食诱导肥胖抵抗(DIO-R)大鼠(P<0.01),DIO大鼠血清sTNFR2、TNF-α水平均与胰岛素敏感指数(ISI)呈负相关(P<0.05)。结论sTN-FR2在肥胖相关的IR发生中可能起重要作用。

天疱疮大疱性类天疱疮病损组织中TNFα TNFRp55 TNFRp75和iNOS的免疫组化检测

目的 探讨ＴＮＦα、ＴＮＦＲｐ５５ 、ＴＮＦＲｐ７５ 、诱生型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ） 在天疱疮、大疱性类天疱疮病损组织中所起的作用。方法 应用免疫组化技术，对１４ 例天疱疮、１１ 例大疱性类天疱疮的皮损进行了检测。结果 显示ＴＮＦα、ＴＮＦＲｐ５５ 、ＴＮＦＲｐ７５ 、ｉＮＯＤ 在天疱疮和大疱性类天疱疮皮损中均有不同程度的表达，尤其在水疱的顶、底部表达更明显。结论 ＴＮＦα通过与其受体ＴＮＦＲｐ５５ 和ＴＮＦＲｐ７５ 结合，在天疱疮表皮角质形成细胞的凋亡和水疱形成、大疱性类天疱疮基底膜带的破坏中可能起一定作用；ＴＮＦα可诱导细胞高表达ｉＮＯＳ，产生过量的一氧化氮（ ＮＯ） ，可能引起组织的损伤，也可能是加剧天疱疮和大疱性类天疱疮组织损伤的一种因素。

人可溶性sTNFR1及胞膜外区Ig融合基因重组腺病毒的真核表达及功能活性鉴定

目的构建携带人sTNFR1与IgGFc片段融合基因的重组腺病毒,稳定表达并初步鉴定其功能活性在妊娠哮喘炎症机制中的作用。方法将PCR扩增的sTNFR1及IgGFc基因片段先后连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV多克隆位点上,酶切线性化后在BJ5183细菌内与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,产生获得的AdE-EGFP-sTNFR1-Ig以脂质体法转染AD293细胞进行病毒包装,以绿色荧光蛋白(GFP)监测病毒滴度及感染效率。RT-PCR、Western blot实验鉴定细胞内重组腺病毒转录及融合基因与蛋白表达;流式细胞术、ELISA实验分析混合培养上清中转染肥大细胞(MC)激活、调节同基因来源T细胞表达Th2/Treg水平及细胞因子分泌效果;MTT评估转染细胞上清中sTNFR1-Ig对TNF-α介导细胞毒效应的拮抗作用。结果成功构建编码sTNFR1-Ig基因的重组腺病毒载体经酶切和测序鉴定正确,制备的腺病毒在转染细胞中的GFP表达以及CPE效应明显,扩增后的滴度为3.7×1010～4.8×1010pfu/ml,体外感染效率可达90%以上;sTNFR1-Ig基因在mRNA及蛋白水平获得的清晰条带均证实腺病毒包装与扩增成功。表达sTNFR1-Ig的MC诱导T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平以及IL-12含量均明显升高,CD4+IL-4+Th2细胞水平下调(P<0.05),Th2/Treg所占CD4+T细胞比值下降(P<0.05)。sTNFR1-Ig封闭TNF-α对MC免疫毒性作用的浓度效应明显,而EGFP-MCs与对照细胞上清对TNF-α毒性效应的中和阻断能力不足(P<0.05)。结论携sTNFR1-Ig基因重组腺病毒参与的免疫调控与妊娠期哮喘发生发展密切相关。sTNFR1及IgG-Fc亚基胞膜外区结合的表达和引起免疫耐受的作用研究,为妊娠哮喘发病机制在理论上的新突破,为以sTNFRI-Ig为靶点的妊娠哮喘干预治疗奠定基础。