两种温病湿热证模型的TNF-α与TG水平研究

目的:通过对小鼠肝炎病毒(MHV-A59毒株)与大肠杆菌导致的两种小鼠温病湿热证模型TNF-α与TG水平的研究,从炎症因子和血脂水平的角度评价两种温病湿热模型特征;方法:将18只小鼠随机分为正常组、病毒组、肠菌组,造模成功后分别取小鼠血液和提取血清,用ELISA法和磷酸甘油氧化法分别测试各组的TNF-α与TG水平,数据分析采用单因素方差分析,组间用q检验,两组间采用t检验,P<0.05为显著性差异,P<0.01为非常显著性差异。结果:病毒组与肠菌组血清TNF-α水平明显增高,且病毒组比肠菌组升高显著;两种模型小鼠TG水平虽有升高但组间变化无差别。结论:"内湿"的形成可能主要与肥甘饮食、湿热外环境有关,MHV-A59作为生物致病因子所致的湿热证模型炎症反应更加剧烈。

大黄酸对TNF-α和TG诱导L-02肝细胞凋亡的影响

目的观察大黄酸对TNF-α和TG诱导的肝细胞凋亡的影响,并探讨其抑制肝细胞凋亡的可能机制。方法体外培养人L-02肝细胞,用TNF-α(500U/ml)+TG(20ug/ml)诱导肝细胞凋亡模型;采用MTT法测定RH、TNF-α和TG对肝细胞的增殖的影响;流式细胞仪技术法测定肝细胞凋亡率;免疫组织化学法测定肝细胞Bcl_2、Bax基因表达水平。结果一定浓度的大黄酸对于TNF-α和TG引起的L-02肝细胞的增殖抑制有部分阻断作用。大黄酸还可通过上调Bcl_2,下调Bax表达,从而抑制细胞凋亡的发生。结论大黄酸具有抑制肝细胞凋亡作用,机理可能与增强Bcl_2表达及抑制Bax表达有关。

全腔镜甲状腺手术对早期分化型甲状腺癌CRP、TNF-α、Tg和VEGF水平的影响

目的探讨全腔镜甲状腺手术对早期分化型甲状腺癌患者血清C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、甲状腺球蛋白(Tg)和血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响。方法选取2017年9月至2019年6月我院收治的94例早期分化型甲状腺癌患者,随机分为两组各47例。对照组患者采用传统手术治疗,研究组患者采用全腔镜甲状腺手术治疗。比较两组术前及术后1 d的血清CRP、TNF-α、Tg和VEGF水平,并比较两组患者对手术美容的满意度。结果术后1 d,两组的血清CRP、TNF-α水平均显著升高,Tg和VEGF水平均显著降低(P<0.05);研究组的血清CRP、TNF-α、Tg和VEGF水平均显著低于对照组(P<0.05)。研究组患者对手术美容的满意度为95.74%,显著高于对照组的70.21%(P<0.05)。结论全腔镜甲状腺手术对早期分化型甲状腺癌患者的治疗效果显著,术后炎性反应轻,Tg和VEGF水平明显降低,美容效果满意。

脏痹方治疗类风湿关节炎间质性肺疾病小鼠关节炎及肺脏并发症的疗效研究

背景类风湿关节炎间质性肺疾病(RA-ILD)是类风湿关节炎(RA)常见的并发症之一,严重损害了RA患者的生活质量及生存期。脏痹方在临床多用于RA经久不愈者,但其作用机制及对RA-ILD的疗效仍不清楚。目的探讨脏痹方在RA和RA-ILD中的治疗可能性和潜在机制。方法研究时间为2022年1月—2023年3月。将14只肿瘤坏死因子α转基因(TNF-Tg)小鼠随机分为生理盐水组(Saline组)、脏痹方组(ZBF组),每组各7只。同时随机挑选7只同窝野生型小鼠作为对照组(WT组)。ZBF组给予脏痹方灌胃(1.4 g/mL,1次/d,0.2 mL/次),WT组和Saline组小鼠给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,连续8周。干预完成后小鼠踝关节组织分别采用苏木素-伊红(HE)染色检测炎性细胞面积,阿尔新蓝-橙黄染色检测软骨面积、骨面积占比,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色测量破骨细胞面积。小鼠肺组织分别采用HE染色检测炎性细胞面积占比,Masson染色检测肺纤维化情况,免疫荧光染色检测肺组织T淋巴细胞和B淋巴细胞面积占比。结果Saline组小鼠的踝关节内炎性细胞浸润明显增多,滑膜增生,关节组织被破坏。ZBF组踝关节的炎症减轻。Saline组小鼠炎性细胞面积占比高于ZBF组、WT组,ZBF组炎性细胞面积占比高于WT组(P<0.05)。Saline组小鼠踝关节距骨矢状面被严重破坏,骨侵蚀严重,ZBF组小鼠踝关节骨与软骨侵蚀明显改善,距骨矢状面轮廓逐渐清晰,骨量明显增加。Saline组软骨面积、骨面积占比低于ZBF组、WT组,ZBF组软骨面积、骨面积占比低于WT组(P<0.05)。Saline组小鼠踝关节中出现大片红色破骨细胞浸润,ZBF组小鼠破骨细胞浸润情况明显改善。ZBF组破骨细胞面积明显低于Saline组(P<0.05)。Saline组小鼠肺间质、血管和支气管周围弥漫有轻度至中度的炎性细胞浸润,中、小动脉壁增厚,肺泡间隔缩小,肺组织破坏明显;ZBF组小鼠肺间质和气管血管周围的炎性细胞减少,肺组织渐清晰,结构得到改善。Saline组炎性细胞面积占比高于ZBF组、WT组,ZBF组高于WT组。Saline组小鼠肺组织中血管和气管周围蓝色胶原纤维面积明显增多,肺泡或支气管壁增厚,ZBF组肺脏血管和支气管周围蓝色胶原纤维面积减少,肺脏结构改善明显。Saline组肺组织纤维化积分高于ZBF组、WT组,ZBF组肺组织纤维化积分高于WT组。Saline组小鼠肺组织T淋巴细胞、B淋巴细胞明显增多,大多围绕在肺脏血管和支气管周围,形成缺乏生发中心的卵泡样结构。ZBF组小鼠肺脏中的卵泡样结构减少。Saline组B淋巴细胞、T淋巴细胞面积占比高于ZBF组、WT组,ZBF组B淋巴细胞、T淋巴细胞面积占比高于WT组。结论脏痹方不仅减轻了RA-ILD小鼠的踝关节损伤,而且对其肺脏炎症和纤维化也有改善作用,减少了肺组织中的B淋巴细胞和T淋巴细胞数目。

三七总皂苷联合雷公藤多苷对关节炎大鼠外周血TNF-α、IL-6、MCP-1以及胸主动脉MCP-1表达的影响

目的观察中药有效成分三七总皂苷联合雷公藤多苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及胸主动脉MCP-1表达的影响。方法从50只大鼠中随机选取8只作为正常组,其余大鼠建立CIA模型。将成模大鼠随机分为模型组、雷公藤多苷组、联合组、甲氨蝶呤组,每组8只。雷公藤多苷组给予雷公藤多苷10 mg/(kg·d)灌胃,联合组给予三七总皂苷200 mg/(kg·d)和雷公藤多苷10 mg/(kg·d)灌胃,甲氨蝶呤组给予甲氨蝶呤1.6mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水灌胃,均1次/d,共42 d。灌胃结束后次日应用液相蛋白芯片技术检测血清中TNF-α、IL-6、MCP-1水平,应用免疫组织化学法检测胸主动脉MCP-1的表达量。结果模型组血清中TNF-α、IL-6、MCP-1水平均明显高于正常组(P均<0.05),各给药组均明显低于模型组(P均<0.05),联合组均明显低于甲氨蝶呤组和雷公藤多苷组(P均<0.05),甲氨蝶呤组和雷公藤多苷组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。模型组MCP-1表达量明显低于正常组(P<0.05),各给药组MCP-1表达量均明显高于模型组(P均<0.05),联合组明显高于甲氨蝶呤组和雷公藤多苷组(P均<0.05),甲氨蝶呤组和雷公藤多苷组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论三七总皂苷联合雷公藤多苷可明显降低血清炎症因子TNF-α、IL-6、MCP-1水平,上调MCP-1在胸主动脉的表达,且较单用雷公藤多苷或甲氨蝶呤效果更优,提示中药有效成分配伍在抗炎、保护心血管方面具有增效作用。

TNF-α促进HepG2肝细胞脂质积聚及其机制的初步研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)是否能够促进肝细胞脂质积聚,并对其机制进行初步探讨。方法将HepG2肝细胞分为空白对照组、单纯TNF-α组(TNF-α2ng/mL或20ng/mL)、软脂酸组(软脂酸0.08mmol/L或0.2mmol/L)及联合组(TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L、TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L),处理24h,应用化学酶促-比色法定量检测细胞内TG含量。进一步选取TNF-α20ng/mL和软脂酸0.08mmol/L,通过油红O染色观察HepG2细胞内脂质积聚情况;实时荧光定量PCR和Western blot检测HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平。结果①单纯TNF-α组TG含量[TNF-α2ng/mL组(0.344±0.093)μg/μg、TNF-α20ng/mL组(0.329±0.068)μg/μg]分别较空白对照组[(0.192±0.048)μg/μg]显著升高(P<0.05);联合组[TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L组(0.451±0.096)μg/μg、TNF-α2ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L组(0.821±0.257)μg/μg、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.08mmol/L组(1.032±0.286)μg/μg、TNF-α20ng/mL联合软脂酸0.2mmol/L组(2.134±1.049)μg/μg]分别较软脂酸组[软脂酸0.08mmol/L组(0.247±0.069)μg/μg、软脂酸0.2mmol/L组(0.341±0.031)μg/μg]显著升高(P<0.05);②油红O染色进一步显示,TNF-α促进肝细胞内脂质积聚。③实时荧光定量PCR和Western blot检测结果显示单纯TNF-α组与空白对照组相比,HepG2细胞SREBP-1、FAS、ACCα的表达均增加(P<0.05);联合组与软脂酸组相比,肝细胞内SREBP-1、FAS、ACCα的表达水平明显上调(P<0.05)。结论TNF-α促进HepG2肝细胞内脂质积聚,增加SREBP-1、FAS、ACCα的表达。

针刺对肥胖大鼠血脂及肿瘤坏死因子α的影响

目的:观察针刺对肥胖大鼠血脂及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响,探讨针灸减肥的机制。方法:用高脂饲料喂养制作肥胖大鼠模型。针刺肥胖大鼠"足三里"和"中脘"穴,并接通电针仪。每次10min,每日1次,"后三里"穴左右轮换,连续治疗14天。结果:针刺组大鼠血甘油三酯和胆固醇、TNF-α均比肥胖模型组降低(P<0.01),但与普食组仍有一定的差异(P<0.05)。结论:针刺对肥胖大鼠TNF-α抵抗状态的改善可能是其治疗作用机制之一。

独活寄生汤调节淋巴系统防治类风湿关节炎

目的探讨独活寄生汤(DHJST)对类风湿关节炎模型小鼠淋巴系统及免疫反应的影响。方法采用随机数字表法将10只3月龄TNF-α转基因(TNF-Tg)小鼠随机分为模型组(TNF-Tg)和DHJST组(5只/组);5只野生型同窝小鼠作为正常对照。DHJST组采用独活寄生汤灌胃,模型组和正常对照组(Control)采用相同体积的生理盐水灌胃,1次/d,连续给药12周后取材。采用阿尔新蓝-苏木精(ABOG)染色观察骨量及滑膜炎症情况;免疫荧光染色,观察促炎M1型巨噬细胞、淋巴管新生以及分布情况。结果与模型组比较,DHJST组小鼠软骨侵蚀、骨侵蚀以及滑膜炎症情况明显改善(P<0.05),促炎M1型巨噬细胞数量减少(P<0.01),毛细淋巴管生成增加(P<0.01),集合淋巴管分布广(P<0.01)。结论DHJST可通过调控淋巴系统,改善小鼠关节炎症情况,进而减缓类风湿关节炎进展。

二陈加桃红四物汤改善类风湿关节炎的机理研究

目的:类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种累及全身小关节的自身免疫性疾病。前期研究发现,充足的淋巴回流功能有利于RA的恢复。本文主要探讨二陈加桃红四物汤治疗本病的疗效及其对淋巴管回流功能的影响。方法:本研究采用10周龄TNF转基因(TNF-Tg)小鼠为模型,以二陈加桃红四物汤灌胃治疗12周,并选取同窝野生型小鼠作对照,采用Micro-CT观测小鼠的踝关节骨量,采用近红外-吲哚菁绿系统检测小鼠下肢淋巴管功能。结果:Micro-CT三维成像显示,与对照组相比,TNF-Tg组可见明显的骨质破坏,踝关节结构严重受损。二陈加桃红四物汤治疗后,骨结构得到了一定程度的保护。淋巴管回流功能检测显示,与对照组相比,TNF-Tg组的淋巴管清除率明显下降;与TNF-Tg组相比,二陈加四物汤可促使受损的淋巴功能恢复。与对照组小鼠相比,TNF-Tg组的Pulse值明显下降,与TNF-Tg组相比,二陈加桃红四物汤可促进Pulse值明显升高。结论:二陈加桃红四物汤可以有效促进TNF转基因小鼠模型下肢的淋巴回流功能,从而缓解关节炎症,保护骨组织免受侵蚀。

胡椒碱对胰岛素抵抗综合征模型大鼠脂代谢及作用机制的研究

目的探讨胡椒碱(PIP)对胰岛素抵抗综合征(IRS)大鼠甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(FFA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、瘦素(Leptin)的作用。方法采用高脂高糖高盐饲料喂养制备IRS大鼠模型。每4周观察各组空腹TG,第4周开始给药,连续给药8周后,分别采用GPO-PAP法、比色法检测TG和FFA水平,ELISA法检测TNF-α、Leptin水平。结果给药8周后,模型大鼠血清TG、FFA、TNF-α、Leptin水平明显升高,不同剂量PIP使TG、FFA、TNF-α、Leptin水平下降。结论 PIP明显改善IRS模型大鼠的脂代谢异常情况,能降低IRS模型大鼠TG和FFA水平,其作用机制可能与下调细胞因子TNF-α、Leptin有关。

小鼠肝炎病毒温病湿热证模型的探讨

目的:研究拟以MHV-A59和大肠杆菌作为生物致病因子,建立两种小鼠温病湿热证动物模型,通过对比探讨小鼠肝炎病毒温病湿热证模型可行性。方法:动物随机分为3组:正常组、模型组(肥甘饮食+湿热外环境+MHV-A59造模)、肠菌组(肥甘饮食+湿热外环境+大肠杆菌造模),检测小鼠血清TG、TNF-α水平及肝组织病理切片,观察动物症状及体征。结果:与正常组比较,两种温病湿热证模型组小鼠血清TG及TNF-α水平明显升高(P<0.01),两组造模动物均不同程度出现了发热、疲倦、纳呆、腹泻、体重减少、毛发无泽等症状。结论:以MHV-A59作为生物致病因子,结合肥甘饮食及湿热外环境因素构建的动物模型,可以作为温病湿热证动物模型之一,也是一种新的病证结合模型。

外源性脂联素对大鼠非酒精性脂肪肝病影响的研究

目的探讨外源性脂联素对大鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的影响。方法成年SD(Sprague Dawley)远交群大鼠82只,分别予普通饮食(普通饮食组,n=12)、高脂饮食(高脂饮食组,n=70)。所有大鼠喂养4w,并处死2只大鼠做肝脏病理HE染色,以确定造模成功。将造模成功大鼠随机分为高脂饮食对照组(n=10)、脂联素给药组(10、20、30μg·kg^(-1)·d^(-1))腹腔注射,每组10只,持续4w,分组处理期间,大鼠仍继续给予高脂饮食。4w后以3%戊巴比妥腹腔注射麻醉(2mL/kg),腹主动脉采血。每只大鼠取50g肝脏备用,肝组织石蜡切片苏木素-伊红(HE)常规染色。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平、检测各组大叔血清总胆固醇游离脂肪酸(TC)、甘油三脂(TG)、血丙氨酸转氨酶(ALT)水平。RT-PCR法检测AdipoR2mRNA表达。结果高脂饮食组大鼠肝细胞肿胀,体积较正常明显增大,出现脂肪变性,胞质内可见大小不等的脂滴空泡,以大泡性脂肪滴为主,汇管区有以单核、淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,部分出现点状坏死和灶状坏死,已进展为NAFLD阶段,大鼠NAFLD的模型制备成功。高脂饮食对照组、脂联素10μg·kg^(-1)·d^(-1)组、脂联素20μg·kg^(-1)·d^(-1)组、脂联素30μg·kg^(-1)·d^(-1)组体质量、TG、TC、ALT高于普通饮食组(P<0.05)。脂联素20μg·kg^(-1)·d^(-1)组、脂联素30μg·kg^(-1)·d^(-1)组体质量、TG、TC、ALT低于高脂饮食对照组(P<0.05)。随着脂联素浓度的升高,大鼠体质量、TG、TC、ALT逐渐增加,但各给药组间以上指标差异无统计学意义(P>0.05)。与高脂饮食对照组比较,脂联素10μg·kg^(-1)·d^(-1)组、20μg·kg^(-1)·d^(-1)组、30μg·kg^(-1)·d^(-1)组AdipoR2基因表达均增加,差异有统计学意义(P<0.05)。脂联素10μg·kg^(-1)·d^(-1)组AdipoR2mRNA表达量明显高于其他脂联素给药组(P<0.05)。高脂饮食对照组TNF-α明显升高,脂联素各给药组TNF-α低于高脂饮食对照组(P<0.05)。结论高脂饮食能使大鼠发生肝脂肪变性,具有脂肪细胞的特征,同时血脂、TNF-α水平升高。脂联素能降低大鼠血脂、TNF-α水平,改善肝功能,升高adipoR2 mRNA水平,脂联素可能在NAFLD的治疗中发挥作用。

加味牛蒡子汤对炎症性关节炎小鼠踝关节损伤的实验研究

目的:通过动物体内实验验证加味牛蒡子汤(JWNBZT)对类风湿性关节炎的治疗作用。方法:将20只3月龄左右TNF-Tg小鼠按照体重随机分为模型组和加味牛蒡子汤治疗组,另取10只同窝对照体重相似的野生型小鼠(WT)作为空白对照组,治疗组每天以加味牛蒡子汤灌胃,空白对照组和模型组每天以等量纯净水灌胃,治疗12周后测量小鼠踝关节周长和活动度,并取踝关节制作石蜡切片进行HE染色观察炎性浸润和关节结构改变情况。结果:与WT小鼠相比,TNF-Tg小鼠踝关节明显肿胀(P<0.05),踝关节背伸活动度受限;而加味牛蒡子汤治疗12周明显减轻TNF-Tg小鼠踝关节肿胀(P<0.05)和踝关节活动度(P<0.05)。踝关节石蜡切片HE染色显示空白对照组小鼠踝关节结构完整,没有炎性浸润和骨性侵蚀;模型组小鼠踝关节炎性浸润大量产生,骨侵蚀严重,关节结构明显破坏;加味牛蒡子汤组治疗后炎性浸润和骨结构破坏明显减轻。结论:加味牛蒡子汤能够减轻TNF-Tg关节水肿和结构破坏,是炎症性关节炎治疗的潜在替代药物。

茵陈蒿汤抗游离脂肪酸对HepG2细胞脂毒性作用的效应中药研究

目的:探讨对游离脂肪酸(FFA)诱导人肝癌细胞株(HepG2)细胞脂肪沉积和对肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌有显著抑制作用的茵陈蒿汤的效应中药或组合。方法:采用FFA诱导HepG2细胞脂肪沉积和TNF-α分泌的体外细胞模型和药物血清技术,运用数学模型"均匀设计法",根据复方中的3味中药(茵陈、栀子、大黄),选用U7(76)表进行组方设计所得6种中药组合进行干预,以对甘油三酯(TG)及TNF-α的抑制效应作为考察指标,筛选效应中药或组合,并重新区间分组验证。结果:茵陈和栀子在高剂量组合时有显著降低细胞TG及TNF-α含量的效应,与全方无显著性差异,其中单一茵陈也可显著降低细胞TG及TNF-α含量。结论:茵陈及其与栀子的组合是茵陈蒿汤抑制FFA诱导HepG2细胞脂肪沉积和TNF-α分泌作用的效应中药。