肾同种移植排斥患者血清可溶性TNF相关凋亡诱导配体及多种细胞因子水平变化的临床意义

目的:观察肾同种移植排斥患者血清可溶性TRAIL(sTRAIL)、sTNFR-I、sTNFR-II、sFas、sFasL的水平变化与临床意义。方法:采用酶联免疫双抗体夹心法测定。结果:受试组(n=29)与健康对照组(n=29)比较sTRAIL、sTNFR-I、sTNFR-II、sFas差异有显著性(P<0.01)。受试组与对照组(n=58)sFasL比较差异无显著性(P>0.05)。结论:肾同种移植排斥患者血清sTRAIL、sTNFR-I、sTNFR-II、sFas水平比对照组显著升高,提示血清这些细胞因子的含量变化在肾同种移植排斥病理过程中起着重要作用。

TNF相关的凋亡诱导配体和受体在不同胸腺组织中的差异表达及对细胞凋亡的影响

目的:研究肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TRAIL)和受体在不同胸腺组织中的差异表达,为TRAIL在胸腺生物学及疾病治疗中的作用提供参考依据。方法:选择6例伴有胸腺增生和14例伴有胸腺瘤的重症肌无力患者以及10名正常受试者作为研究对象,分别分析正常胸腺、胸腺增生和胸腺瘤组织中的TRAIL及其跨膜受体的差异表达谱、NFκB活化状态和凋亡细胞指数。结果:所有胸腺组织均可表达TRAIL及其受体,胸腺增生组织的死亡受体DR4和DR5的表达水平最高。所有胸腺组织中NFκB的活性形式均未检测到。与正常胸腺相比,胸腺增生和胸腺瘤组织中的凋亡细胞指数更高。结论:TRAIL死亡受体(DR4/DR5)在正常胸腺、胸腺增生和胸腺瘤组织中的表达水平呈现显著差异,TRAIL在选择性诱导胸腺肿瘤细胞凋亡方面具有重要的潜在价值。

TNF相关凋亡诱导配体基因治疗小鼠肝细胞肿瘤

目的:探讨经化疗药物作用后的H22细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性,观察TRAIL、纤黏连蛋白及内皮抑素的真核表达质粒pTRAIL,pCH510,pES联合化疗抑制小鼠肿瘤生长的作用。方法:pTRAIL转染BHK细胞后,加入分别经MMC,ADM,5-FU处理的H22细胞,MTT法检测pTRAIL对H22细胞的生长抑制作用,流式细胞仪分析H22细胞凋亡。在小鼠种植瘤体内注射MMC与pTRAIL,pCH510,pES,观察其对肿瘤生长的抑制作用。结果:pTRAIL能抑制H22生长并诱导细胞凋亡,与MMC,ADM及5-FU联合,H22的凋亡百分数分别为28.1%(P<0.01),22.5%(P<0.01)及47%(P>0.05)。体内,MMC+pTRAIL+pES+pCH510联合能有效抑制肝细胞肿瘤生长,肿瘤生成率为37.5%。结论:MMC或ADM作用后的残存H22肿瘤细胞对pTRAIL敏感,MMC+pTRAIL+pES+pCH510具有协同抑瘤效应,能将小鼠肝细胞肿瘤抑制在组织学水平。

TNF相关凋亡诱导配体在卵巢癌基因治疗中的应用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是新近发现的肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员,有2类受体,一类是死亡受体,能诱导多种肿瘤细胞凋亡;另一类是诱骗受体,没有胞内死亡区域,不传递凋亡信号。TRAIL有广谱的抗瘤作用,与传统的放疗、化疗有协同作用,且对正常组织细胞无毒性,因此有望应用于肿瘤基因治疗。可通过补充细胞因子或通过基因补充,为癌症治疗提供一个新的有希望的治疗方法。

TNF相关的凋亡诱导配体与肿瘤

TNF相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL),属于TNF超家族成员,又称为Apo-2L,TRAIL能诱导多种肿瘤细胞的凋亡,而正常的细胞却对其不敏感,TRAIL主要通过与其受体结合激活caspase-8,启动非线粒体和线粒体依赖途径导致细胞凋亡。部分肿瘤细胞对TRAIL的敏感性较差,其原因与TRAIL的受体、信号转导途径激酶以及相关蛋白存在密切联系。

重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的药代动力学和组织分布

目的研究重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhTRAIL)的药代动力学和组织分布。方法恒河猴单次静脉滴注rhTRAIL1,5和25mg.kg-1及iv5mg·kg-1后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定rhTRAIL在恒河猴体内的血药浓度,并采用放射性核素示踪技术结合三氯乙酸(TCA)沉淀和分子排阻高效液相色谱法测定[125I]rhTRAIL在荷瘤裸鼠组织内的含量。结果恒河猴单次静脉滴注rhTRAIL1,5和25mg·kg-1后,各剂量组的药代参数除cmax和AUC以外,均无显著差异,表现出线性动力学性质。恒河猴每天给药1次,连续7d,药物在体内没有蓄积。恒河猴静脉滴注和iv给药对药物的体内清除过程无明显影响。[125I]标记rhTRAIL后的放化纯度大于98%。荷瘤裸鼠iv给予[125I]rhTRAIL后,在各组织广泛分布,总放射性在肿瘤组织中于给药后2h达到高峰,在其他大部分组织中于给药后10min达高峰。给药后10min及2,8和24h,肿瘤/血清的酸沉放射性比值分别为0.07±0.01,0.62±0.17,0.78±0.57和1.66±0.50;给药后24h,肿瘤组织的放射性浓度高于其他组织和血清。结论在研究剂量范围内,rhTRAIL在恒河猴体内表现为线性动力学。[125I]rhTRAIL给药后在荷瘤裸鼠中广泛分布,在肿瘤组织中分布浓度较高,并主要经肾脏排泄。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对实验性结肠炎小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响

背景:Th17/Treg细胞失衡可能是参与克罗恩病(CD)发生的重要环节。肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)信号通路是影响包括CD在内的多种自身免疫性疾病的潜在机制之一。目的:探讨TRAIL基因敲除对实验性结肠炎小鼠Th17/Treg细胞平衡的影响。方法:采用CRISPR/Cas9基因敲除技术获得TRAIL-/-C57BL/6小鼠。分别将TRAIL-/-小鼠和同品系野生型(WT)小鼠各20只随机分为两组,一组不予处理,一组以三硝基苯磺酸(TNBS)诱导实验性结肠炎。评估各组小鼠结肠炎症程度,采用real-time PCR、蛋白质印迹法和ELISA法检测外周血和结肠组织中的Th17、Treg细胞相关转录因子RORγt、Foxp3和细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-10表达。结果:与未造模小鼠相比,造模小鼠体质量显著下降,结肠缩短,疾病活动指数评分和组织活动度指数评分升高(P<0.05),TRAIL-/-结肠炎小鼠上述表现更为明显(P<0.05)。WT结肠炎小鼠外周血和结肠组织中的RORγt、IL-17表达较未造模WT小鼠显著升高(P<0.05),Foxp3、IL-10表达显著降低(P<0.05)。TRAIL-/-结肠炎小鼠上述Th17、Treg细胞相关因子表达和RORγt/Foxp3比值均较WT结肠炎小鼠显著升高(P<0.05)。结论:TRAIL基因敲除可能通过Th17/Treg细胞比例上调加重实验性结肠炎小鼠的肠道炎症反应。

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在原发性胆汁性肝硬化患者血清中的表达及意义

目的观察人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血中水平的表达,并探讨sTRAIL在PBC发病机制中的作用。方法用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测PBC患者26例(PBC组),慢性肝炎肝硬化患者27例(慢性肝炎肝硬化组)以及健康体检者25例(正常对照组)的sTRAIL并同时测定IgGI、gA、IgM,观察各指标在PBC中的改变。结果PBC组和慢性肝炎肝硬化组sTRAIL浓度均显著高于正常对照组(158.73±42.45)pmol/L,(108.13±41.60)pmol/L vs(73.83±8.60)pmol/L(P<0.01)。PBC组sTRAIL也较慢性肝炎肝硬化组明显升高(P<0.01)。结论sTRAIL在PBC患者及慢性肝炎肝硬化患者血清中均升高,但二者升高程度比较差异有统计学意义,检测sTRAIL对PBC患者的临床诊断中具有辅助作用并有助于PBC发病机制的研究。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在寻常型银屑病皮肤中的表达

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体[tumornecrosis factor(TNF)-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL]在寻常型银屑病和健康人皮肤组织中的表达差异。方法采用免疫组织化学和Real-Time PCR方法从蛋白水平和mRNA水平上考察TRAIL的表达变化。结果银屑病皮损中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的表达低于健康人皮肤。结论TRAIL水平的降低可能与银屑病的发生发展有关。

肿瘤对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的耐受机制及增敏实验的研究

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是近年来发现的凋亡分子,能选择性诱导转化细胞、肿瘤细胞和病毒感染细胞发生凋亡,而对大多数正常细胞几乎没有毒性。但如果TRAIL在肿瘤中介导的凋亡信号传递受阻或者出现其他信号传导通路的激活,就可引起肿瘤对TRAIL的耐受。如果TRAIL蛋白与化疗药物或其他方法联合应用,就可以上调DR4、DR5、caspase3、caspase8或Bax等促凋亡因子的表达,或下调Bcl-XL、cFLIP等凋亡抑制因子的表达,从而克服肿瘤细胞对TRAIL的耐受或提高对TRAIL的敏感性。本文主要概述肿瘤细胞对TRAIL的耐受机制及克服耐受、增强肿瘤细胞凋亡敏感性的实验研究进展。

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体及其受体与宫颈癌的关系

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其发生率呈明显上升且年轻化的趋势。目前,除传统手术及放化疗方式治疗恶性肿瘤外,肿瘤生物学治疗方法的地位逐渐提高。肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)是近年新发现的肿瘤坏死因子超家族成员之一,与细胞膜表面的特异性受体结合,通过活化天冬氨酸蛋白水解酶或线粒体依赖途径选择性地诱导肿瘤细胞凋亡而正常细胞可凋亡逃逸,这种性质使其被认为是肿瘤治疗中极有潜力的靶向治疗因子,具有十分重要的临床价值。研究发现,TRAIL及其受体在宫颈癌组织中存在异常表达,并成为近年研究的热点。综述TRAIL及其受体的结构、生物学功能,在宫颈癌上皮细胞中的表达情况及其在宫颈癌中的研究进展。

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在消化系统肿瘤治疗中的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)可通过特异性识别肿瘤细胞死亡受体而诱导并启动多种凋亡机制,发挥抑制肿瘤的增殖、浸润、转移的作用,但TRAIL对食管癌、胃癌、大肠癌等消化系统恶性肿瘤治疗并不敏感。TRAIL可通过联合使用某些小分子化合物,或通过调节凋亡相关蛋白的表达等来提高其抑癌的能力,然而其具体作用机制尚不清楚。就肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在消化系统肿瘤治疗中的研究进展进行综述。

通过奥沙利铂抑制PI3K/Akt通路以增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡敏感性的实验研究

目的通过亚毒性剂量奥沙利铂抑制PI3K/Akt通路以增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性,探讨其作用机制。方法将常规传代培养的人结肠癌RKO细胞分为空白对照组、对照组、TRAIL单药组(25、50、100、200、400 ng/ml)、奥沙利铂单药组(10、20、40、80μg/ml)及联合用药组(100 ng/ml TRAIL+40μg/ml奥沙利铂)。采用甲基偶氮唑蓝(MTT)检测对数生长期细胞,计算细胞增殖率和药物抑制细胞增殖50%的浓度(IC50);瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态;流式细胞术检测细胞凋亡,计算细胞凋亡率;蛋白印迹法(Western blot)检测各组细胞蛋白变化。结果 TRAIL单药组24 h时细胞增殖率与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);奥沙利铂单药组24、48、72 h时IC50与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);联合用药组24 h时细胞增殖率与40μg/ml奥沙利铂单药组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。100 ng/ml TRAIL组细胞凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);40μg/ml奥沙利铂组、联合用药组细胞凋亡率与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。100 ng/ml TRAIL组p-Akt活化性增强,没有观察到活化的Caspase-3;40μg/ml奥沙利铂组和联合用药组p-Akt活化性被明显抑制,可以观察到活化的Caspase-3。对照组细胞形态正常,40μg/ml奥沙利铂组可见典型的凋亡小体。结论奥沙利铂可通过抑制PI3K/Akt通路活化而增强TRAIL诱导结肠癌RKO细胞凋亡的敏感性,为结肠癌的治疗提供了新思路。

亚毒性剂量阿霉素提高抗人DR4、DR5抗体诱导的神经胶质瘤细胞凋亡的研究

目的探讨亚毒性剂量的阿霉素影响抗DR4、DR5单克隆抗体(mAb)FMU1.4和FMU1.5诱导3株神经胶质瘤细胞株U343(TRAIL敏感株)、U138(TRAIL部分敏感株)及U373(TRAIL耐受株)凋亡的作用及可能的机制。方法采用流式细胞术检测DR4、DR5的表达及神经胶质瘤细胞中DNA倍增。用MTT比色法检测mAbFMU1.4和FMU1.5对3株神经胶质瘤细胞增殖的抑制作用。用共聚焦显微镜观察3株细胞中Ca2+的浓度。以Westernblot检测细胞内色素C、FLIP[FLICE-inhibitoryprotein,为一组含有死亡效应结构域(DED)的胞浆蛋白]的表达。结果亚毒性剂量的阿霉素作用后,DR5、DR4在3株细胞中的表达提高;而mAbFMU1.4、FMU1.5诱导U138和U373细胞凋亡的作用增强,细胞内细胞色素C的表达提高,FLIP的表达降低,Ca2+浓度增加。结论亚毒性剂量的阿霉素与抗DR4、DR5mAb联合应用后,可提高mAb诱导靶细胞凋亡的效应,其作用机制与DR4、DR5、细胞色素C、FLIP的表达及Ca2+的含量有关。

XAF1增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的敏感性

背景：肿瘤坏死因子（TNF）相关凋亡诱导配体（TRAIL）可特异性诱导肿瘤细胞凋亡，但部分肿瘤细胞对TRAIL不敏感甚至耐药。目的：探讨X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是否可增加TRAIL诱导的肝癌细胞株凋亡的敏感性。方法：重组人TRAIL（rhTRAIL）因子分别加入3株肝癌细胞株SMMC7721、HepG2和Bel-7404中培养，联合或不联合相同感染复数（MOI）的重组腺病毒Ad5／F35-XAF1和对照空病毒Ad5／F35-Null。作用48h后，以MTT检测细胞活力，以AnnexinV—FITC／PI法检测细胞凋亡率。结果：随着TRAIL浓度的增加，3株肝癌细胞株的细胞活力均不同程度降低。TRAIL与Ad5／F35-XAFI联合作用后，其细胞活力显著低于单独TRAIL组，而Ad5／F35-Null组细胞活力与单独TRAIL组无明显差异。与空白对照组和Ad5／F35-Null组相比．TRAIL组和Ad5／F35-XAF1组3株肝癌细胞株的凋亡率均显著增加。TRAIL与Ad5／F35-XAF1联合作用后．细胞凋亡率显著高于Ad5／F35-XAF1组或TRAIL组。结论：XAF1可明显增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的敏感性．两者联合应用对诱导不同肝癌细胞凋亡具有协同作用。

丁酸钠激活TRAIL通路诱导白血病细胞凋亡机制的研究

本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)丁酸钠诱导白血病细胞凋亡的机制。应用流式细胞术检测白血病细胞NB4、U937和Jurkat的凋亡情况,并应用Western blot和RT-PCR方法分别检测TRAIL及其受体DR4/DR5细胞表面蛋白及mRNA的变化情况。结果表明:经HDACI处理后,白血病细胞TRAIL和DR5蛋白及mRNA表达均随时间延长而增加,而DR4没有变化。结论:丁酸钠诱导白血病细胞凋亡的机制是与上调TRAIL及DR5mRNA的转录及蛋白表达密切相关的,而DR4可能不参与该凋亡过程。

Apo-2L对放射线诱导鼻咽癌CNE细胞凋亡作用

目的了解凋亡素2配体(Apo-2L)与放射治疗协同对体外培养鼻咽癌CNE细胞增殖周期及凋亡率的影响。方法 MTT法检测不同浓度Apo-2L对鼻咽癌CNE细胞的影响,确定Apo-2L与细胞作用时间及浓度。将细胞随机分为对照组、Apo-2L组、Apo-2L+放射组及单纯放射组,分别给予相应的处理后制成细胞悬液,流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期变化。结果鼻咽癌CNE细胞的抑制率与Apo-2L的浓度呈正相关(r=0.91,P<0.05),当用浓度为100μg/L的Apo-2L处理CNE细胞24h,Apo-2L+放射组凋亡率较其他各组明显升高,差异有显著性(F=8.64,P<0.05)。Apo-2L+放射组G2-M期比率较其他各组显著降低(F=7.74,P<0.05)。结论Apo-2L对体外培养鼻咽癌CNE细胞有抑制增殖和促进凋亡作用;Apo-2L联合放射线治疗可以使细胞周期同步化,并明显提高CNE细胞的凋亡率。

葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠中TRAIL-R基因敲除对Th17细胞凋亡的影响

目的:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)构建实验性结肠炎小鼠模型,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的受体基因敲除(TRAIL-R-/-)对结肠炎症及Th17细胞凋亡的影响。方法:将C57BL/6品系小鼠分为4组:TRAIL-R-/-结肠炎组、TRAIL-R-/-对照组、野生型(WT)结肠炎组、WT对照组,每组各9只。结肠炎组饮用3.5%的DSS,对照组饮用清水。7 d后,从临床表现和组织病理学上评估小鼠结肠炎的严重程度。取外周血单个核细胞(PBMCs)和结肠黏膜固有层单个核细胞(LPMCs),采用流式细胞术检测Th17细胞占CD4+T细胞的比例,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-q PCR)、Western blot和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测视黄酸相关孤儿受体(ROR-γt)和IL-17A的m RNA和蛋白表达水平。采用TUNEL荧光染色技术及激光共聚焦显微镜观察结肠组织中Th17细胞的凋亡率。通过比色法检测结肠组织中凋亡蛋白酶Caspase 3、Caspase 8和Caspase 9的活性。结果:DSS诱导后,TRAIL-R-/-小鼠较WT小鼠发生了更为严重的结肠炎。TRAIL-R-/-结肠炎小鼠PBMCs中Th17细胞的比例(P<0.01),以及ROR-γt和IL-17A的m RNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠(均P<0.05)。TRAIL-R-/-结肠炎小鼠LPMCs中Th17细胞的比例(P<0.01),以及ROR-γt和IL-17A的m RNA和蛋白表达水平均显著高于WT结肠炎小鼠(均P<0.05)。与WT结肠炎小鼠相比,TRAIL-R-/-结肠炎小鼠的结肠组织中Th17细胞的凋亡率(P<0.01)以及Caspase 3和Caspase 8的酶活性均显著降低(均P<0.01)。结论:DSS诱导后,TRAIL-R-/-小鼠的结肠炎症较WT小鼠更为严重,原因可能是Th17细胞凋亡减少,其数目和活性增高所致。