TNF单抗阻断烫伤大鼠蛋白质高分解代谢的实验研究

目的 探讨烧 (烫 )伤后骨骼肌蛋白质分解代谢的规律及肿瘤坏死因子 (TNF)与TNF单克隆抗体 (TNF -McAb)的可能作用及其意义。方法 实验大鼠分为正常对照组、烫伤组、正常重组人TNF(rHu -TNF)注射组、烫伤TNF -McAb注射组。于伤后 1周内动态观察骨骼肌蛋白质分解速率与TNF含量的变化 ,以及外源性TNF和TNF单克隆抗体对烫伤大鼠骨骼肌蛋白质分解代谢的影响。结果 烫伤后各时相点大鼠比目鱼肌酪氨酸净释放量均明显高于正常 ,且伤肢显著高于未伤肢。烫伤大鼠血清中TNF水平的变化随时间递增。烫伤大鼠比目鱼肌中TNF含量增高 ,伤肢高于未伤肢。比目鱼肌TNF含量与酪氨酸释放量呈显著正相关。rHu -TNF注射组比目鱼肌酪氨酸净释放量显著增加。TNF -McAb注射组比目鱼肌酪氨酸净释放量显著低于未注射组。结论 伤后骨骼肌蛋白质分解增强 ;局部高浓度的TNF是蛋白质分解代谢增强的重要原因之一 ;

重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质残留夹心ELISA检测方法的建立及验证

目的建立检测重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质(host cell protein,HCP)残留的夹心ELISA法,并进行验证。方法采用二维电泳-Western blot(2D-Western blot)法筛选兔抗CHO HCP多克隆抗体(产品号:AB000103-A、AB000103-C)及羊抗CHO HCP多克隆抗体(批号:3G-0016-PA)中识别重组人抗TNFα单抗特异性CHO HCP覆盖率最高的一种作为检测抗体,建立检测样品中残余HCP的夹心ELISA法,并验证方法的线性、基质干扰、稀释线性、灵敏度、精密度及准确性。结果以覆盖率达57%的AB000103-C号兔抗CHO HCP多克隆抗体作为检测抗体;样品基质干扰HCP检测,样品需稀释6倍;HCP标准品浓度在3.33~810 ng/mL范围与A450值曲线拟合良好,R2=1,试验内及试验间精密性验证的CV均小于12%,检测限及定量限分别为2.4和20 ng/mL;20、150及300 ng/mL的加标样品回收率分别为99.5%、97.1%及100.3%。结论成功建立了重组人抗TNFα单抗HCP残留的夹心ELISA检测方法,该方法灵敏度高,准确性、精密性及线性良好,适用于重组人抗TNFα单抗制品的残留HCP检测。