槲皮素联合山柰酚抑制TNF信号通路保护大鼠背根神经节细胞免受高糖损伤

目的 探究槲皮素(Quercetin, Que)联合山柰酚(Kaempferol, Kae)对高糖(high glucose, HG)引起大鼠背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)细胞氧化损伤及凋亡的保护作用。方法 通过体外培养DRG细胞,CCK-8检测细胞活力,确定糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)体外模型建设条件、Que、Kae和二者组合的最佳给药浓度。DRG细胞分为5组(Con、HG、HG+Que、HG+Kae、HG+Que+Kae),ROS Assay Kit试剂盒和细胞凋亡荧光Hoechst 33342/PI双染试剂盒检测单药或组合药对HG诱导细胞产生ROS的影响和细胞过量凋亡的抑制作用;蛋白印迹法检测细胞死亡受体通路关键蛋白TNFR1、FADD、Caspase-8和Caspase-3的表达水平。结果 HG浓度达到85μM,作用时间24 h,细胞活力降至62%左右,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);与HG组相比,20μM的Que、5μM的Kae和10μM的Que加5μM的Kae对HG环境中DRG细胞保护性最好,细胞活力最高,差异均有统计学意义(P<0.05);单药或组合药均能降低细胞内ROS水平和抑制DRG细胞过量凋亡,具有抗氧化和抗凋亡作用,组合药优于单药;单药组或组合药组TNFR1、FADD、Caspase-8和Caspase-3的表达水平均低于HG组,其中组合组蛋白水平表达最低,差异有统计学意义(P<0.05),虽然HG+Que组有降低趋势,但是无统计学意义(P>0.05)。结论 Que联合Kae通过抗氧化和抑制细胞死亡受体通路,降低DRG细胞凋亡量,延缓DPN的进展。

基于VEGFA/TNF/IL-6信号通路探讨灵泽片对良性前列腺增生大鼠的治疗作用

目的:基于VEGFA/TNF/IL-6通路探讨灵泽片对良性前列腺增生大鼠的干预机制。方法:将30只SPF级SD大鼠随机等分为空白对照组、模型对照组、灵泽片低剂量组、灵泽片中剂量组、灵泽片高剂量组。除空白对照组外,余各组大鼠采用非去势丙酸睾酮诱导法建立前列腺增生大鼠模型。造模结束后,空白对照组及模型对照组选用生理盐水,灵泽片低、中、高剂量组分别选用相应药物,连续灌胃给药28 d。灌胃结束后处死大鼠,取前列腺组织,观察各组大鼠前列腺指数、组织结构及VEGFA/TNF/IL-6信号通路相关蛋白的变化。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠前列腺组织增生明显;前列腺指数明显上升(0.84±0.01,P<0.05),组织学观察形态可见前列腺上皮组织厚度扩大和管腔区浸润现象,VEGFA(0.60±0.02,P<0.05)、TNF(0.76±0.02,P<0.05)、IL-6(0.64±0.02,P<0.05)蛋白表达水平显著上升,差异具有统计学意义。与模型对照组比较,灵泽片低剂量组(0.76±0.02,P<0.05)、中剂量组(0.58±0.02,P<0.05)、高剂量组(0.52±0.01,P<0.05)大鼠前列腺指数均有所下降,差异有统计学意义;组织形态可见显著改善,WB结果显示灵泽片干预各组的VEGFA蛋白(低剂量组:0.45±0.01,中剂量组:0.35±0.01,高剂量组:0.31±0.02,各组P均<0.05)、TNF蛋白(低剂量组:0.45±0.01,中剂量组:0.33±0.01,高剂量组:0.27±0.01,各组P均<0.01)、IL-6蛋白(低剂量组:0.44±0.01,中剂量组:0.36±0.01,高剂量组:0.30±0.01,各组P均<0.01)表达水平均有所下降,差异有统计学意义,且改善情况与灵泽片剂量呈正比。结论:灵泽片可能通过负向调控VEGFA/TNF/IL-6信号通路,下调VEGFA/TNF/IL-6蛋白表达水平,调控细胞增殖与凋亡,调节炎症反应,从而发挥对BPH的治疗作用。

摩罗丹浓缩丸通过TNF/PI3K/AKT信号通路治疗慢性萎缩性胃炎

目的探究摩罗丹浓缩丸(Moluodan concentrated pill,MLD)治疗慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)潜在的分子机制。方法利用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、中医药综合数据库(Traditional Chinese Medicine Integrated Database,TCMID)、中医药整合药理学研究平台(Integrative Pharmacologybased Research Platform of Traditional Chinese Medicine,TCMIP)和中药免疫肿瘤学数据库(Traditional Chinese Medicine on Immuno-Oncology,TCMIO)获取MLD的化合物和化合物相关靶点(compound-related target,CRT);DisGeNET和GeneCards数据库获取CAG相关靶点基因(CAG related target gene,CAG-RTG);采用Cytoscape 3.7.2软件构建MLD化合物-CRT网络,并将CRT和CAG-RTG取交集获取MLD相关疾病靶点(MLD-related disease target,MLD-RDT);利用STRING数据库构建MLD-RDT的蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,并进行拓扑结构分析,筛选重要靶点。采用基因本体论(Gene Ontology,GO)富集分析与京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)信号通路富集分析探索MLD治疗CAG的主要分子机制。结果MLD中共有259个活性分子,获得961个靶基因,其中179个可能与CAG相关。PPI网络显示,AKT1、TNF、IL-6、TP53、IL-1β等是MLD治疗CAG的关键靶点。富集分析显示,MLD治疗CAG的关键通路为PI3K-AKT信号通路和TNF信号通路。结论MLD可能通过介导TNF/PI3K/AKT信号通路治疗CAG。

虎纹捕鸟蛛毒素-I对全脑缺血再灌损伤大鼠海马组织中TNF凋亡通路的影响

目的:探讨注射虎纹捕鸟蛛毒素-I(HWTX-I)对全脑缺血模型大鼠神经保护作用的可能分子机制。方法:48只SD大鼠随机分为假手术组、非用药组和用药组,采用改良的Pulsinelli大鼠四血管阻断全脑缺血结合蛛网膜下腔置管模型,应用光镜、免疫组化方法观察各组大鼠海马CA1区锥体细胞Nissl染色形态学变化及海马组织中肿瘤坏死因子α(TNFα)、肿瘤坏死因子受体I(TNFRI)、TNF相关死亡结构域(TRADD)、Fas相关死亡结构域(FADD)、Caspase8等TNF凋亡通路相关因子蛋白表达水平的变化。结果:(1)用药组大鼠锥体神经元排列较整齐,略为疏散分布,而非用药组大鼠锥体神经元排列散乱,层次不完整,稀疏分布;(2)TNFα、TNFRI、TRADD、FADD、Caspase8阳性单位的表达值以非用药组最高,用药组次之,假手术组表达最低。结论:HWTX-I能明显减轻全脑缺血再灌损伤大鼠海马锥体细胞的损伤,并降低大鼠海马组织TNFα、TNFRI、TRADD、FADD、Caspase8蛋白水平表达,表明HWTX-I对全脑缺血再灌损伤大鼠海马神经细胞凋亡具有抑制作用,在一定程度上对全脑缺血再灌损伤有神经细胞保护作用。

TNF-α/NF-κB信号通路在依那西普缓解大鼠类风湿性关节炎中的作用

目的:探讨依那西普(ETN)对胶原诱导大鼠类风湿性关节炎(CIA)的缓解作用及其机制。方法:实验动物分为3组(n=10):(1)对照组;(2)生理盐水治疗组(NS组);(3)(0.5 mg/kg)依那西普治疗组(ETN组)。其中(2)和(3)组的鼠在炎症分值达到两分及以上时随机分组开始治疗。药物采用皮下注射牛Ⅱ型胶原诱导Wistar大鼠建立类风湿性关节炎模型。治疗前和治疗期间每周测量足趾容积和体重,治疗4周后处死,ELISA检测血清TNFα、Ang-1、IL-1β、IL-6、IL-8水平;取足趾部位肌肉提取胞浆和胞核蛋白,Western blot检测NF-κB含量及其亚细胞定位。结果:依那西普治疗组较之生理盐水治疗组能显著缓解类风湿性关节炎症症状、降低TNFα以及下游炎症因子水平(P<0.05);能抑制炎症状况下NF-κB的核内定位增加、胞浆定位减少的状况。结论:依那西普可通过抑制TNFα/NF-κB信号通路缓解大鼠类风湿性关节炎。

苹果多酚对小鼠巨噬细胞TNF信号通路的影响

【目的】通过苹果多酚(apple polyphenols,APs)处理RAW264.7小鼠巨噬细胞,以探讨苹果多酚的生物学作用.【方法】通过MTT试验确定苹果多酚的处理质量浓度,保证细胞的存活率;将RAW264.7巨噬细胞用10μg/mL的苹果多酚处理4h后,提取其总RNA,反转录后通过基因芯片技术检测,比较试验组与对照组TNF信号通路中基因表达量的差异,并进行生物信息学分析和实时荧光定量PCR验证.【结果】苹果多酚质量浓度为10μg/mL时,能够显著(P<0.05)促进RAW264.7巨噬细胞的增殖能力,而质量浓度为5μg/mL时,对巨噬细胞增殖能力的影响并不显著(P>0.05);基因芯片数据共筛选出差异倍数2倍以上的基因为3 149个(≥2-fold,P≤0.5),其中1 540个基因在RAW264.7巨噬细胞中表达上调,1 609个基因表达下调.基因体本轮(GO)分析结果显示:这些差异基因主要与核苷酸结合、DNA修复、细胞周期、细胞骨架与细胞核等相关,涉及的信号通路包括类固醇生物合成、真核细胞核糖体合成、TNF信号通路、抗生素生物合成、多巴胺能神经突触、烟酸和烟酰胺代谢等.但为了进一步研究TNF信号通路,利用qPCR验证该通路上(Map3k8、Mlkl、Pik3ca、Cflar、Atf2、Tnf)6个差异基因的表达,其中,Map3k8、Mlkl、Tnf 3个差异基因被显著(P<0.05)下调,而Pik3ca、Cflar、Atf2 3个基因则下调不显著(P>0.05).【结论】研究苹果多酚对TNF信号通路中差异表达基因的影响,对探索疾病发生发展的机制具有重要意义.

DON通过TNF信号通路诱导驴睾丸支持细胞凋亡的分子机制

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)是一种由镰刀菌产生的霉菌毒素,具有较强的生殖毒性。目前,驴用饲草料中超量存在的DON已成为导致集约化饲养的公驴繁殖性能下降的重要因素。睾丸支持细胞具有营养精子发生,形成血睾屏障,维持睾丸功能等重要作用。为研究DON诱导驴睾丸支持细胞凋亡的分子机制,为驴饲草料DON含量的国家标准提供理论借鉴,减少集约化养驴生产繁殖性能下降,采用10μmol·L^(-1)和30μmol·L^(-1)浓度的DON处理体外培养的驴睾丸支持细胞。连续处理72 h后,通过转录组测序技术(RNA-seq)分析DON对驴睾丸支持细胞的影响途径。结果表明,DON能够通过肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)信号通路诱导驴睾丸支持细胞的凋亡,且具有呈剂量依赖性增加的趋势。同时,DON影响了支持细胞激素分泌,诱导支持细胞的癌向变化。综上所述,DON导致驴睾丸支持细胞凋亡,干扰其激素的分泌,增加支持细胞的癌变风险。

清瘟败毒饮对脓毒症大鼠脾组织TNF信号通路相关基因表达的影响

目的基于TNF信号通路探讨清瘟败毒饮抗脓毒性脾功能损伤的可能机制。方法选择清洁级健康雄性Wistar大鼠45只,随机分为对照组、脓毒症组(A组)、清瘟败毒饮干预组(B组),每组15只。A组大鼠采用盲肠结扎穿孔术(CLP)进行复制脓毒症模型;B组大鼠除CLP外,于术前2天给予中药胃饲2次/d,术后继续中药灌胃;对照组实施除CLP外的开腹、关腹。3组术毕均予5 ml/kg平衡液肌肉注射。术后24 h取脾组织提取总RNA后行RNA-seq对mRNA表达量进行检测,并应用生物信息学方法分析清瘟败毒饮对脓毒症大鼠脾组织TNF信号通路相关基因的表达变化。结果相对于对照组,A、B组大鼠脾组织TNF信号通路相关基因中,同时上调的基因有19个,同时下调的基因有8个,下调转正常的基因1个,正常转上调的基因5个,由上调转为正常的基因7个(Ccl20、Cxcl10、IL-1b、IL6、Bcl3、Mmp9、Sele),正常转为下调的基因13个(ASK1、IKKα、CASP8、ITCH、p38、Drp1、IKKs、p38、Ccl5、Csf1、IL18R1、IL15、Ifi47)。结论清瘟败毒饮可通过调节TNF信号通路相关基因的过度表达,从而对脓毒症大鼠脾功能起到保护作用。

沉默APE-1对肝癌细胞Hep 3B转录组表达谱及TNF信号通路的影响

目的探索沉默APE-1对肝癌细胞Hep 3B转录组表达谱及TNF信号通路的影响。方法基于沉默APE-1表达的肝癌Hep 3B稳定细胞株,进行转录组测序。实验组为APE-1沉默表达的细胞,对照组为转染空白质粒的细胞(n=3)。生物信息学分析肝癌细胞差异表达基因变化及差异基因的GO、KEGG、DO功能富集,蛋白互作网络。针对TNF信号通路关键基因TNFAIP3、MAP2K6,RT-PCR检测其在实验/对照组细胞中表达,收集10对肝癌/癌旁临床样本,免疫组化检测其蛋白表达。基于TCGA数据库中374例肝癌患者数据,分析APE-1和TNFAIP3,APE-1和MAP2K6表达相关性。结果沉默APE-1导致肝癌细胞Hep 3B中84个基因上调,39个基因下调。差异变化前10位的基因为APE-1、CEMIP、MAP2K6、TAF11L11、CNGB1、COL5A3、OTULINL、DNAJC12、FOLR1、ACKR3。RT-PCR验证TNFAIP3、MAP2K6在沉默APE-1的肝癌细胞Hep 3B中低表达。TNFAIP3、MAP2K6在临床肝癌组织样本中高表达,且APE-1和TNFAIP3,APE-1和MAP2K6表达均呈正相关(P<0.001)。结论APE-1是肝癌发生发展中关键的抗肿瘤基因,其可能通过影响TNF信号通路发挥作用。

基于肿瘤坏死因子信号通路相关基因的低级别胶质瘤预后与药物敏感性预测模型的构建与验证

目的基于肿瘤坏死因子(TNF)信号通路相关基因构建低级别胶质瘤预后(LGG)与药物敏感性模型研究。方法从中国脑胶质瘤基因组图谱计划(chinese glioma genome atlas,CGGA)数据库(http://cgga.org.cn/)中获得LGG患者的RNA测序表达数据和临床数据,共纳入420例患者作为训练组,从癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库(https://portal.gdc.cancer.gov/repository)下载RNA测序表达数据和匹配的临床信息,共603例作为验证组。应用LASSO-Cox分析构建预测风险评分,采用ROC曲线评价风险评分效能,通过ESTIMATE以及CIBERSORT等算法分析LGG的免疫环境,Oncopredict分析风险评分与治疗药物敏感性的相关性。最后构建列线图,采用校准曲线评价列线图的性能。结果筛选出7个与LGG预后相关的TNF信号通路相关基因(ACTN4、CARD16、HSPA1B、NKIRAS2、SPPL2A、TNFRSF11A、TRAF5),构建预后评分。Kaplan-Meier生存曲线显示,高风险组患者的总生存期(OS)低于低风险组。风险评分与巨噬细胞M1和调节性T细胞等免疫细胞相关。高风险组的LGG患者表现出更高的替莫唑胺敏感性。多因素Cox回归分析显示风险评分和染色体1p19q联合缺失状态均是LGG患者预后的独立危险因素。结论基于TNF信号通路相关基因构建的预测模型可用于预测LGG患者的预后以及药物敏感性。

银杏叶总黄酮对缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、细胞凋亡率及IPS-1/TRAF6信号通路的影响

目的:探讨银杏叶总黄酮对缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、细胞凋亡率及干扰素β启动子刺激因子1(IPS-1)/肿瘤坏死因子TNF受体相关因子6(TRAF6)信号通路的影响。方法:设立大鼠星型胶质细胞对照组(培养环境为20%O2、5%CO2、75%N2)、缺氧组(培养环境为1%O2、5%CO2、94%N2)、银杏叶总黄酮低、中、高剂量组(终浓度100,200,400μg·ml^-1)。培养结束后,测定各组细胞活力、凋亡水平、细胞周期、IPS-1、TRAF6 mRNA和蛋白水平。结果:与对照组比较,缺氧组光密度(OD)值、存活率水平显著降低(P<0.05),凋亡率、G1期水平、IPS-1、TRAF6 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05);与缺氧组比较,银杏叶总黄酮各剂量组OD值、存活率水平显著升高(P<0.05),凋亡率、G1期水平、IPS-1、TRAF6 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);且各指标变化与银杏叶总黄酮浓度呈正相关(P<0.05)。结论:银杏叶总黄酮能提高缺氧条件下大鼠星型胶质细胞活力、抑制其凋亡;其机制与银杏叶总黄酮抑制星型胶质细胞IPS-1、TRAF6 mRNA和蛋白表达水平有关。

基于网络药理学探讨右归丸干预强直性脊柱炎作用机制

目的基于网络药理学的研究方法探讨右归丸干预强直性脊柱炎的作用机制。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索并筛选出右归丸中药组成的有效化学成分及作用靶点信息,利用GeneCards及OMIM数据库获得强直性脊柱炎的靶点基因,通过VENNY 2.1.0获得右归丸组成中药与强直性脊柱炎的交集基因,借助String在线平台与Cytoscape 3.7.2软件获得PPI网络,在DAVID数据库完成GO及KEGG通路富集分析。结果共获得药物有效成分79个,有效基因靶点500个,疾病靶点基因767个,交集基因98个,PPI网络分析得到关键靶点基因是IL1B、IL6和TNF等。GO功能富集分析得到GOBP条目535条、GOMF条目88条和GOCC条目53条。KEGG富集分析得到121条通路,主要信号通路为IL-17、HIF-1和TNF等。结论该研究基于网络药理学理论,系统地分析了右归丸的中药组成可以通过多成分、多靶点、多通路等干预强直性脊柱炎的作用机制,进而起到调节免疫反应、调控炎症因子、保护软骨、延缓骨破坏等治疗作用。

基于TLR4/TNF⁃α/MMP⁃9信号通路研究马钱子水提物改善类风湿关节炎大鼠疼痛的作用机制

基于Toll样受体4(Toll⁃like receptors 4,TLR4)/肿瘤坏死因子⁃α(tumor necrosis factor⁃α,TNF⁃α)/基质金属蛋白酶⁃9(matrix metalloproteinase⁃9,MMP⁃9)信号通路探索马钱子水提物(aqueous extract of Strychni Semen,SA)改善类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠疼痛的作用机制。首先通过TCMSP、TCMID、ETCM等数据库以及相关文献查找马钱子的主要化学成分;借助TargetNet和SwissTargetPrediction等数据库查找马钱子化学成分的主要作用靶点;通过GeneCards、OMIM和TTD等数据库获取RA和疼痛的主要靶点;Venny 2.1.0平台获取三者的交集靶点;利用STRING平台和Cytoscape 3.6.1软件构建蛋白互作网络。随后利用AutoDock Vina软件进行分子对接验证。最后建立Ⅱ型胶原诱导型关节炎(typeⅡcollagen⁃induced arthritis,CIA)大鼠模型,up⁃down法和丙酮法检测大鼠机械痛敏及冷痛敏反应,评价SA对CIA大鼠的镇痛作用;通过苏木素⁃伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)染色评价CIA大鼠关节组织病理学变化。采用免疫组织化学法、蛋白免疫印迹法(Western blot)检测关键靶点蛋白的表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应法(real⁃time PCR)检测关键靶点mRNA的表达水平。网络预测结果表明,马钱子可能通过作用于TLR4/TNF⁃α/MMP⁃9信号通路发挥镇痛作用。进一步分子对接结果显示,SA主要活性成分马钱子碱与TLR4、TNF⁃α、MMP⁃9蛋白受体均有较强结合能力。实验验证结果显示,SA对CIA大鼠的机械刺激痛敏及丙酮刺激冷痛敏反应均具有较好的改善作用(P<0.05,P<0.01),且可显著降低CIA大鼠关节组织病理学评分(P<0.01);此外,SA中、高剂量可显著降低TNF⁃α、TLR4、MMP⁃9蛋白和mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01)。综上,SA对CIA大鼠机械刺激痛敏、丙酮刺激冷痛敏反应及关节组织病理改变均具有较好的改善作用,其作用机制可能与抑制TLR4/TNF⁃α/MMP⁃9信号通路过度活化有关。

基于网络药理学探讨绿原酸治疗特异性皮炎的作用机制

目的结合网络药理学、分子对接技术和实验验证,探讨绿原酸(chlorogenic acid,CGA)治疗特异性皮炎(atopic dermatitis,AD)的作用靶点及潜在机制。方法利用STITCH、SwissTargetPrediction和PharmMapper数据库预测和筛选出CGA的相应作用靶点。从DisGeNET、OMIM和GendCards数据库中收集并筛选出与AD相应的靶点。采用Venny 2.1.0在线工具获取CGA和AD的交集靶点。将交集靶点通过STRING 11.5数据库构建蛋白质相互作用(PPI)网络图,并将PPI网络图通过Cytoscape3.10.0软件进行可视化分析,利用CytoNCA插件筛选出核心靶点。采用DAVID平台进行GO和KEGG富集分析,探讨CGA治疗AD的关键途经,并用分子对接评估CGA与核心靶点结合亲和力。建立2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导小鼠构建AD模型,通过皮炎评分、脾脏指数、病理染色和RT-qPCR验证网络药理学预测的结果。结果共筛选出了CGA的241个靶点和AD的1450个靶点,将两者做交集,共获得69个交集靶点。其中,通过PPI网络拓扑分析确定了13个核心靶点,关键靶点包括MMP9、HSP90AA1、HRAS、NOS2和RHOA,分子对接表明CGA与这些核心靶点结合较强。KEGG通路富集分析表明,TNF信号通路、脂质和动脉粥样硬化、VEGF信号通路等交集靶点均显著富集。体内实验研究结果显示,与模型组相比,CGA能有效降低小鼠表皮厚度、皮炎评分以及脾脏指数。RT-qPCR结果显示,CGA可明显降低MMP9和HSP90AA1 mRNA的表达,减少TNF信号通路相关基因TNF-α、TNFR1和AKT1的表达。结论CGA可通过调节TNF信号通路来有效改善AD症状,为后续的研究开发提供参考依据。

基于网络药理学探究补肺活血胶囊治疗肺纤维化的潜在作用机制

为探究补肺活血胶囊抗肺纤维化的潜在作用机制与作用靶点。本研究首先利用TCMSP、SwissTargetPrediction及SEA数据库筛选出BHC活性成分及其潜在作用靶点;通过GeneCards Suite、CTD、TTD数据库检索与PF疾病相关靶点;将疾病相关靶点映射到化合物潜在靶点中,得到公共靶点,并导入STRING平台,借助Cytoscape软件进行拓扑学分析,获取关键靶点;通过DAVID平台进行KEGG富集分析。为验证数据,通过Masson染色及胸部CT明确肺组织胶原沉积和影像学情况,借助Western blot及q-PCR实验明确相关靶点蛋白表达及基因转录情况。共获取BHC潜在作用靶点206个,PF相关靶点487个,公共靶点57个;共筛选出包括TNF-α、MMP9和p38在内的15个关键靶点;富集分析提示,TNF信号通路为关键通路。动物实验发现,BHC能够缓解肺组织胶原沉积,减少小鼠肺组织近胸膜处纤维网格影,降低PF小鼠肺组织内MMP9、TNF及p38蛋白及mRNA含量(P<0.01)。上述研究结果揭示BHC通过多成分-多靶点-多途径共同调控PF的作用机制,为BHC的临床应用提供理论基础和科学依据。

基于网络药理学探讨桂枝加葛根汤防治血脂异常的机制研究及实验验证

目的通过网络药理学技术预测桂枝加葛根汤防治血脂异常可能作用靶点和机制,并进行动物实验验证。方法通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)或中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM)检索葛根,桂枝,白芍,生姜,大枣,甘草的化学组分,活性成分的筛选标准以口服生物利用度(OB)>30%,化合物类药性(DL)>0.18或Score cutoff≥20。已筛选出的靶点名称应用数据库Uniprot对其标准化;同时在Genecards和OMIM两个数据库中检索血脂异常相关基因,并将上述预测靶基因合并作为疾病相关基因数据。采用Draw Venn Diagram在线程序将桂枝加葛根汤和血脂异常的靶基因取交集,获得桂枝加葛根汤和血脂异常的共同靶点。采用Cytoscape3.7.1绘制桂枝加葛根汤药物成分和血脂异常疾病靶点的网络图。在R3.6.0软件中安装程集包ggplot2、colorspace、clusterProfiler、pathview、stringi、DOSE等进行GO富集分析和KEGG富集分析。并进一步采用动物实验进行验证,选取SPF级SD雄性大鼠,运用高脂饲料喂养建立高脂血症模型,桂枝加葛根汤干预30天后检测各组大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C水平,qRT-PCR法对TNF信号通路上的关键分子IL-6、IL-1β、PTGS2、MAPK1、MAPK3、MAPK8进行验证。结果预测出桂枝加葛根汤可能作用靶点222个,动脉粥样硬化疾病相关基因1250个,桂枝加葛根汤和血脂异常的共同靶点119个。GO功能富集分析结果表明分子功能相关条目114个,细胞组分相关条目70个,生物过程相关的条目2143个。同时在KEGG通路富集到165条信号通路。然后对三组间大鼠的血脂水平进行比较,与正常组相比,模型组大鼠血清中HDL-C水平显著降低(P<0.01),LDL-C、TG、TC水平显著升高(P<0.01),可以证明造模成功;与模型组相比,桂枝加葛根汤组血清中HDL-C水平显著升高(P<0.05),LDL-C、TG、TC水平显著降低(P<0.01,P<0.05),说明桂枝加葛根汤可以改善大鼠血脂水平。与正常组比较,模型组肝脏组织PTGS2、MAPK1、MAPK3、MAPK8、IL-6、IL-1βmRNA表达均显著上升(P<0.01);与模型组比较,桂枝加葛根汤组肝脏组织PTGS2、MAPK1、MAPK3、MAPK8、IL-6、IL-1βmRNA表达上均显著降低(P<0.01,P<0.05)。结论桂枝加葛根汤通过多靶点、多通路治疗血脂异常,为进一步深入探讨其分子机制奠定基础,拓宽经方桂枝加葛根汤临床应用范围,为后续临床治疗血脂异常提供新的思路。

二仙汤防治骨质疏松症的网络药理学研究

目的通过网络药理学分析二仙汤防治骨质疏松症(osteoporosis,OP)的关键靶点,探讨二仙汤防治OP的可能机制及信号通路。方法检索中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP),筛选二仙汤的入血活性成分并预测其作用靶点;利用基因表达数据库(GEO)获取GSE56116基因芯片原始数据,分析二仙汤的治疗靶点;从疾病相关数据库检索已知OP致病基因;通过STRING和Cytoscape软件映射获得二仙汤治疗OP的关键靶点,建立关键靶点的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并进行KEGG和GO富集分析揭示其可能的作用机制。结果通过检索TCMSP获得符合筛选标准的二仙汤活性成分84个,21个活性成分预测出145个作用靶点;通过R语言对基因芯片进行分析筛选出84个可能致病靶点,通过疾病相关数据平台获得691个OP相关致病靶点,利用STRING和Cytoscape构建PPI网络筛选出40个关键作用靶点和9个核心作用靶点。KEGG和GO分析结果显示,二仙汤治疗OP的关键靶点主要富集在RNA聚合酶II启动子对转录的正向调节、一氧化氮合酶等生物学进程,主要富集的信号通路为TNF信号通路、低氧诱导因子1信号通路和雌激素信号通路等。结论通过网络药理学方法阐释二仙汤可能通过TNF信号通路和HIF-1信号通路治疗OP,本研究为揭开中药复方治疗疾病的作用机制提供了科学的方法。

肿瘤坏死因子受体2突变载体对巨噬细胞炎症反应的影响

目的探讨肿瘤坏死因子受体超家族1B(TNFRSF1B)196位基因多态性(T突变为G)与巨噬细胞TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应的相关性。方法运用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA6.0-TNFR2196Met和pcDNA6.0-TNFR2196Arg,采用脂质体转染法分别转染至巨噬细胞中,转染48 h后使用杀稻瘟菌素抗性筛选4周,建立稳定转染细胞系。将酶消化法培养的巨噬细胞分为四组:空白对照组、pcDNA6.0空质粒组、pcDNA6.0-TNFR2196Met组及pcDNA6.0-TNFR2196Arg组。采用酶切及测序法鉴定重组质粒,RT-PCR检测肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)、cIAP1、cIAP2mRNA的变化;Western blot检测p-JNK、cIAP1、cIAP2、TNFR2及核因子κB(NF-κB)的蛋白表达;ELISA检测细胞上清液可溶性TNFR2(sTNFR2)、白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平。结果酶切测序结果显示成功构建了TNFR2基因196Met和196Arg表达载体。转染到巨噬细胞后,与空白对照组和pcDNA6.0空质粒组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组、pcDNA6.0-TNFR2196Met组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和p-JNK的表达增高(P<0.05);与pcDNA6.0-TNFR2196Met组比较,pcDNA6.0-TNFR2196Arg组TNFR2、cIAP1、cIAP2、IL-1β、IL-6和pJNK的表达明显降低(P<0.05),TNFR2196Arg介导的NF-κB活性显著降低。结论成功构建稳定表达TNFR2196Met、TNFR2196Arg载体,TNFR2突变通过TNF/TNFR2信号通路介导炎症反应,可能是参与慢性炎症性疾病的作用机制。

基于网络药理学的大血藤抗炎作用机制研究

目的运用网络药理学方法探讨大血藤抗炎的作用机制。方法筛选大血藤的活性成分,构建大血藤活性成分-作用靶点网络和蛋白相互作用网络,对靶点涉及的生物功能和通路进行分析。结果筛选得到大血藤18个活性成分,网络分析表明大血藤活性成分涉及芳烃受体、半胱氨酸蛋白酶-1、表皮生长因子受体、糖皮质激素受体和多个与NF-κB信号通路相关的蛋白靶点等54个,通过调节TNF信号通路、NOD样受体信号通路、凋亡、MAPK信号通路、Toll样受体信号通路等信号通路来发挥其抗炎作用。结论研究体现了大血藤多成分-多靶点-多途径的作用特点,为进一步开展大血藤抗炎作用机制的研究提供了新思路和新方向。

桂枝茯苓丸抗卵巢癌作用机制的网络药理学研究

目的基于网络药理学方法探讨桂枝茯苓丸抗卵巢癌的作用机制。方法通过文献检索获取桂枝茯苓丸中的主要活性成分;利用TCMSP、SwissTarget Prediction数据平台筛选桂枝茯苓丸靶基因集合,并通过STITCH数据库构建桂枝茯苓丸活性成分-靶点关联网络;利用GeneCards、DisGeNET、OpenTargets、STRING数据库构建"桂枝茯苓丸靶基因-卵巢癌基因"互作网络,预测和筛选桂枝茯苓丸抗卵巢癌靶基因;利用ClueGO软件对靶基因进行GO(Gene Ontology)功能分析,通过DAVID v6.8平台对关键靶点进行KEGG通路分析。结果选择了桂枝茯苓丸中的肉桂酸、桂皮醛、苦杏仁苷、丹皮酚、芍药苷、茯苓酸等9种活性成分作为研究对象;共筛选出TP53、CASP3、BAX、BCL2、PTEN、HSP90AB1、TNF等21个桂枝茯苓丸抗卵巢癌靶基因;桂枝茯苓丸可能通过调控TNF信号通路、p53信号通路、PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路、HIF-1信号通路、VEGFR信号通路及雌性激素通路等发挥作用。结论桂枝茯苓丸可能通过调控多种抗卵巢癌基因及与肿瘤增殖、凋亡、肿瘤血管相关的多条信号通路发挥抗卵巢癌作用,具有"弱抑制-多靶点"抗卵巢癌药理学效应。