IL-12诱导T细胞凋亡对Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响

目的 :探讨白介素 12 (IL - 12 )诱导T细胞凋亡过程中对T细胞的Fas/FasL和TNFR/TNFα表达的影响作用。方法 :dUTP缺口末端标记法和AnnexinV法 ;用FITC标记TNFR1,PE标记CD95 ,生物素标记FasL ,流式细胞仪检测 3种T细胞 (人淋巴瘤T细胞株HTB176、人急性白血病T细胞株TIB15 2和正常人T细胞 )的百分率 ;用半定量PCR的方法检测FasL和TNFα的mRNA的表达作用。结果 :HTB176和TIB15 2的细胞在IL - 12处理 1h ,生物素标记FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加 ,2 4h达到高峰 ,但正常T细胞在 2 4h后才有反应 ;正常T细胞经IL -12处理 1h内细胞FasL百分率和FasL的mRNA表达率开始增加 ,在以后的试验期 6、12、2 4h始终保持恒定水平 ;但 3种T细胞在IL - 12作用下不促进细胞CD95和TNFR1及TNFα的表达。结论 :IL - 12诱导T细胞凋亡中有许多调节因子的协调作用 。

PKCα在人系膜细胞IP_3Rl蛋白表达中的调控作用

目的探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对人肾小球系膜细胞(HMCs)IP3R1蛋白和mRNA表达的影响及PKC在此信号通路中的作用,以期为肝肾综合征(HRS)肾小球滤过虑下降的发生机制和防治思路提供理论依据。方法用实时定量PCR和免疫印记法检测IP3Rl mRNA和蛋白表达的情况,并分别用PMA耗竭内源性蛋白激酶C(PKC),PKCα特异性抑制剂Safingol和PKCδ特异性抑制剂Rottlerin及HA-DN-PKCα质粒转染干预上述诱导实验。同时,用免疫印记法检测TNFα对PKCα和p-PKCα表达的影响。用非放射性测活检测TNFα对PKCα的活化及抑制剂对PKCα活化的影响。结果 TNFα作用HMCs后,IP3R1蛋白和mRNA表达均明显增加。PMA,PKCα抑制剂Safin-gol,HA-DN-PKCα质粒转染均能明显阻断TNFα诱导的IP3R1蛋白的上调,而PKCδ抑制剂Rottlerin无明显阻断作用。TNFα刺激HMCs,各不同时间组总PKCα蛋白表达无明显差异,而TNFα刺激8h p-PKCα蛋白表达明显增加。此外,非放射性测活表明TNFα活化PKCα,Safingol可阻断PKCα的活化。结论 TNFα能上调HMCs中IP3R1蛋白及IP3RlmRNA的表达。活化的PKCα在TNFα上调IP3Rl的表达中起重要作用。