TNFR1/RANK嵌合体的构建及其在研究破骨细胞分化中的意义

【目的】构建肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)膜外部分和核转录因子NF-κB受体激动剂(RANK)跨膜及膜内部分相结合的嵌合体,探讨其在破骨细胞(OC)分化中的意义。【方法】克隆TNFR1/RANK嵌合体的cDNA,用plat E将其包装成逆转录病毒,通过感染将这种逆转录病毒转染到敲除TNFR1/R2基因的小鼠(TNFR1-/R2-)骨髓巨噬细胞(BMM)中;用TNFα刺激,分别观察OC的分化及骨的重吸收能力;用Western Blot方法证实TNFR1/RANK是通过NF-κB、JNK、P38和ERK蛋白的磷酸化来调节OC的分化和功能。【结果】在TNFα刺激下,BMM能分化成OC,而且分化出的OC能明显地导致骨质破坏。TNFα刺激BMM 5min后磷酸化的NF-κB、JNK、P38和ERK蛋白的表达明显增强。【结论】TNFR1/RANK嵌合体具有完整的分子结构和生物功能,可作为研究RANK结构、功能及其信号途径的一个简便、有效的生物工具。

膝关节置换术后患者血清RANKL、sVCAM-1、ESR表达水平及其与预后的相关性

目的 探讨膝关节置换术后患者血清核因子-κB受体活化因子配基(RANKL)、可溶性血管细胞黏附分子-1(sVCAM-1)、红细胞沉降率(ESR)的表达意义及其与预后的关系。方法 回顾性分析2020年1月至2022年9月安阳市人民医院收治的118例膝关节置换手术患者的临床资料,根据术后6个月Lysholm评分将患者分为预后不良组(总分<70分,27例)和预后良好组(总分≥70分,91例)。比较两组术后1、3个月血清RANKL、sVCAM-1、ESR表达水平,分析其与Lysholm评分的相关性,评估上述血清学指标联合检测对患者术后预后不良的预测价值。结果 术后1、3个月预后不良组血清RANKL、sVCAM-1、ESR水平高于预后良好组(P <0.05),术后1、3个月血清RANKL、sVCAM-1、ESR水平与Lysholm评分呈负相关(P <0.05),联合预测患者术后预后不良的曲线下面积(AUC)优于各血清指标单独预测(P <0.05)。结论 血清RANKL、sVCAM-1、ESR水平升高可提示膝关节置换术患者预后不良风险的增加,联合检测可作为预测预后不良、判断病情转归的参考依据。

REG3α、sST2、TNFR1在儿童异基因造血干细胞移植术后aGVHD危险分层及预后评估中的价值

目的:探讨外周血中REG3α、sST2、TNFR1对儿童异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)术后aGVHD危险分层及预后评估的价值。方法:选取2020年1月至2022年3月在郑州大学第一附属医院儿科行allo-HSCT后发生aGVHD的70例患儿作为研究对象,将并发Ⅰ-Ⅱ度aGVHD的50例患儿作为轻度aGVHD组,并发Ⅲ-Ⅳ度aGVHD的20例患儿作为重度aGVHD组,选取同期本院健康体检儿童30例作为对照组,通过Luminex平台检测aGVHD发生时REG3α、sST2、TNFR1蛋白表达水平采用单因素方差分析比较3组间差异;根据aGVHD治疗28 d内病情转归情况将患儿分为预后良好组58例,预后不良组12例,利用ROC曲线分析REG3α、sST2、TNFR1对aGVHD患儿预后的评估价值。结果:与对照组相比,轻度aGVHD组、重度aGVHD组外周血中REG3α、sST2、TNFR1水平均显著升高(P<0.05),且重度aGVHD组显著高于轻度aGVHD组(P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组aGVHD患儿外周血中REG3α、sST2、TNFR1水平均显著升高(t=9.27,3.33 2.97;P<0.01);ROC曲线分析结果表明,REG3α、sST2和TNFR1联合检测评估aGVHD患儿预后的曲线下面积(AUC)、灵敏性、特异性均高于各项指标单独检测及各指标两两组合检测。结论:REG3α、sST2、TNFR1表达水平与aGVHD严重程度相关;REG3α、sST2和TNFR1联合对于aGVHD患儿预后评估有较高的临床价值,有望为临床上评估aGVHD患儿预后提供可靠参考。

人参皂苷Rg1通过TNF-α/TNFR1/RIPKs通路调控急性肾损伤致急性肺损伤的保护机制研究

目的探讨人参皂苷Rg1对急性肾损伤致急性肺损伤的保护作用及其调控机制。方法将60只雄性昆明小鼠随机分成4组,每组15只:A组(假手术组),B组(模型组),C组(人参皂苷Rg1组),D组(Nec-1对照组)。制备急性肾损伤模型,24 h后检测血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量,测量肺组织湿/干重比,应用HE染色观察肺组织病理改变,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-8(IL-8)等细胞因子表达,免疫组化和免疫印迹法检测肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)、肿瘤坏死因子受体蛋白激酶(receptor interacting protein kinase,RIPK)表达。结果与A组相比,B组Scr、BUN含量明显升高,C组、D组含量较B组均明显降低(P<0.01);与A组相比,B组肺组织湿/干重比明显升高,C、D组较B组均明显降低(P<0.01);A组为正常肺泡结构,B组部分肺泡腔塌陷,部分细胞变性坏死,可见明显的炎细胞浸润。与B组相比,C组、D组肺部损伤程度减轻;与A组比较,B组血清中细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6,IL-8水平显著增高,C、D组较B组均明显降低(P<0.01);B组TNFR1、RIPK1、RIPK3蛋白含量明显高于A组,C、D组较B组均明显降低(P<0.01)。结论人参皂苷Rg1可改善急性肾损伤所诱导的急性肺损伤,其机制可能与抑制TNF-α/TNFR1/RIPKs信号通路有关。

全脑缺血再灌注后Fas、TNFR1蛋白的表达与细胞凋亡的关系及Bcl-2过度表达对其的影响

目的通过观察全脑缺血再灌注后大鼠海马回Fas、TNFR1蛋白的表达与细胞凋亡及Bcl-2过度表达时对其表达的影响,探讨全脑缺血再灌注后Bcl-2过度表达对Fas、TNFR1介导凋亡的影响及可能机制。方法健康雄性SD大鼠90只,随机分成3组:假手术组(PO组)、缺血再灌注组(IR组)和Bcl-2过度表达组(BT组)。采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血再灌注模型,应用HE染色、免疫组化和TUNEL方法检测Bcl-2、Fas和TNFR1在CA1及CA3区的表达及细胞凋亡。结果 HE染色显示:IR组CA1区缺血48 h后神经元数目减少,排列紊乱,间质水肿;CA3区少数细胞结构不清。BT组变化不明显。免疫组化染色显示:Fas在IR组中CA1区6 h达高峰,BT组强度弱于IR组(P<0.05)。TNFR1在IR组CA1区24 h达到高峰,BT组强度弱于IR组(P<0.05)。两者PO组CA1、CA3区表达为阴性。细胞凋亡检测:IR组在缺血再灌注后6h,CA1、CA3区凋亡细胞开始增加,24～48 h为高峰。BT组弱于IR组(P<0.05)。结论 Fas和TNFR1蛋白在全脑缺血再灌注后海马CA1区及CA3区都有表达,只是表达强弱及细胞分布不同,提示死亡受体参与了全脑缺血再灌注损伤。Bcl-2过度表达能减弱Fas和TNFR1蛋白在全脑缺血再灌注后的表达,明显减少凋亡细胞数,提示Bcl-2过度表达对全脑缺血再灌注损伤有保护作用。

伸筋草对类风湿性关节炎大鼠踝关节滑膜组织ICAM-1、MMP-3及OPG/RANKL/RANK信号通路的影响

目的:探讨伸筋草对类风湿性关节炎大鼠踝关节滑膜组织细胞间黏附分子-1、基质金属蛋白酶-3及OPG/RANKL/RANK信号通路的影响。方法:弗氏完全佐剂皮下注射复制大鼠类风湿性关节炎模型。根据模型复制情况将Wistar雄性大鼠按照体质量区组化随机分为6组,即模型组、伸筋草高、中、低给药组、阳性对照组和正常对照组,每组10只。各给药组每日灌胃给药相应剂量的伸筋草提取物浓缩液(1.6 g/kg、0.8 g/kg、0.4 g/kg),阳性对照组给予雷公藤多苷溶液(5.4 mg/kg),正常对照组、模型组大鼠灌胃等体积的生理盐水,连续3周。光镜下观察大鼠踝关节滑膜组织病理变化,采用免疫组化法测定各组大鼠滑膜组织ICAM-1和MMP-3的表达,Western Blot法测定滑膜组织中OPG、RANKL蛋白的表达,并推算RANKL/OPG的比值。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠滑膜组织有明显的淋巴细胞及单核细胞等炎性浸润,滑膜组织细胞排列不规则,增生肿胀明显,ICAM-1、MMP-3水平和OPG、RANKL蛋白表达以及RANKL/OPG比值明显增加(P<0.05);与模型相比,伸筋草高、中、低剂量组大鼠滑膜组织增生和炎性细胞浸润均有改善的趋势,ICAM-1、MMP-3水平、OPG、RANKL蛋白表达以及RANKL/OPG比值也随剂量的增加而降低。高剂量组改善效果最为明显,中剂量组次之,低剂量组虽有改善的趋势,但无统计学差异(P>0.05)。结论:伸筋草可以降低大鼠踝关节滑膜组织炎性因子的水平,并通过调控OPG/RANKL/RANK信号通路来发挥治疗RA的作用。

眼针对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑皮层组织TNFR1表达的影响

目的:观察眼针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型大鼠脑皮层组织TNFR1表达的变化,探讨眼针治疗CIRI的作用机制。方法:健康雄性SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机分为正常组、假手术组、模型组和眼针组。模型组和眼针组采用改良的线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MACO)再灌注动物模型。分别以免疫组化和RT-PCR方法观察缺血侧脑皮层TNF-α、TNFR1蛋白表达,TNFR1 mRNA表达的变化。结果:与正常组及假手术组比较,模型组大鼠缺血侧脑皮层TNF-α、TNFR1的蛋白及基因均显示出明显的高表达(P<0.01),而眼针组同模型组相比,TNF-α、TNFR1表达均下调(P<0.05)。结论:眼针抑制CIRI大鼠TNF-α、TNFR1的高表达,可能是眼针治疗CIRI的作用机制之一。

解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响

目的:研究解毒化瘀Ⅱ方对暴发性肝衰竭大鼠TNF-α/TNFR1及Fas/FasL表达的影响。方法:SPF级Wistar大鼠84只,随机分为空白组、模型组、解毒化瘀Ⅱ方低、中、高剂量组、安宫牛黄丸组、乳果糖组,以硫代乙酰胺(TAA)皮下注射复制急性肝衰竭大鼠模型,造模前3d开始灌胃给药,2次/d,间隔12h,共给药5.5d;采用ELISA法检测各组大鼠血清中TNF-α含量,Western blot法测定肝细胞TNFR1的表达量,免疫组化法检测Fas/FasL在各组肝细胞中分布的趋势及表达强度。结果:与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α含量升高,肝细胞TNFR1、Fas、FasL的表达均显著增强,差异有统计学意义(P<0.01),解毒化瘀Ⅱ方能降低血清TNF-α的含量,抑制肝细胞TNFR1、Fas/FasL的表达,呈现量效关系,并以解毒化瘀Ⅱ方高剂量组作用效果最佳。结论:解毒化瘀Ⅱ方抗肝衰竭的作用机制可能是通过干预TNF-α/TNFR1及Fas/FasL的表达,阻止死亡信号的转导,抑制肝细胞凋亡。

马桑内酯致痫大鼠海马TNF-α和TNFR1免疫反应的变化

目的 研究TNF α与癫痫发病的关系 ,进一步探讨癫痫发病机理及为癫痫的临床治疗提供依据。方法 将SD大鼠随机分为空白对照组、生理盐水对照组和马桑内酯 (CL)致痫组 ,侧脑室给药后观察记录两组大鼠行为变化 ,存活 2h灌注取材切片 ,用SABC法进行免疫组织化学染色及图像分析观察大鼠海马内TNF α和TNFR1表达的变化。结果 CL致痫组均出现Ⅲ～Ⅴ级痫性发作 ,对照组无发作 ;CL致痫组TNF α与TNFR1在大鼠海马各区阳性细胞数较对照组增多 ,表达较对照组增强 ,其中TNF α在海马CA1、CA3区锥体细胞层 ,TNFR1在海马CA3区锥体细胞层表达显著增强 (均P <0 0 1)。结论 TNF α在癫痫发病中起促进作用 ,其作用可能是通过TNFR1介导的。

TNFR1在子宫内膜异位症和子宫腺肌病表达的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)在子宫内膜异位症(内异症)和子宫腺肌病(腺肌病)的表达及在其发病机制中的作用。方法:采用免疫组化SABC法检测33例内异位症患者(内异症组)和40例腺肌病患者(腺肌病组)在位及异位子宫内膜TNFR1的表达,并与20例非内异症(对照组)在位内膜进行比较。结果:内异症组和腺肌病组异位内膜TNFR1的表达水平显著低于其在位内膜和对照组(P<0.05);TNFR1在内异症Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期间无显著差异(P>0.05),与内异症r-AFS临床分期亦无直线相关关系(P>0.05);TNFR1在分泌期的表达为内异症、腺肌病异位内膜<其在位内膜<对照组内膜(P<0.05)。结论:异位内膜TNFR1的低表达可能在内异症和腺肌病的发生中起重要作用。TNFR1与内异症严重程度无关。

人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血大鼠PARP-1和TNFR1表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对局灶性脑缺血大脑皮质多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)-1和肿瘤坏死因子受体(TNFR)1表达的影响。方法 90只健康SD大鼠随机均分为假手术组,单纯缺血组,人参皂苷Rg1低、中、高组,阳性对照组。于术前5 d至取材当日,假手术组与单纯缺血组分别腹腔注射生理盐水45 mg/kg,人参皂苷Rg1分别给10、20、40 mg/kg,阳性对照组尼莫地平1 mg/kg。采用大脑中动脉栓塞法制备局灶性脑缺血模型,神经功能缺损评分和TTC染色验证模型是否成功;采用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测大脑皮质缺血后PARP-1、TNFR1的表达。结果单纯缺血组较假手术组可见明显神经功能缺陷症状及大面积苍白色梗死区域;人参皂苷Rg1各组和阳性对照组神经功能评分和脑梗死体积百分比高于假手术组,低于单纯缺血组(P<0.05);人参皂苷Rg1各组与阳性对照组差异无统计学意义。人参皂苷Rg1低组每高倍视野PARP-1、TNFR1阳性细胞数高于假手术组和阳性对照组;中、高组高于假手术组,低于单纯缺血组(P<0.05)。单纯缺血组皮质PARP-1、TNFR1较假手术组阳性表达条带显著增强;人参皂苷Rg1低组PARP-1、TNFR1阳性表达高于假手术组;中组高于假手术组,低于单纯缺血组;高组低于单纯缺血组(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用,其机制可能与下调大脑组织PARP-1、TNFR1的表达,对抗脑细胞坏死有关。

TNFR_1及Bcl-2在病理性瘢痕组织细胞凋亡中的表达及意义

目的 研究TNFR1和Bcl- 2在病理性瘢痕组织细胞中的表达及其对成纤维细胞凋亡与增殖的影响。方法 取手术切除的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩患者各 15例标本 ,正常皮肤 12例标本 ,应用免疫组织化学方法进行检测 ,分析TNFR1和Bcl- 2的表达及分布规律。结果 TNFR1在正常皮肤、增生性瘢痕及瘢痕疙瘩中成纤维细胞的表达阳性率分别为 10 .70 %、3.2 3%和 7.72 % ,TNFR1在正常皮肤组中的阳性表达率明显高于增生性瘢痕组和瘢痕疙瘩组 ,而瘢痕疙瘩组阳性表达率却又明显高于增生性瘢痕组 ,三组间阳性表达率相互比较差异均有显著意义 (P <0 .0 1) ;Bcl- 2在增生性瘢痕组 (19.35 % )和瘢痕疙瘩组 (48.33% )的阳性表达率明显高于正常皮肤组 (4.0 7% ) ,三组间阳性表达率相互比较差异亦均有显著意义 (P <0 .0 1)。结论 Bcl- 2的持续过表达可能是瘢痕疙瘩呈瘤样增生的原因之一。介导的死亡受体凋亡通路受阻及TNFR1介导核转录因子NF -kB的激活 ,表明TNFR1对成纤维细胞的增殖与凋亡具有双重的调节作用。

hFIST/HIPK2在Fas/FasL和TNF/TNFR1介导的凋亡信号转导途径中的作用

目的 探讨hFIST/HIPK2在Fas/FasL介导的凋亡信号转导途经中的作用。方法 应用瞬时转染技术 ,将全长序列hFIST/HIPK2、Fas(CD95 /Apo 1)、TNFR1、FADD、TRADD、caspase 8cDNAs转染入 2 93T细胞中 ,应用免疫沉淀技术、WesternBlotting技术检测hFIST/HIPK2与以上凋亡相关蛋白的相互作用。结果 hFIST/HIPK2与Fas、TNFR1、FADD、caspase 8无相互作用 ,与TRADD有相互作用 ,且Fas、TNFR1竞争性抑制这种相互作用。在有FasL存在及无FasL存在时 ,Fas均可与FADD相互作用 ;Fas与TRADD有相互作用。结论 hFIST/HIPK2与TRADD有相互作用 ,Fas与TRADD有相互作用 ,hFIST/HIPK2可能间接参与了Fas/FasL。

黄芪皂苷Ⅲ抑制小鼠动脉平滑肌细胞TNFR1介导信号转导

目的研究黄芪皂苷Ⅲ(astragaloside Ⅲ,ASⅢ)对小鼠动脉平滑肌细胞(arterial smooth muscle cells,ASMCs)中I型TNF-α受体(TNF-αreceptor type 1,TNFR1)介导信号通路的抑制作用,为中药黄芪的抗炎作用和抗动脉粥样硬化作用提供证据。方法以不同浓度ASⅢ预处理ASMCs,之后以TNF-α诱导细胞。采用WST-1实验检测细胞活力变化;采用实时定量RT-PCR技术检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized LDL receptor-1,Lox-1)和ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)m RNA表达变化;采用Western Blot方法检测ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达变化,并检测ASⅢ对转录因子NF-κB(nuclear factor-κB)上游抑制蛋白IκBα(NF-κB inhibitor-α)、以及对信号分子AKT、细胞外受体活化激酶(extracellular receptor-activated kinases,ERKs)和p38磷酸化的影响。结果 (1)ASⅢ在30 n M^10μM范围内不抑制细胞活力;(2)ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α对ICAM-1、Lox-1和ABCA1 m RNA表达的调控;(3)ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α对ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达的调控;(4)ASⅢ显著抑制TNFR1介导的IκBα磷酸化和降解;(5)ASⅢ显著抑制TNFR1介导的AKT、ERKs和p38磷酸化。结论 ASⅢ可全面抑制ASMCs中TNFR1介导信号通路激活,参与其抗炎和抗动脉粥样硬化作用。

ST6GalⅠ抑制TNFR1表达调控肾透明细胞癌凋亡

目的探讨ST6GalⅠ对肾透明细胞癌细胞凋亡的影响及可能的作用机制。方法qRT-PCR和Western blot检测ST6GalⅠ和TNFR1在肾透明细胞癌细胞中的表达。构建ST6GalⅠ差异表达肾透明细胞癌细胞株,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,并分析ST6GalⅠ和TNFR1表达的相关性,qRT-PCR和Western blot检测差异表达ST6GalⅠ细胞中TNFR1的表达,采用流式细胞术检测同时差异表达ST6GalⅠ和TNFR1的A498和Caki-1细胞的凋亡水平。结果与ST6GalⅠ在5种肾透明细胞癌细胞中均高表达(P<0.05);抑制ST6GalⅠ表达后A498细胞凋亡率升高(P<0.01),Caki-1细胞过表达ST6GalⅠ后细胞凋亡率降低(P<0.001)。TNFR1 mRNA和蛋白在5种肾透明细胞癌细胞株中均低表达,且与ST6GalⅠm RNA和蛋白表达呈负相关(r=-0.9667,-0.9928,均P<0.01);抑制ST6GalⅠ表达TNFR1表达增加(P<0.001),而ST6GalⅠ过表达TNFR1表达降低(P<0.001);A498细胞同时抑制ST6GalⅠ和TNFR1表达后细胞凋亡率低于单独抑制ST6GalⅠ(P<0.01),Caki-1细胞同时过表达ST6GalⅠ和TNFR1后细胞凋亡率高于单独抑制ST6GalⅠ(P<0.01)。结论ST6GalⅠ可通过抑制TNFR1表达而抑制肾透明细胞癌的凋亡。

ICAM-1协同参与TNFRI介导的TM-TNF-α杀瘤作用

目的 :寻找协同参与TM TNF α杀瘤作用的膜表面分子 ,探讨TM TNF α杀瘤及两型TNF α生物学效应差异的分子机制。方法 :利用抗体封闭实验及RT PCR ,检测ICAM 1及VCAM 1对TNFR1或TNFRII介导的TM TNF α杀瘤效应是否具有协同作用。结果 :封闭表达TNFRI的MCF 7细胞表面的ICAM 1,可显著降低TM TNF α对其杀伤的作用 ;而封闭VCAM 1无明显效应。封闭表达TNFRII的HL 6 0细胞表面的ICAM 1或VCAM 1,均对TM TNF α的杀伤作用无影响。结论 :ICAM 1对于TM TNF

通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠RANKL/RANK/OPG系统及MMP-3、TIMP-1表达的影响

目的:探究通痹颗粒对胶原性关节炎(CIA)大鼠RANKL/RANK/OPG系统及MMP-3、TIMP-1表达的影响。方法:将60只健康雌性SD大鼠随机分成空白组、模型组、雷公藤多苷组、通痹颗粒低剂量组和通痹颗粒高剂量组,每组12只。除空白组外,其余各组用牛Ⅱ型胶原诱导CIA模型。造模成功后,空白组和模型组予等量生理盐水灌胃,其余各组分别以雷公藤多苷片、低剂量通痹颗粒和高剂量通痹颗粒灌胃,1次/d,连续给药2周。行关节炎指数评分和关节肿胀度测量,并检测各组滑膜病理学情况,RANKL、RANK、OPG的mRNA和蛋白表达情况,以及血清中MMP-3、TIMP-1水平。结果:时间与组别的交互效应对CIA大鼠关节炎指数评分和关节肿胀度的影响差异均有统计学意义(P<0.05),雷公藤多苷组、通痹颗粒低剂量组和通痹颗粒高剂量组大鼠关节炎指数评分和关节肿胀度均低于模型组(P<0.05),治疗第14天通痹颗粒高剂量组改善情况优于雷公藤多苷组(P<0.05);模型组大鼠滑膜重度增生,并可见缺损及血管翳形成,雷公藤多苷组、通痹颗粒低剂量组和通痹颗粒高剂量组大鼠滑膜病变有所改善,雷公藤多苷组和通痹颗粒高剂量组优于通痹颗粒低剂量组;与模型组比较,雷公藤多苷组、通痹颗粒低剂量组和通痹颗粒高剂量组大鼠滑膜组织中RANKL、RANK的mRNA和蛋白的表达均明显降低(P<0.05),OPG mRNA和蛋白的表达量均明显升高(P<0.05),且通痹颗粒高剂量组优于雷公藤多苷组(P<0.05);与模型组比较,雷公藤多苷组、通痹颗粒低剂量组和通痹颗粒高剂量组大鼠血清中MMP-3、TIMP-1水平明显降低(P<0.05),且通痹颗粒高剂量组优于雷公藤多苷组(P<0.05)。结论:通痹颗粒可减轻CIA大鼠的滑膜炎症,并对关节破坏具有一定的缓解作用,提示经由RANKL/RANK/OPG系统的调节作用并有效平衡血清中MMP-3、TIMP-1的异常表达,可能是通痹颗粒治疗CIA的机制之一。

Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉与胃癌中的表达意义

目的探讨Cyclin D1及TNFR1在腺瘤性息肉与胃癌中的表达意义。方法采用回顾性、随机抽样研究方法,选择120例胃癌患者与120例腺瘤性息肉患者的组织标本作为研究对象。所有标本都给予免疫组化分析,检测Cyclin D1及TNFR1的表达水平,并进行相关性分析。结果胃癌组织的Cyclin D1及TNFR1阳性表达率分别为75. 0%和65. 0%,腺瘤性息肉组织分别为3. 3%和15. 0%,对比差异有统计学意义(P <0. 05)。120例胃癌组织中有75例Cyc-lin D1及TNFR1蛋白的表达同时呈阳性,腺瘤性息肉组织中只有3例同时呈阳性,Spearman等级相关分析显示Cyclin D1及TNFR1蛋白在胃癌中的表达呈正相关(γ=0. 563,P=0. 002)。Cyclin D1及TNFR1在胃癌组织中的阳性率与胃癌的浸润深度、淋巴结转移、黏液癌、Dukes分期呈正相关(P <0. 05),与肿瘤的分化程度呈负相关(P <0. 05)。结论 CyclinD1及TNFR1在腺瘤性息肉与胃癌中都呈现过表达状况,与腺瘤性息肉与胃癌的发生发展密切相关,两者的早期检测可为进一步提高胃癌的诊治水平提供思路。

溴氰菊酯对PC12细胞Fas、FasL、TNFR1蛋白及凋亡的影响

背景与目的 :探讨溴氰菊酯诱导神经细胞凋亡及其神经毒作用机制。 材料与方法 :用免疫细胞化学法定性检测给予不同剂量水平(10 -4mol/L ,10 -5mol/L ,10 -6mol/L)的溴氰菊酯24h后 ,Fas、FasL、TNFR1蛋白在PC12细胞中的表达 ;流式细胞仪定量检测给予溴氰菊酯24h和48h后 ,Fas、FasL、TNFR1蛋白在PC12细胞中的相对表达量阳性细胞率(rateofpositivecells ,RPC)和平均荧光强度(meanfluorescenceintensity,MFI)及PC12细胞的凋亡率。 结果 :①Fas、FasL、TNFR1蛋白在对照组和各剂量组均为阳性表达 ,但镜下未见各蛋白在各组之间的差异表达。流式细胞仪检测发现 :染毒24h后 ,Fas、FasL蛋白在各组的表达没有差异 ,而TNFR1蛋白在中剂量和高剂量组的表达与对照组比较有升高 ;染毒48h后 ,Fas、FasL、TNFR1蛋白在高剂量组表达(MFI分别为42.85±8.4、37.91±1.65、8.09±1.83)与各自对照组比较均有升高。②染毒24h后 ,各剂量组凋亡率没有升高 ;染毒48h后 ,高剂量组凋亡率与对照组凋亡率比较有升高。③染毒48h组细胞凋亡率与溴氰菊酯浓度、Fas、Fasl蛋白含量有直线相关关系。 结论 :溴氰菊酯可能通过死亡受体Fas诱导PC12细胞凋亡。

TNFR1-383A/C基因多态性在散发性帕金森病患者中的分布及临床特点分析

目的探讨TNFR1-383A/C基因多态性在散发性帕金森病(sporadic Parkinson disease,SPD)患者和健康人群中的分布,确定其对SPD患者发病年龄和临床特征的影响。方法应用荧光PCR技术对518例SPD患者和521名健康对照个体进行TNFR1-383A/C基因多态性检测,应用χ2检验、非条件Logistic回归模型分析、Kaplan-Meier和life table方法分析其基因多态性与SPD的相关性,及其对SPD发病年龄及临床特征的影响。结果病例组与对照组TNFR1-383A/C基因型及等位基因频率间无统计学差异。按照年龄分组分析发现,病例组发病年龄≥65岁亚组C等位基因频率显著低于对照组≥65岁亚组(6.74%vs.10.10%,P<0.05),并可减少晚发型帕金森病发病的危险性(OR=0.64,95%CI:0.43～0.97,P<0.05),但并未发现CC基因型在两亚组间存在统计学差异(P>0.05)。携带CC、CA和AA基因型的个体发病年龄中位数分别为54岁、62岁和61岁,各基因型者间发病年龄比较无统计学差异(P=0.16),携带CC基因型的个体并未延迟SPD的发病年龄。携带C和非C等位基因个体发病年龄的中位数均为61岁,携带C等位基因的个体并不能延迟SPD的发病年龄(P=0.86)。结论 TNFR1-383A/C等位基因可减少≥65岁人群发生帕金森病的危险,可能在SPD的发病过程中具有保护作用。TNFR1-383A/C基因多态性对SPD的发病年龄和临床特征没有明确影响。