TNFR1-383A/C基因多态性在散发性帕金森病患者中的分布及临床特点分析

目的探讨TNFR1-383A/C基因多态性在散发性帕金森病(sporadic Parkinson disease,SPD)患者和健康人群中的分布,确定其对SPD患者发病年龄和临床特征的影响。方法应用荧光PCR技术对518例SPD患者和521名健康对照个体进行TNFR1-383A/C基因多态性检测,应用χ2检验、非条件Logistic回归模型分析、Kaplan-Meier和life table方法分析其基因多态性与SPD的相关性,及其对SPD发病年龄及临床特征的影响。结果病例组与对照组TNFR1-383A/C基因型及等位基因频率间无统计学差异。按照年龄分组分析发现,病例组发病年龄≥65岁亚组C等位基因频率显著低于对照组≥65岁亚组(6.74%vs.10.10%,P<0.05),并可减少晚发型帕金森病发病的危险性(OR=0.64,95%CI:0.43～0.97,P<0.05),但并未发现CC基因型在两亚组间存在统计学差异(P>0.05)。携带CC、CA和AA基因型的个体发病年龄中位数分别为54岁、62岁和61岁,各基因型者间发病年龄比较无统计学差异(P=0.16),携带CC基因型的个体并未延迟SPD的发病年龄。携带C和非C等位基因个体发病年龄的中位数均为61岁,携带C等位基因的个体并不能延迟SPD的发病年龄(P=0.86)。结论 TNFR1-383A/C等位基因可减少≥65岁人群发生帕金森病的危险,可能在SPD的发病过程中具有保护作用。TNFR1-383A/C基因多态性对SPD的发病年龄和临床特征没有明确影响。

circ-RBM33靶向miR-383-3p/CKS1B轴抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移

目的:探究circ-RBM33能否靶向miR-383-3p/CKS1B轴抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭。方法:qRT-PCR检测CNE1和HNEpC细胞中circ-RBM33、miR-383-3p表达。将CNE1细胞随机分为si-NC组、si-RBM33组、miR-NC组、miR-383-3p组和si-RBM33+anti-miR-383-3p组。分别检测细胞增殖(CCK-8法)、侵袭(Transwell法)和迁移(划痕实验)及细胞中CKS1B蛋白表达(蛋白质印迹法);荧光素酶活性实验检测circ-RBM33和miR-383-3p/CKS1B的靶向关系。结果:人鼻咽癌细胞CNE1中circ-RBM33相对表达量高于人鼻黏膜上皮细胞HNEpC,miR-383-3p相对表达量低于人鼻黏膜上皮细胞HNEpC(P<0.05)。si-RBM33组CNE1细胞中circ-RBM3相对表达量、细胞存活率、细胞侵袭数目、细划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均低于si-NC组(P<0.05);si-RBM33+anti-miR-383-3p组CNE1细胞存活率、细胞侵袭数目、细胞划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均高于si-RBM33组(P<0.05)。miR-383-3p组CNE1细胞中miR-383-3p相对表达量明显增加,细胞存活率、细胞侵袭数目、细划痕愈合率及细胞中CKS1B蛋白表达均低于miR-NC组(P<0.05)。转染WT-circ-RBM33/CKS1B时miR-383-3p组荧光素酶活性明显低于miR-NC组(P<0.0001)。结论:敲减circ-RBM33可能通过上调miR-383-3p表达,进而抑制CKS1B表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

miR-383-5p调控IGF2BP1抑制直肠癌细胞EMT及侵袭迁移的研究

目的探究microRNA-383-5p(miR-383-5p)在直肠癌的表达及其对直肠癌转移的调控机制。方法体外培养人直肠癌细胞SW837、SW1463、HR-8348和人正常结直肠黏膜细胞FHC,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测细胞中miR-383-5p、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)mRNA表达水平。取对数生长期的SW837细胞,分成对照组(NC组,不进行任何转染)、mimic-NC组(转染miR-383-5p mimic阴性对照)、miR-383-5p过表达组(转染miR-383-5p mimic)、miR-383-5p过表达+pcDNA3.1-NC组(miR-383-5p mimic和pcDNA3.1-IGF2BP1阴性对照空载体质粒共转染)、miR-383-5p过表达+pcDNA3.1-IGF2BP1组(miR-383-5p mimic和pcDNA3.1-IGF2BP1共转染),转染48h后,RT-qPCR检测转染效果;CCK-8法检测细胞增殖活力;划痕愈合实验和Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western Blot检测细胞中IGF2BP1和上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因验证miR-383-5p与IGF2BP1的靶向关系。结果直肠癌细胞中miR-383-5p的表达显著低于人正常结直肠黏膜细胞FHC,而IGF2BP1 mRNA在直肠癌细胞中呈高表达(P<0.05)。与NC组相比,miR-383-5p过表达组细胞中miR-383-5p、E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达显著升高,IGF2BP1 mRNA和蛋白的表达、细胞增殖活性、划痕愈合率、进入Transwell小室下层的细胞数量、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达显著降低(P<0.05);且在过表达miR-383-5p的基础上,上调IGF2BP1的表达,miR-383-5p过表达对SW837细胞增殖、迁移和侵袭以及EMT的抑制作用被减弱。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-383-5p的高表达可显著抑制转染IGF2BP1-WT的细胞荧光素酶活性(P<0.05)。结论miR-383-5p过表达可能通过靶向下调IGF2BP1,抑制直肠癌细胞EMT及侵袭迁移。

lncRNA FAM83H-AS1通过抑制miR-383-3p表达调控食管癌细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制研究

目的:探讨lncRNA FAM83H-AS1对食管癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及分子机制。方法:实验设置si-NC组、si-FAM83H-AS1组、pcDNA组、pcDNA-FAM83H-AS1组、miR-NC组、miR-383-3p组、si-FAM83H-AS1+anti-miR-NC组、siFAM83H-AS1+anti-miR-383-3p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FAM83H-AS1和miR-383-3p的表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性;蛋白质印迹(Western blot)法检测CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;荧光素酶报告实验检测FAM83H-AS1对miR-383-3p的靶向调控。结果:与癌旁组织相比,食管癌组织中FAM83H-AS1高表达,miR-383-3p低表达(P<0.05)。抑制FAM83H-AS1表达或过表达miR-383-3p,细胞活性显著降低,细胞迁移、侵袭数显著降低,CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平显著降低,p21表达水平显著升高(P<0.05)。FAM83H-AS1靶向调控miR-383-3p,干扰miR-383-3p表达逆转了抑制lncRNA FAM83H-AS1表达对食管癌EC9706细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:抑制lncRNA FAM83H-AS1表达可能通过上调miR-383-3p表达抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭。

LncRNA MALAT1调节miR-383-5p/SOCS3轴对人牙周膜干细胞的影响

目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)肺腺癌转移相关转录本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1,MALAT1)调控微小RNA-383-5p(microRNA-383-5p,miR-383-5p)/细胞因子信号转导负调控因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)轴对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)增殖、凋亡及成骨分化的影响。方法LPS处理hPDLSCs后用靶向MALAT1的小干扰RNA(small interfering RNA-MALAT1,si-MALAT1)或miR-383-5p抑制物(miR-383-5p inhibitor,in-miR-383-5p)或SOCS3过表达质粒(SOCS3)转染,ELISA检测炎症因子水平;RT-qPCR和Western blot检测转染效率;CCK-8和TUNEL检测细胞增殖、凋亡;使用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和茜素红S(alizarin red S,ARS)染色分析成骨分化;Western blot对增殖、凋亡以及成骨分化相关蛋白进行检测。生物信息学与双荧光素酶实验分析miR-383-5p与MALAT1/SOCS3之间的关系。结果LPS可诱导hPDLSCs细胞炎症和凋亡,降低了细胞增殖能力和成骨分化程度;同时上调MALAT1和SOCS3表达,下调miR-383-5p表达(P<0.05)。敲低MALAT1可明显降低LPS诱导的hPDLSCs细胞炎症反应、凋亡能力,细胞增殖能力和成骨分化程度增加;同时还可上调miR-383-5p表达,下调SOCS3表达(P<0.05)。此外,回复实验表明,抑制miR-383-5p表达或上调SOCS3表达可部分逆转MALAT1敲低后对LPS诱导的hPDLSCs细胞的影响(P<0.05)。进一步分析验证,MALAT1海绵化miR-383-5p靶向调控SOCS3表达(P<0.05)。结论敲低MALAT1可通过调节miR-383-5p/SOCS3轴改善炎症状态下hPDLSCs的增殖、凋亡和成骨分化。

香叶木素调控STX17-AS1/miR-383-5p轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨香叶木素对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响,分析其机制是否与调控STX17-AS1/miR-383-5p轴有关。方法通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、集落形成实验、划痕愈合实验、流式细胞术、实时定量PCR(RT-qPCR)分析香叶木素(10、20、40μmol/L)对结直肠癌细胞HCT116的活力、集落形成数、划痕愈合率、凋亡以及STX17-AS1、miR-383-5p表达的影响。RT-qPCR分析2019年本院29例结直肠癌患者癌组织和对应癌旁组织中STX17-AS1、miR-383-5p相对水平。双荧光素酶报告实验分析STX17-AS1和miR-383-5p的靶向关系。分别转染STX17-AS1的小干扰RNA、miR-383-5p模拟物至HCT116细胞,观察抑制STX17-AS1或过表达miR-383-5p对HCT116细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果香叶木素(10、20、40μmol/L)处理显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),降低STX17-AS1表达水平(P<0.05),增加miR-383-5p表达水平(P<0.05)。结直肠癌组织中STX17-AS1的表达水平较癌旁组织显著升高(P<0.05),miR-383-5p的表达水平较癌旁组织显著降低(P<0.05)。STX17-AS1与miR-383-5p直接结合。抑制STX17-AS1表达显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),增加miR-383-5p表达水平(P<0.05)。过表达miR-383-5p显著降低HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05)。过表达STX17-AS1或抑制miR-383-5p表达显著减弱香叶木素对HCT116细胞活力、集落形成数、划痕愈合率和凋亡率的影响(P<0.05)。结论香叶木素通过下调STX17-AS1/miR-383-5p轴可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡。

黄芪皂苷Ⅲ抑制小鼠动脉平滑肌细胞TNFR1介导信号转导

目的研究黄芪皂苷Ⅲ(astragaloside Ⅲ,ASⅢ)对小鼠动脉平滑肌细胞(arterial smooth muscle cells,ASMCs)中I型TNF-α受体(TNF-αreceptor type 1,TNFR1)介导信号通路的抑制作用,为中药黄芪的抗炎作用和抗动脉粥样硬化作用提供证据。方法以不同浓度ASⅢ预处理ASMCs,之后以TNF-α诱导细胞。采用WST-1实验检测细胞活力变化;采用实时定量RT-PCR技术检测细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体(lectin-like oxidized LDL receptor-1,Lox-1)和ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)m RNA表达变化;采用Western Blot方法检测ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达变化,并检测ASⅢ对转录因子NF-κB(nuclear factor-κB)上游抑制蛋白IκBα(NF-κB inhibitor-α)、以及对信号分子AKT、细胞外受体活化激酶(extracellular receptor-activated kinases,ERKs)和p38磷酸化的影响。结果 (1)ASⅢ在30 n M^10μM范围内不抑制细胞活力;(2)ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α对ICAM-1、Lox-1和ABCA1 m RNA表达的调控;(3)ASⅢ剂量依赖性抑制TNF-α对ICAM-1、Lox-1和ABCA1蛋白表达的调控;(4)ASⅢ显著抑制TNFR1介导的IκBα磷酸化和降解;(5)ASⅢ显著抑制TNFR1介导的AKT、ERKs和p38磷酸化。结论 ASⅢ可全面抑制ASMCs中TNFR1介导信号通路激活,参与其抗炎和抗动脉粥样硬化作用。

TNFα诱导血管内皮细胞HO-1基因表达的受体及细胞内信号机制

目的探讨肿瘤坏死因子(TNFα)对脑微血管内皮细胞(BMVEC)HO-1基因表达的信号转导机制。方法采用TNF受体1敲除的脑血管内皮细胞[BVEC/TNF-RI(-/-)]为研究对象,用RT-PCR法测定TNFα刺激细胞24h后HO-1基因mRNA的表达,用westernblot法检测TNFα对JNK、ERK激酶和转录因子AP-1活性的影响,并用JNK或ERK抑制剂干预上述诱导实验。结果TNFα刺激BVEC/TNF-RI(-/-)HO-1表达增高(P<0.05),此外,TNFα刺激BVEC/TNF-RI(-/-)可引起JNK和ERK激酶表达和转录因子AP-1的活性增强(P<0.05),可是JNK的抑制剂SP600125能减弱TNF诱导的HO-1的表达(P<0.05),而ERK的抑制剂不能。结论TNFR2和JNK激酶对于TNFα诱导的HO-1的表达有重要作用。

基于TNF-α/TNFR1/RIPKs通路探讨二陈汤加味对COPD炎症的作用机制

目的:基于肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)/受体相互作用蛋白激酶(RIPKs)信号通路,研究二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型炎症的影响,探讨其作用机制。方法:SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组,每组10只。采用香烟烟雾联合脂多糖(LPS)方法制备COPD大鼠模型,二陈汤加味高、中、低剂量组分别以20、10、5 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,消咳喘以3.5 mL·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,正常组与模型组灌胃等量生理盐水,持续干预21 d。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α、TNFR1的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织中受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)、受体相互作用蛋白激酶3(RIPK3)、混合系列激酶样结构域蛋白(MLKL)mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白表达,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织的病理变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著升高(P<0.01),肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组及消咳喘组大鼠BALF中TNF-α、TNFR1含量显著降低(P<0.01),肺组织中RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA及蛋白表达水平有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01)。结论:二陈汤加味能够有效改善COPD大鼠肺组织的炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α/TNFR1/RIPKs信号通路。

LncRNA MALAT1调控miR-383-5p对神经母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

该文旨在探讨长链非编码RNA(lnc RNA)肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。选取2019年1月至2021年12月在凉山彝族自治州第一人民医院接受治疗的45例NB患者的NB组织和相邻的非癌组织,利用q RTPCR检测NB组织和相邻的非癌组织、人脐静脉内皮细胞HUVECs和神经母细胞瘤癌细胞系NMB、SHEP21N、SHEP2中MALAT1和miR-383-5p的表达水平。选择SHEP2为研究对象,将其随机分为si-NC组、si-MALAT1组、pc-NC组、pc-MALAT1组、mi R-NC组、mi R-383-5p过表达组(OE-mi R-383-5p组)、anti-NC组、anti-mi R-383-5p组、si-MALAT1+anti-NC组和si-MALAT1+anti-mi R-383-5p组;CCK-8法检测各组SHEP2细胞的增殖水平;Western blot实验检测各组SHEP2细胞中Cyclin D1、PCNA、MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平;Transwell实验检测各组SHEP2细胞的迁移和侵袭情况;双荧光素酶报告实验验证MALAT1和mi R-383-5p的靶向关系。NB组织和细胞系(NMB、SHEP21N、SHEP2)中MALAT1表达上调,miR-383-5p表达下调,其中SHEP2细胞中MALAT1表达水平最高,miR-383-5p表达水平最低。敲低MALAT1表达或过表达mi R-383-5p可明显降低SHEP2细胞增殖活性、迁移细胞数目和侵袭细胞数目,并下调Cyclin D1、PCNA、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。MALAT1可靶向调控mi R-383-5p的表达,抑制mi R-383-5p表达可逆转敲低MALAT1对SHEP2细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。敲低MALAT1可以抑制SHEP2细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与靶向调控mi R-383-5p有关。

长链非编码RNA PCED1B-AS1靶向miR-383-5p调控结直肠癌进展的作用分析

[目的]探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)PCED1B-AS1靶向miR-383-5p在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)进展中的作用。[方法]收集解放军总医院第五医学中心南院区2018年1月至2019年10月收治的41例CRC组织和癌旁组织,RT-qPCR检测PCED1B-AS1、miR-383-5p和过氧化物酶3(PRDX3)mRNA表达水平。将si-NC、si-PCED1B-AS1、miR-NC、miR-383-5p、si-PCED1B-AS1+antimiR-NC、si-PCED1B-AS1+anti-miR-383-5p分别转染CRC细胞LoVo,CCK-8法、平板克隆实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测LoVo细胞体外增殖、克隆形成、迁移和凋亡能力。双荧光素酶报告实验确定PCED1B-AS1与miR-383-5p、miR-383-5p与PRDX3的靶向关系。[结果]与癌旁组织比较,CRC组织中PCED1B-AS1(0.92±0.12 vs 2.87±0.32)、PRDX3 mRNA(0.93±0.11 vs 2.30±0.26)表达水平升高(P均<0.001),miR-383-5p表达水平降低(0.98±0.15 vs 0.40±0.05,P<0.001)。下调PCED1B-AS1后LoVo细胞miR-383-5p表达水平(1.00±0.00 vs 2.95±0.12)、抑制率(0 vs 47.75%±2.75%)、凋亡率均升高(8.10%±0.75%vs 20.20%±1.09%)(P均<0.001),PRDX3 mRNA表达水平(1.00±0.00 vs 0.27±0.03)、克隆形成数(116.78±6.01 vs67.56±4.11)、迁移细胞数(173.78±8.32 vs 85.89±3.07)均降低(P均<0.001)。过表达miR-383-5p后LoVo细胞PRDX3 m RNA表达水平、克隆形成数、迁移细胞数降低(P均<0.001),抑制率、凋亡率升高(P均<0.001)。miR-383-5p分别与PCED1B-AS1、PRDX3特异性结合。抑制miR-383-5p表达可减弱下调PCED1B-AS1对LoVo细胞增殖、迁移、克隆形成、凋亡的影响(P均<0.001)。[结论]下调PCED1B-AS1通过靶向上调miR-383-5p表达可抑制CRC细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡,进而抑制CRC进展。

一种新硫色满酮衍生物诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

初步研究了新合成的(顺)-3-(氯代亚甲基)-5-甲基-硫色满-4-酮(3-chloromethylene-5-fluoro-thiochroman-4-one,CMTK)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,分别用不同浓度的CMTK对细胞进行干预,采用改良的MTT法测定CMTK抑制细胞增殖的能力,台盼蓝染色法计数活细胞数,绘制生长曲线,流式细胞术检测细胞对细胞周期的影响,同时采用流式细胞术及TUNEL染色法(terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labelling)检测CMTK诱导凋亡,活性检测法测定细胞中人半胱氨酸蛋白酶8(caspase-8)和人半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9)的活性,ELISA法测人死亡受体3(deathreceptor3,DR3)、人肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor1,TNFR1)、人肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、人半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达情况.结果表明,CMTK可明显抑制MCF-7细胞增殖,与顺铂(cisplatin,CDDP)相比,其抗肿瘤活性更明显,IC50为14.24±0.12molL1;生长曲线进一步说明CMTK抑制细胞增殖,其抑制作用呈时间-剂量依赖性;流式细胞仪检测分析显示,加药12和24h后可将细胞阻滞于G0/G1期(**P<0.05);TUNEL法和流式细胞仪分析CMTK可诱导凋亡的结果基本一致;与药物作用后,caspase-8和caspase-9的活性增高,并呈浓度剂量依赖性;ELISA法检测DR3蛋白量和TNF-细胞因子的量无变化,TNFR1和caspase-3的蛋白量显著增高,CMTK诱导肿瘤细胞凋亡的机制可能是:不仅可以通过死亡受体TNFR1介导凋亡途径,激活caspase-8;还可以通过线粒体凋亡途径,激活caspase-9;最终激活caspase-3凋亡通路.本研究为深入研究CMTK诱导肿瘤细胞凋亡的机制提供了依据.