lncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246对牙周细胞低氧诱导因子1α的作用

背景:LncRNA-TNFRSF13C是B细胞发育和功能中的一个重要因子,在牙周炎患者牙周组织中高表达,但具体机制还不清楚。目的:探讨lncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246对牙周细胞低氧诱导因子1α的作用机制。方法:人牙周膜细胞经过脂多糖处理后分为7组:A组(无转染的人牙周膜细胞株)、B组(人牙周膜细胞株转染TNFRSF13C NC-siRNA)、C组(人牙周膜细胞株转染TNFRSF13C-siRNA)、D组(人牙周膜细胞株转染miR-1246 mimics)、E组(人牙周膜细胞株转染miR-1246 siRNA)、F组(人牙周膜细胞株转染TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 mimics)及G组(人牙周膜细胞株转染TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA)。采用qRT-PCR检测各组细胞lncRNA-TNFRSF13C、miR-1246相对表达;CCK-8检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;免疫印迹检测细胞中低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白的表达;Pearson分析lncRNA-TNFRSF13C与miR-1246相关性,双荧光素酶分析靶向关系。结果与结论:①A、B两组人牙周膜细胞活性、凋亡率及蛋白指标比较差异均无显著性意义(P>0.05),与B组相比,C组细胞活性升高、凋亡率及低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白降低(P<0.05),与C组相比,D组细胞活性降低,凋亡率及低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白均升高(P<0.05),D组相比,E组细胞活性升高(P<0.05),F组细胞活性低于E组,E、F组细胞凋亡率降低(P<0.05),与F组相比,G组细胞活性升高、凋亡率及低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子蛋白降低(P<0.05)。②lncRNA-TNFRSF13C与miR-1246呈现正相关(P<0.05)。③TNFRSF13C-siRNA组与TNFRSF13C-NC组在miR-1246-wt荧光活性降低(P<0.05);与miR-1246-NC组相比,miR-1246 mimics组低氧诱导因子1α-wt、血管内皮生长因子-wt荧光活性升高(P<0.05)。④结果说明,下调lncRNA-TNFRSF13C对脂多糖处理的牙周细胞具有促进活性、降低凋亡的作用,同时也可抑制低氧诱导因子1α、血管内皮生长因子的表达,其机制与调控miR-1246活性相关。

LncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246对LPS诱导的牙髓细胞HIF-1α及生物活性的影响

目的:探讨LncRNA-TNFRSF13C调控miR-1246对脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的牙髓细胞低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)及生物活性的影响机制。方法:将人牙髓细胞(human dental pulp cells, HDPCs)经LPS处理后,分为HDPCs组、TNFRSF13C NC-siRNA组、TNFRSF13C-siRNA组、sno-TNFRSF13C组、miR-NC组、miR-1246 mimics组、miR-1246 siRNA组、TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组。qRT-PCR检测各组细胞LncRNA-TNFRSF13C、miR-1246相对表达;免疫印迹检测各组细胞HIF-1α蛋白表达;CCK-8检测各组细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;茜素红染色观察细胞矿化情况。结果:与HDPCs组、TNFRSF13C NC-siRNA组相比,TNFRSF13C-siRNA组HIF-1α表达量、细胞凋亡率、LncRNA-TNFRSF13C表达降低,细胞增殖率升高(P<0.05)。与miR-NC组相比,miR-1246 siRNA组HIF-1α表达量、细胞凋亡率、miR-1246表达水平降低,细胞增殖率升高(P<0.05)。与TNFRSF13C-siRNA组、miR-1246 siRNA组相比,TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组HIF-1α表达量、细胞凋亡率降低,细胞增殖率升高(P<0.05)。TNFRSF13C-siRNA组、miR-1246 siRNA组存在更多的矿化结节及不透光致密影;TNFRSF13C-siRNA+miR-1246 siRNA组存在大量矿化结节,致密深染。结论:抑制LncRNA-TNFRSF13C对LPS处理的HDPCs具有促进活性,降低凋亡的作用,促进HDPCs矿化,同时也可抑制HIF-1α,研究机制与调控miR-1246活性相关。

TNFRSF13C在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达及其意义

目的:检测单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织中B细胞激活因子受体(TNFRSF13C)的表达变化,探讨其在肾间质纤维化病变中的作用。方法:采用UUO法建立肾间质纤维化大鼠模型,20只成年雄性大鼠,随机分为4组,分别于术后0、3、7、14天处死大鼠。取左侧梗阻肾脏进行Masson染色,拍照后,采用双盲法评定各组肾小管间质纤维化程度。提取肾组织中总RNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组肾组织中TNFRSF13C基因表达情况。Pearson检测TNFRSF13C表达量与肾小管间质纤维化程度的相关性。结果:随着梗阻时间的延长,肾组织中TNFRSF13C的m RNA表达量进行性升高,与肾间质纤维化病变程度一致,两者呈显著正相关(r=0.915,P<0.01)。结论:TNFRSF13C可能在肾间质纤维化病程中起到了重要作用,并有望成为慢性肾脏病的临床监测指标。