特比萘芬对Jukat E6-1细胞株TNFSF7基因表达和启动子甲基化修饰的影响

目的从易诱发药源性红斑狼疮的高危药物中筛选出对CD4+T淋巴细胞Jukat E6-1细胞株CpG岛甲基化状态和DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达有影响的药物,进一步探讨其对自身免疫相关基因TNFSF7(CD70)表达及启动子甲基化修饰的影响。方法分别用不同浓度的特比萘芬、雷尼替丁、奎尼丁和米诺环素处理Jukat E6-1细胞株,并以未用任何浓度药物处理的细胞作为阴性对照(对照组)48 h后收集细胞。5-甲基胞嘧啶抗体和流式细胞术检测细胞CpG岛甲基化水平,定量PCR检测DNMT1和TNFSF7基因mRNA表达水平,流式细胞术检测细胞表面CD70分子表达水平,亚硫酸盐测序法分析TNFSF7基因启动子甲基化水平。结果各浓度药物处理细胞48h后,与对照组相比,特比萘芬组细胞CpG岛甲基化和DNMT1基因mRNA表达水平显著降低(P<0.05),其余药物组差异无统计学意义(P>0.05)。随着特比萘芬浓度的增加,细胞TNFSF7基因mRNA和CD70表达水平也呈增高的趋势,趋势检验有统计学意义(P<0.01)。进一步研究发现特比萘芬100μmol/L组TNFSF7基因启动子甲基化水平显著低于对照组(P<0.05)。结论特比萘芬可通过影响DNMT1基因mRNA表达水平,从而使整个基因组CpG岛和TNFSF7基因启动子甲基化水平降低,进而导致细胞CD70表达水平升高,初步揭示了特比萘芬增加自身免疫反应的分子机制。

SLE患者T淋巴细胞TNFSF7基因启动子区域的甲基化状态

目的探讨系统性红斑狼疮患者(SLE)T淋巴细胞TNFSF7基因启动子区域DNA甲基化状态及其在发病机制中的作用。方法分离15例活动期SLE患者、15例非活动期SLE患者和15例正常人对照外周血CD4+与CD8+T细胞,并分别提取DNA。采用亚硫酸氢钠测序法对CD4+与CD8+T细胞TN-FSF7基因启动子区域DNA甲基化水平进行检测。结果在TNFSF7基因启动子区域,活动期、非活动期SLE患者组的CD4+T淋巴细胞的TNFSF7基因启动子序列-600～-300bp区域平均甲基化水平(0.32±0.05,0.36±0.05)明显低于正常人对照组(0.62±0.05,P=0.000),且活动期平均甲基化水平明显低于非活动期SLE患者组(P=0.000)。活动期、非活动期SLE患者组的CD8+T淋巴细胞的TN-FSF7基因启动子序列平均甲基化水平与正常人比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论活动期、非活动期SLE患者的CD4+T淋巴细胞的TNFSF7基因启动子区域处于低甲基化状态,且启动子甲基化水平与SLE的活跃性相关。

直肠腺癌组织TNFRSF7、TNFSF7基因mRNA表达

目的检测直肠腺癌组织及癌旁10cm正常组织TNFRSF7、TNFSF7基因表达。方法采集9例直肠腺癌及癌旁10cm正常组织样本,采用原位杂交法检测直肠腺癌组织TNFRSF7、TNFSF7基因表达。将"信号评分"(染色强度评分×染色面积)作为每个样本的原位杂交染色评分。结果 TNFRSF7、TNFSF7生物素标记探针在直肠腺癌细胞中的杂交信号可见于所有直肠腺癌及相应癌旁10cm直肠黏膜上皮。细胞质区域杂交信号的强度较胞核区为弱,TNFRSF7杂交信号的强度较TNFSF7为弱。直肠腺癌组织中TNFRSF7、TNFSF7基因mRNA信号评分均高于癌旁10cm正常黏膜组织。结论 TNFRSF7、TNFSF7mRNA在直肠癌组织中高表达,可作为判断肿瘤分期、指导治疗和预后判断的参考指标。

直肠癌组织中CD70蛋白的表达及意义

目的探讨直肠癌组织中CD70(TNFSF7)蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测60例直肠癌组织及癌旁组织中CD70、CD27(TNFRSF7)蛋白的表达,分析其与临床病理学特征的关系。结果 CD27、CD70在直肠癌组织中的阳性表达率分别为1.67%、33.33%;在直肠癌旁组织中均不表达。结论 CD70与直肠癌的发生发展密切相关,可作为判断肿瘤分期、指导治疗和预后判断的参考指标。