ANXA6基因多态性与门冬氨酸氨基转移酶水平的相关性研究

目的探讨ANXA6基因SNP1(rs2303022)位点与门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平的相关性。方法收集2018年10-11月在新疆医科大学健康体检中心体检的7095名学生为研究对象,采用极端表型研究策略,对测定的不同性别人群的低密度脂蛋白胆固醇水平进行从小到大的排序,根据纳入排除标准筛选后最终纳入792例,测定血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、谷丙转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),提取血液样本DNA,采用SNPscan技术进行基因型分型,对收集数据进行统计学分析。结果病例组和对照组性别分布、BMI、ALT、Cr、FBG、TC、LDL-C、HDL-C、TG水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。男性对照组和男性病例组在BMI、ALT、TC、LDL-C、TG水平上的差异有统计学意义(P<0.05);女性对照组和女性病例组在年龄和ALT水平上的差异有统计学意义(P<0.05)。男性对照组和男性病例组ANXA6基因rs2303022在隐性模型(CC+CG;GG)中的分布频率差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,AST与ALT的水平呈正相关(OR=1.18,P<0.001,95%CI:1.14~1.22),年龄和HDL-C水平是AST升高的影响因素。结论本研究未发现ANXA6基因SNP1(rs2303022)位点与AST相关,AST升高可能与年龄和HDL-C水平变化有关。

TNIP1/ANXA6基因多态性与中国维吾尔族寻常型银屑病临床表型及病情相关性研究

目的探讨人肿瘤坏死因子α诱导蛋白3 TNFAIP3相互作用蛋白1(TNIP1)/膜联蛋白A6(ANXA6)基因多态性与中国维吾尔族人群寻常型银屑病临床表型的相关性。方法收集332例维吾尔族寻常型银屑病患者和330例维吾尔族健康人群外周血目的片段DNA,选择位于TNIP1/ANXA6基因区域的2个单核苷酸多态性(SNP)rs17728338、rs999556,利用连接酶检测反应基因分型。结果维吾尔族寻常型银屑病组与对照组间TNIP1/ANXA6基因多态性rs17728338位点的基因型和等位基因分布频率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),rs999556位点在银屑病组和对照组间基因型和等位基因分布频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。TNIP1/ANXA6 rs17728338分层分析中的基因型、等位基因在有家族史组与无家族史组之间、PASI评分≥10分和PASI评分<10分之间rs17728338位点基因型频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TNIP1/ANXA6 rsl7728338位点单核苷酸多态性可能参与中国维吾尔族人群寻常型银屑病的发生和发展。

ANXA4和ANXA6在肝门部胆管癌中的表达及临床意义

目的探讨膜联蛋白A4(ANXA4)和膜联蛋白A6(ANXA6)在肝门部胆管癌(HC)组织中的表达及两者与HC临床病理特征和预后的关系。方法采用组织芯片与免疫组织化学技术检测2005年至2007年49例HC组织及10例癌旁组织中ANXA4和ANXA6的表达情况,分析两者表达与HC临床病理特征及预后的关系。结果 ANXA4和ANXA6在HC组织中的阳性表达率分别为63.3%(31/49)和69.4%(34/49),明显高于癌旁组织的20.0%(2/10)和30.0%(3/10),差异均有统计学意义(P<0.05)。ANXA4蛋白表达与淋巴结转移有关(P<0.05),ANXA6表达则与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。ANXA4阳性表达者的中位总生存时间(OS)和无进展生存时间(PFS)分别为14个月和12个月,明显短于阴性表达者的46个月和39个月(P<0.05);ANXA6阳性表达者的中位OS和PFS分别为14个月和12个月,明显短于阴性表达者的42个月和39个月(P<0.05)。Cox多因素分析显示,ANXA6、浸润深度是影响OS的独立因素,浸润深度是影响PFS的独立因素。结论 ANXA4和ANXA6与HC的发生、发展有关,且ANXA6是潜在的评估预后的肿瘤标志物。

乳腺癌患者ANXA6基因的表达及其病理意义

目的探讨ANXA6基因在人乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的相关性。方法选择2006年11月—2010年12月收治并病理确诊的55例乳腺癌患者组织标本进行石蜡包埋,采用免疫组织化学方法检测55例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织中ANXA6基因的表达,以RT-PCR技术和Western印迹法验证ANXA6在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达,分析ANXA6基因表达与患者临床特征的关系。结果55例患者癌与癌旁组织中ANXA6基因的阳性表达分别为96.3%(53/55)和52.7%(29/55),差异具有统计学意义(P<0.05);癌组织中ANXA6与自噬相关蛋白LC3B、P62、TFEB表达均高于癌旁组织(P<0.05)。ANXA6基因在癌组织中的表达阳性率与肿瘤大小、临床病理分期、PR表达有关(P<0.05);而与有无淋巴结转移、5年生存率、年龄、组织学分级、ER表达、HER-2表达均无关(P>0.05)。ANXA6基因在癌组织中表达阳性率与LC3B表达、TFEB表达相关(P<0.05),与P62表达无关(P>0.05)。癌组织中ANXA6基因表达上调率与肿瘤大小、有无淋巴结转移、临床病理分期、5年生存率、年龄、组织学分级、PR表达、HER-2表达,TFEB表达有关(P<0.05),与ER表达、LC3B及P62表达无关(P>0.05)。结论ANXA6基因在乳腺癌组织中高表达,其在癌组织中表达阳性率与肿瘤大小、临床病理分期、PR表达、LC3B表达、TFEB表达有关,其在癌组织中表达上调率与肿瘤大小、有无淋巴结转移、临床病理分期、5年生存率、年龄、组织学分级、PR表达、HER-2表达,TFEB表达有关,对于乳腺癌可能具有一定的辅助诊断价值。

血清ANXA2、ANXA6、ANXA7与乳腺癌患者聚乙二醇多柔比星脂质体相关新辅助化疗方案治疗疗效的关系研究

目的:探讨血清膜联蛋白A2(ANXA2)、膜联蛋白A6(ANXA6)、膜联蛋白A7(ANXA7)与乳腺癌患者聚乙二醇多柔比星脂质体(PLD)相关新辅助化疗方案治疗疗效的关系。方法:选择2019年11月至2022年12月于山西医科大学第一医院95例行PLD相关新辅助化疗的乳腺癌患者。新辅助化疗前检测所有乳腺癌患者的血清ANXA2、ANXA6、ANXA7水平。单因素和多因素Logistic回归分析影响乳腺癌患者PLD相关新辅助化疗疗效的因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析血清ANXA2、ANXA6、ANXA7预测乳腺癌患者PLD相关新辅助化疗疗效的价值。结果:无效组新辅助化疗前血清ANXA2、ANXA6、ANXA7水平均高于有效组(P<0.05)。TNM分期IIIA期、ER阳性、高水平ANXA2、高水平ANXA6、高水平ANXA7是乳腺癌PLD相关新辅助化疗无效的危险因素(P<0.05)。血清ANXA2、ANXA6、ANXA7单独检测预测乳腺癌PLD相关新辅助化疗无效的曲线下面积分别为0.783、0.774、0.821,三指标联合检测预测的曲线下面积为0.923,高于各指标单独预测效能。结论:高ANXA2、ANXA6、ANXA7水平及TNM分期ⅢA期、ER阳性均是乳腺癌患者PLD相关新辅助化疗无效的危险因素,联合检测血清ANXA2、ANXA6、ANXA7水平可提高对乳腺癌患者PLD相关新辅助化疗疗效的预测效能。

利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除anxa6基因的Caco-2细胞株

【目的】利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除anxa6基因的Caco-2细胞株,为研究大肠杆菌O157:H7效应蛋白EspF与宿主膜联蛋白A6(ANXA6)相互作用及其致病机制奠定基础。【方法】根据CRISPR/Cas9靶向原理设计并合成3个特异性识别anxa6基因的向导RNA(single guide RNA,sgRNA),基于LentiCRISPRv2载体构建LentiCRISPRv2-sgRNA重组质粒,转入293T细胞中,制备sgRNA-Cas9慢病毒,将慢病毒感染Caco-2细胞,经嘌呤霉素筛选阳性细胞,有限稀释法分离培养单克隆细胞,提取单克隆细胞基因组DNA,并对敲除位点附近的DNA片段进行PCR扩增,测序并进行脱靶效应评估;免疫印记法检测ANXA6蛋白表达情况,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)试剂盒检测细胞增殖能力,免疫荧光法检测细胞紧密连接分布情况。【结果】Western blotting及序列测序表明anxa6基因敲除单克隆细胞构建成功;脱靶效应评估结果显示预测的10个脱靶位点均无脱靶现象;基因敲除对细胞增殖能力无明显影响;免疫荧光结果显示,Caco-2及Caco-2anxa6‒/‒细胞紧密连接蛋白ZO-1均沿细胞膜连续分布,结构完整,转染EspF质粒后出现分布不完整、缺口等现象。【结论】成功构建anxa6基因稳定敲除的Caco-2细胞株,初步探索ANXA6蛋白在紧密连接分布中的作用,为进一步研究大肠杆菌O157:H7通过EspF-ANXA6互作介导宿主肠屏障损伤分子机制提供技术支撑。

ANXA6基因变异影响血脂代谢异常的研究进展

膜联蛋白A6(Annexin A6,ANXA6)属于钙依赖性膜和磷脂结合蛋白家族,膜联蛋白家族其主要参与细胞的胞吞和胞吐、质膜修复、信号转导、维持胆固醇稳态、肌动蛋白动态、磷脂酶活性、细胞增殖分化和免疫反应等代谢活动。目前ANXA6基因变异导致肝脏功能受损研究仍较少,当ANXA6基因功能失调时可发生胆固醇稳态的不平衡,间接的影响血脂代谢从而引发心脑血管疾病的发生。本文阐述ANXA6基因变异影响血脂代谢的最新研究进展,为进一步探索ANXA6基因变异对国人心血管疾病的影响奠定一定基础。

转录因子SETDB1和ANXA6在膀胱癌中的表达水平及其临床意义

目的探讨转录因子SETDB1、膜联蛋白A6(ANXA6)在膀胱癌患者中的表达水平及其临床意义。方法选取2012年5月至2013年5月于宜昌市第二人民医院进行手术治疗的53例膀胱癌患者,选取癌组织为膀胱癌组,另选取距癌组织边缘>5 cm的对应癌旁组织标本为癌旁组。采用qRT-PCR检测膀胱癌组织中SETDB1和ANXA6mRNA表达量,免疫组化法检测膀胱癌组织中SETDB1、ANXA6蛋白表达,Pearson法分析SETDB1、ANXA6之间的相关性。术后对患者进行5年随访,采用Kaplan-Meier法分析患者5年的生存情况。结果患者癌组织转录因子SETDB1 mRNA表达水平显著高于癌旁组织,ANXA6 m RNA表达水平显著低于癌旁组织。免疫组化结果显示膀胱癌组织中SETDB1蛋白阳性表达率(66.04%)显著高于癌旁组织(24.53%)(P<0.05),膀胱癌组织中ANXA6阳性表达率(43.39%)显著低于癌旁组织(84.90%)(P<0.05)。SETDB1在膀胱癌组织中的表达与性别、临床分期、浸润深度相关(P<0.05),ANXA6在癌组织中的表达与性别、临床分期相关(P<0.05)。Pearson法相关性分析显示SETDB1、ANXA6呈显著负相关;Kaplan-Meier分析结果显示SETDB1、ANXA6表达与膀胱癌患者无进展生存期(PFS)、总体生存期(OS)明显相关,SETDB1阴性表达PFS(54.36%)、OS(61.08%)显著高于阳性表达PFS(30.06%)、OS(38.77%),ANXA6阳性表达PFS(56.27%)、OS(65.09%)显著高于阴性表达PFS(33.14%)、OS(39.17%)。结论转录因子SETDB1在癌组织中高表达,ANXA6在癌组织中低表达,二者表达呈负相关,且与膀胱癌的发展与患者预后不良相关。

胃癌中FOXM1调控相关分子的表达及其临床意义

目的探寻FOXM1调控的候选关键基因及其在胃癌中的表达,并分析其临床价值。方法在前期构建的高表达FOXM1和敲降FOXM1的胃癌细胞株中检测TWIST、ANXA1、SNAT1和S100A6的mRNA表达,挑选改变显著的分子,应用组织芯片和免疫组化法研究其在135例胃癌和癌旁组织中的表达,用Kaplan⁃Meier法和Cox regression模型分析其预后的价值。结果FOXM1的敲减和过表达效率为对照组的5倍左右。敲降FOXM1下调TWIST、ANXA1和S100A6等的表达,反之亦然。FOXM1、TWIST、ANXA1和S100A6在胃癌组织中的阳性表达率分别为56.3%、49.6%、58.5%和63.7%,其阳性表达与胃癌的进展、转移和不良预后密切相关。结论FOXM1通路在胃癌中发挥了重要作用,阻断该通路有望为胃癌的治疗带来新的途径。

NF-κB信号通路对脂多糖诱导的肠道屏障功能障碍小鼠小肠组织ANXA2表达的影响

目的观察脂多糖诱导的肠道屏障功能障碍小鼠小肠组织ANXA2表达变化,探讨NF-κB信号通路对其表达的影响。方法健康雄性C57BL/6小鼠24只随机分为对照组、脂多糖组、观察组各8只。观察组小鼠连续3d腹腔注射NF-κB信号通路抑制剂Schisantherin A 50mg/(kg·d),对照组、脂多糖组腹腔注射等量生理盐水。3d后,脂多糖组、观察组小鼠腹腔单次注射脂多糖10mg/kg制备急性胃肠损伤肠黏膜屏障功能障碍模型,对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。3组小鼠建模12h全身麻醉后取血,采用ELISA法检测血清二胺氧化酶水平;之后处死小鼠取小肠组织采用HE染色观察小肠组织病理学变化,行Chiu's评分,采用免疫组织化学法检测ANXA2、NF-κB p65、Occludin蛋白表达,采用实时荧光定量PCR法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA相对表达量。结果脂多糖组血清二胺氧化酶水平[(47.51±0.48)ng/L]、Chiu's评分[(2.80±0.13)分]均高于对照组[(39.71±1.41)ng/L、(0.10±0.01)分]、观察组[(40.78±3.56)ng/L、(0.17±0.01)分](P<0.05),对照组与观察组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。对照组小肠黏膜完整;脂多糖组小肠黏膜与黏膜下层分离,绒毛下出现间隙;观察组绒毛下出现间隙。脂多糖组ANXA2、NF-κB p65蛋白平均光密度值(0.19±0.02、0.22±0.04)及TNF-α、IL-6mRNA相对表达量(1.92±0.07、2.26±0.17)均高于对照组(0.11±0.02、0.09±0.02、1.01±0.22、0.93±0.07)、观察组(0.12±0.02、0.13±0.02、1.14±0.13、1.15±0.22)(P<0.05),Occludin蛋白平均光密度值(0.080±0.003)低于对照组(0.110±0.001)、观察组(0.100±0.007)(P<0.05);对照组与观察组ANXA2、NF-κB p65、Occludin蛋白平均光密度值及TNF-α、IL-6mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论肠道屏障功能障碍小鼠小肠组织ANXA2及炎性因子等表达升高,抑制NF-κB信号通路可下调小肠组织ANXA2表达及炎性因子水平,减轻肠道损伤及肠黏膜通透性。