TNRC6C-AS1和miR-129-5p对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探究lncRNA TNRC6C-AS1和miR-129-5p对甲状腺癌(TC)细胞的增殖、迁移和侵袭的影响。方法收集2018年1月至2020年6月期间本院收治的40例甲状腺癌患者的甲状腺肿瘤组织和邻近正常对照甲状腺组织样品。将人甲状腺癌细胞FTC-133分为空载体阴性对照组(空载体组)、miR-129-5p模拟物组(模拟物组)、miR-129-5p抑制剂组(抑制剂组)、sh-TNRC6C-AS1+miR-129-5p抑制剂组(sh-AS1+抑制剂组)、sh-Unc5b组和sh-TNRC6C-AS1(sh-AS1)组。采用qRT-PCR检测甲状腺癌细胞系(NPA87、KAT-5和FTC-133)和正常人甲状腺细胞系HTori3及甲状腺肿瘤组织中TNRC6C-AS1、miR-129-5p和Unc5b的表达水平。采用Western blotting检测TNRC6C-AS1、miR-129-5p和Unc5b的表达水平;CCK-8法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移和侵袭。通过生物信息学和双荧光素酶报告分析预测TNRC6C-AS1、miR-129-5P和Unc5b之间的相互作用。结果与甲状腺癌旁临近正常组织和正常细胞HTori3相比,TC组织和细胞系(NPA87、KAT-5和FTC-133)中的TNRC6C-AS1和Unc5b的表达水平显著升高,miR-129-5p的表达水平显著降低(均P<0.05)。在FTC-133细胞中,与空载体组相比,sh-AS1组的TNRC6C-AS1和Unc5b相对表达水平显著降低,miR-129-5p相对表达水平显著升高(均P<0.01);模拟物组中Unc5b的相对表达水平显著降低,miR-129-5p相对表达水平显著升高(均P<0.01);抑制剂组中miR-129-5p的相对表达水平显著降低(P<0.01);sh-AS1+抑制剂组中miR-129-5p的相对表达量无显著变化(P>0.05)。与空载体组相比,sh-AS1组和sh-Unc5b组FTC-133细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01);模拟物组FTC-133细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.01);抑制剂组FTC-133细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.01);sh-AS1+抑制剂组FTC-133细胞的增殖、迁移和侵袭能力无显著变化(P>0.05)。双荧光素酶报告结果显示,miR-129-5p与AS1-wt的3′-UTR结合,Unc5b为miR-129-5p的靶基因。结论TNRC6C-AS1在TC中作为miR-129-5p的内源竞争RNA,在TC的发生发展中起重要作用,提示TNRC6C-AS1和Unc5b可能是TC治疗的潜在靶点。

长非编码RNA TNRC6CAS1作为ceRNA在肥厚型心肌病发生发展中调控BPTF表达的研究

肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)是一种以心肌细胞肥厚为特征的原发性心肌病,其发病的分子机制尚未明确。本研究整合Gene Expression Omnibus(GEO)数据库中编号GSE130036和GSE36946的数据集。利用R语言对数据集中的RNA表达矩阵进行表达差异性分析。对差异mRNA进行生物功能富集分析,明确研究对象染色质重塑因子以BPTF(bromodomain PHD finger transcription factor)为核心。预测miRNA靶向mRNA和lncRNA的结合位点,构建lncRNATNRC6CAS1,miR-30c-1-3p-BPTF内源竞争RNA(ceRNA)网络。利用实时定量PCR,酶联免疫吸附测定或免疫印迹检测,在肥厚型心肌病临床样本(20例健康人和20例肥厚型心肌病患者外周血)和心肌肥大细胞模型中验证了BPTF和lncRNA TNRC6CAS1表达的明显上调(P<0.001),而miR-30c-1-3p的表达明显下调(P<0.001)。同时,在AC16细胞中对三者的表达相关性进行初步验证。最后,分别沉默BPTF,lncRNA TNRC6CAS1或过表达miR-30c-1-3p可以抑制心肌肥大标志性蛋白质的表达。以上结果表明,lncRNA TNRC6CAS1,miR-30c-1-3p,BPTF构成的ceRNA网络可能参与调控肥厚型心肌病心肌肥大病理现象的产生。三者作为潜在的肥厚型心肌病致病分子,有望成为新的检测和治疗靶点。