猪Tob1基因内含子的克隆和序列分析

为了获取Tob1基因完整的基因组信息,试验通过生物信息学检索比较分析,设计引物,克隆获得猪Tob1基因的内含子序列。结果表明:猪Tob1基因包含2个外显子和1个内含子,外显子和内含子的剪接符合GT-AG规则,其中两个外显子的碱基序列长度分别为260 bp、1 182 bp,内含子序列长度为1 912 bp,其中A、C、G、T四种碱基分别占23.9%、21.3%、26.7%、28.1%,A+T(52.0%)的含量高于G+C(48.0%)的含量。

γ射线对人淋巴细胞Tob1基因转录表达的影响

目的研究γ射线对人周围血淋巴细胞Tob1基因转录表达的影响。方法对数生长期的淋巴细胞,分别给予1、2、3、4、5、6Gy的60Coγ射线照射,照射后12、24h,以及2Gy照射后4、8、12、24、36、48、72h分别提取总RNA,反转录成cDNA。利用实时荧光定量聚合酶链反应技术,检测各组Tob1基因表达改变。结果2Gy照射后4、24、36h,Tob1 mRNA表达水平升高,均是对照组(未照射组)的1.99倍以上(P<0.05)。1～5Gy范围内照射后24h,Tob1 mRNA表达水平随着剂量的增加而增加差异有统计学意义(P<0.05)。在1～5Gy范围内照射后12h,Tob1 mRNA表达水平和对照组比较差异无显著性(P>0.05);6Gy时其表达水平达最高,为对照组的16.37倍(P<0.05)。结论γ射线照射后人淋巴细胞Tob1基因的表达,在一定剂量范围内的特定时间内呈剂量依赖性上调,Tob1可能会发展为核事故受照射人员的分子生物学剂量标记物。

抗增殖蛋白Tob1对人类宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性影响的实验研究

为探讨抗增殖蛋白家族成员Tob1(transducer of ErbB2,1)对宫颈癌细胞系HeLa放射敏感性的影响,构建可表达Tob1基因全长的重组质粒pcDNA3.0-Tob1(pc3/Tob1),采用脂质体介导转染入HeLa细胞,经G418筛选出阳性耐抗克隆。通过集落形成实验研究Tob1对HeLa细胞放射敏感性的影响,借助流式细胞术和WesternBlot法检测相关分子机制。结果显示,较之HeLa母细胞和转染"空"质粒pcDNA3.0的HeLa/pc3细胞,转染pc3/Tob1后HeLa细胞放射敏感性明显增加;Tob1蛋白高表达增加了HeLa细胞中由辐射诱导的细胞凋亡,提高了由辐射引起的Bax蛋白的表达,降低了Bcl2蛋白表达。上述结果提示Tob1提高了HeLa细胞对电离辐射的敏感性,其机制可能与其上调Bax蛋白的表达、下调Bcl2蛋白的表达,从而增加由辐射诱导的细胞凋亡有关。

人类ErbB-2转录因子1基因相关信号通路的研究进展

人类ErbB-2转录因子1（TOB1）作为TOB／BTG抗增殖蛋白家族中的一员，具有抑制细胞增殖的能力，并且通过参与调节多种信号通路对细胞的增殖、周期、生长、凋亡、代谢及发育等过程产生重要的影响。研究表明TOB1还与肿瘤的发展密切相关，通过参与调节多种信号通路抑制肿瘤的发生和发展。文章对TOB1相关信号通路的研究进展进行综述。

TOB1高表达抑制肺癌A549细胞体外迁移和侵袭

目的:探讨TOB1(transducer of ErbB 2,1)高表达对人肺癌A549细胞体外迁移和侵袭的影响。方法:应用RT-PCR法检测人支气管上皮细胞HBE和10种肺癌细胞中TOB1、PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)、乳腺癌转移抑制基因1(breast cancer metastasis suppressor 1,BRMS1)、RHOC(ras homolog gene family,member C)和NME1(non-metastatic cells 1)mRNA的表达水平;将重组表达载体质粒pcDNA3.0-TOB1和"空载体"质粒pcDNA3.0转染到A549细胞中,建立TOB1高表达的A549/TOB1细胞和对照组A549/PC3细胞,应用体外划痕和Transwell实验检测细胞的体外迁移和侵袭能力,RT-PCR法检测细胞中PTEN、BRMS1、RHOC和NME1 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2,MMP2)和MMP9蛋白的表达。结果:10种肺癌细胞中TOB1 mRNA的表达水平明显低于HBE细胞(P<0.05),不同细胞株中TOB1 mRNA与PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平间呈正相关(P<0.05)。A549/TOB1细胞的体外迁移和侵袭能力明显低于A549细胞(P<0.05)。A549/TOB1细胞中PTEN、BRMS1和NME1 mRNA的表达水平明显高于A549细胞(P<0.05),而RHOCmRNA的表达水平明显低于A549细胞(P<0.05);A549/TOB1细胞中α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平明显低于A549细胞(P<0.05)。结论:外源性TOB1高表达可以明显抑制肺癌A549细胞的体外转移和侵袭,其机制可能与TOB1调控PTEN、BRMS1、RHOC和NME1的表达,进一步下调α-N-catenin、β-catenin、γ-catenin、MMP2和MMP9蛋白的表达水平有关。