Toll样受体-9在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的明确Toll样受体-9(Tolllike receptor-9,TLR-9)在喉鳞状细胞癌及癌旁正常组织的表达及分布,并探讨其在喉癌发病机制中的作用及临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),免疫印迹(Westernblot)及免疫组织化学技术检测TLR-9在喉癌组织和癌旁正常组织中的表达和分布。结果RT-PCR检测表明,TLR-9mRNA在喉癌及喉正常组织内均有表达,TLR-9在喉癌组织中的表达较癌旁正常组织表达明显增多(t=2.743,P=0.017),并且在喉癌组织Ⅰ期+Ⅱ期与Ⅲ期+Ⅳ期表达之间差异具有统计学意义(t=1.787,P=0.040)。蛋白质免疫印迹检测发现,癌旁正常组织无TLR-9表达,在喉癌组织Ⅰ期+Ⅱ期与Ⅲ期+Ⅳ期表达之间差异具有统计学意义(t=1.701,P=0.015),TLR-9的表达位置在180kDa。免疫组化染色发现:TLR-9阳性表达为黄色,主要分布在肿瘤细胞胞浆内。结论TLR-9可能通过免疫机制参与喉癌的发展过程。

Toll样受体-9在肾小球肾炎进展中的作用

目的:通过观察CpG-ODN对肾小球肾炎刺激后Toll样受体-9(TLR9)的变化,探讨TLR9在肾小球肾炎发生、发展中的变化及作用。方法:Wistar雄性大鼠,随机分为正常组(N组)、抗-thy1.1肾炎模型组(M组)、模型+CpG-ODN注射组(CpG组)、模型+GpC-ODN注射组(GpC组)。各组大鼠分别于用药后2、4、6和8周留取24 h尿;实验第8周留取24 h尿,心脏采血、留取肾脏后处死。用考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白定量;血清学方法检测血清白蛋白和肾功能;肾脏组织用于肾脏病理检查、NF-κB p65免疫组化染色,RT-PCR法检测肾脏组织内TLR9、INF-γ及IL-6 mRNA的表达。结果:TLR9在M组轻度表达,在给予CpG-ODN刺激后,TLR9、IL-6和IFN-γmRNA在肾脏表达率与M组比较均明显增加,24 h尿蛋白漏出量增多,血清白蛋白显著降低;光镜下可见病理改变明显加重,MCs弥漫性中、重度增生,部分肾小球有细胞性新月体形成,多处粘连,毛细血管襻开放受限,系膜区可见单核巨噬细胞浸润。结论:TLR9介导的趋化因子和趋化因子受体表达加重肾小球肾炎的生化及病理改变,TLR9介导的免疫反应是引起肾小球肾炎不断进展的机制之一。

Toll样受体-9的研究进展

Toll样受体-9(Toll-like receptor 9,TLR9)是哺乳动物TLRs家族中一员,作为细胞表面的天然模式识别受体,主要参与免疫刺激序列(CpG序列)激活免疫细胞的信号传导,从而在天然抗感染免疫及联系天然免疫和获得性免疫中发挥重要作用。通过对TLR9-CpG作用通路的研究,将促进天然免疫机制研究的进一步深入,有利于解决诸如:CpG佐剂、DNA疫苗、CpG抗感染、抑制肿瘤、预防过敏反应等实际应用过程中存在的问题。

CpG DNA特异性识别的关键蛋白Toll样受体-9

Toll样受体在对抗外来病原微生物的天然免疫应答中发挥中心作用。新发现的一种分子识别模型受体Toll样受体-9(TLR9),能特异性识别CpGDNA并起动信号转导级联反应,在不同种类中的TLR9具有对序列识别的特异性。本文概述国外在TLR9识别作用机制和生物学活性研究中已取得的进展,并提出了今后研究的发展方向。

羟氯喹对Toll样受体-9介导的干扰素-α表达水平的影响

目的初步探讨羟氯喹对Toll样受体-9(TLR-9)介导的人外周血单个核细胞(PBMC)中IFN-α表达水平的影响。方法提取健康志愿者的PBMC。分别将PBMC与0、0.375、0.75、1.5、3.0、6.0μg/ml TLR-9激动剂ODN 2216共同培养12 h,以及与1.5μg/ml ODN 2216共同培养0、6、12、24、48 h,从细胞水平模拟SLE高表达IFN-α。然后用1.5μg/ml ODN 2216与PBMC共同培养6 h,加入羟氯喹1.25μg/ml(实验组)及等量的培养基(阳性对照组),在未加入ODN 2216的PBMC内加入等量的培养基(空白对照组),继续培养12 h后用实时荧光定量PCR法检测并比较各组PBMC中IFN-αmRNA表达水平。结果 PBMC与1.5μg/ml ODN 2216共同培养6 h时,IFN-αmRNA表达水平最高(P<0.01)。阳性对照组PBMC中IFN-αmRNA表达水平明显高于空白对照组(P<0.01)。与阳性对照组相比,实验组PBMC中IFN-αmRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论羟氯喹可明显抑制经TLR-9介导的IFN-α高表达。

雷公藤内酯醇对系统性红斑狼疮患者树突状细胞Toll样受体-9表达的影响

目的:检测雷公藤内酯醇对体外培养的系统性红斑狼疮(SLE)患者树突状细胞(DC)Toll样受体-9(TLR9)表达的影响。方法:体外培养SLE患者DC,用终浓度分别为20、40、60μg/L的雷公藤内酯醇刺激细胞3、6、12h,混合淋巴细胞反应观察DC刺激T细胞后T细胞增殖的变化,RT-PCR检测TLR9 mRNA在DC中的表达情况。结果:与健康对照者相比,SLE患者DC表达CD11c+、CD123+的百分率明显下降(P<0.05);雷公藤内酯醇以剂量依赖的形式抑制SLE患者DC刺激同种T细胞增殖;以剂量和时间依赖的形式下调SLE患者DCTLR9 mRNA表达。结论:雷公藤内酯醇可抑制SLE患者DC刺激同种T细胞增殖,雷公藤内酯醇可能通过下调SLE患者DCTLR9的表达而发挥免疫抑制作用。

人Toll样受体-9胞外区N端蛋白的表达及其抗体的制备

目的: 构建人Toll 样受体-9(hTLR-9)基因5′端序列的表达质粒,在大肠杆菌中表达,并以表达的hTLR-9-N免疫小鼠制备抗体.方法: 构建 hTLR-9 基因5′端(707～1 167 bp)的硫氧还蛋白(thioredoxin)融合表达质粒pET32a-hTLR-9-N.将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)中,在0.5 mmol/L IPTG诱导下表达.表达产物用SDS-PAGE 进行鉴定.以8 mol/L 尿素溶解的包涵体作为免疫原,免疫昆明种小鼠制备抗hTLR-9-N的抗体.结果:融合表达质粒pET32a-hTLR-9-N在E.coli BL21 (DE3)中以相对分子质量(Mr)为31 000的包涵体形式表达;Western blot分析证明hTLR-9-N在大肠杆菌中得到正确表达.表达的目的蛋白初步纯化后的纯度达90%以上;以hTLR-9-N为抗原制备的抗血清效价为1∶25 600; 该抗血清可以与转染后稳定表达全长hTLR-9的HEK293细胞产生结合反应.结论:成功地在大肠杆菌中表达hTLR-9 N末端蛋白,制备的抗hTLR-9-N抗体可特异性结合表达全长hTLR-9的真核细胞.

Toll样受体-4、9基因多态性与胃癌发病风险的相关性研究

目的研究Toll样受体(TLR)-4、TLR-9基因多态性与胃癌发病风险的相关性。方法选取2016年1月至2019年12月招募江苏省无锡市及安徽省宣城市325例胃癌患者(病例组)及同期招募该地区经体检检测结果为健康且自述无消化道疾病史的人群402例(对照组)作为研究对象,TLR-4、TLR-9基因多态性分析采用Mass-array基因芯片分析,幽门螺杆菌(Hp)感染检测采用免疫胶体金法检测抗体。结果病例组中吸烟、饮酒比例高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。TLR-9 rs187084基因多态性位点的GA、GA/GG基因型与胃癌发病风险相关。年龄>60岁胃癌患者的TLR-9 rs187084基因多态性位点的GA及GA/GG基因型均与胃癌发病风险相关(P<0.05)。非贲门部位的胃癌患者TLR-9 rs187084基因多态性位点的GA及GA/GG基因型均与胃癌发病风险相关(P<0.05)。结论年龄>60岁及非贲门部位胃癌患者TLR-9 rs187084基因多态性位点的GA及GA/GG基因型均与胃癌发病风险相关。

小鼠视神经损伤后视网膜中TLR-9与MyD88表达变化

目的:探讨Toll样受体-9(TLR-9)与髓样分化因子(MyD88)在小鼠视神经损伤(ONI)后视网膜中的表达变化。方法:选取8周大小的雄性C57BL/6J小鼠36只,随机分为6组:空白对照组(未做任何处理)、ONI 1d组(视神经损伤后1d取材)、ONI 3d组(视神经损伤后3d取材)、ONI 5d组(视神经损伤后5d取材)、ONI 7d组(视神经损伤后7d取材)、ONI 14d组(视神经损伤后14d取材)。分组后通过视神经夹持的方法制作小鼠视神经损伤模型,利用RT-qPCR与Western-blot检测各组小鼠视网膜中TLR-9与MyD88的mRNA和蛋白水平。结果:ONI 1d组视网膜中TLR-9与MyD88的mRNA和蛋白水平与空白对照组比较无差异(P>0.05);ONI 3d、ONI 5d、ONI 7d、ONI 14d组视网膜中TLR-9与MyD88的mRNA和蛋白水平与空白对照组比较均明显增加(P<0.01)。与空白对照组比较视网膜中TLR-9与MyD88的mRNA和蛋白水平在小鼠ONI 3d开始升高(P<0.01),ONI 5d达到峰值(P<0.001),ONI 7d开始逐渐下降(P<0.01)。结论:小鼠视神经损伤能够激活视网膜中TLR-9与MyD88表达,TLR-9与MyD88可能在视神经损伤的进程中起重要作用。

TLR-9在宫颈鳞癌组织中的表达及其与MVD和VEGF的关系

目的检测宫颈鳞癌组织中Toll样受体-9(TLR-9)表达及其与微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测48例宫颈鳞癌和20例正常宫颈上皮组织中TLR-9表达,用CD34单克隆抗体标记微血管并计算MVD,同时采用酶联免疫吸附法检测宫颈鳞癌组织中VEGF水平。采用受试者工作特征曲线评价TLR-9表达诊断宫颈鳞癌的效能。结果宫颈鳞癌组织中TLR-9受体的阳性表达率为83.3%(40/48),组织MVD和VEGF水平分别为36.8±7.25和(25.58±3.49)ng/mg,均高于正常宫颈上皮组织(P<0.05);TLR-9受体的高表达与肿瘤的临床分期和基质金属蛋白酶9表达有关(P<0.05),与组织学分级及淋巴结转移无关(P>0.05);TLR-9受体表达阳性者的MVD和VEGF水平明显高于阴性者(P<0.05)。组织TLR-9表达在宫颈鳞癌诊断中的效能较好,其AUC、灵敏度和特异度分别为0.830、82.7%和76.1%。结论 TLR-9高表达可能参与宫颈鳞癌的发生发展及浸润转移,并与宫颈鳞癌的微血管新生密切相关。

TLR9-JNK信号通路调控缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖

目的研究Toll样受体-9(toll-like receptor 9,TLR9)在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法采用MTT、Western blot、PCR法检测RPASMCs的相对增殖水平、蛋白表达水平、mRNA转录水平。①3%O_(2),36 h处理RPASMCs,构建缺氧诱导RPASMCs增殖的细胞模型,检测细胞相对增殖水平、TLR9、磷酸化c-jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,p-JNK)蛋白表达水平。②缺氧条件下分别使用小干扰RNA序列(small interfering RNA sequence,siRNA)或20μmol/L TLR9激动剂ODN 1826敲低或活化TLR9,检测RPASMCs的细胞增殖水平和c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平。③缺氧时使用5μmol/L JNK抑制剂SP600125处理RPASMCs,检测缺氧条件下细胞相对增殖水平。④缺氧时复合使用20μmol/L TLR9激动剂ODN 1826和5μmol/L JNK抑制剂SP600125处理RPASMCs,检测RPASMCs的JNK磷酸化水平和相对增殖水平。结果缺氧组RPASMCs的相对增殖水平[(1.30±0.07),P<0.01]以及TLR9蛋白水平[(1.70±0.22),P<0.05]和JNK磷酸化[(1.83±0.18),P<0.01]都显著高于常氧组。敲低TLR9显著抑制缺氧诱导的RPASMC增殖[(0.64±0.09),P<0.01]并减少JNK磷酸化[(0.49±0.01),P<0.001]。TLR9激动剂显著促进RPASMCs增殖[(2.01±0.08),P<0.001]且增加JNK的磷酸化[(2.11±0.33),P<0.01]。JNK抑制剂抑制RPASMCs增殖[(0.70±0.06),P<0.05]。与缺氧+TLR9激动剂组相比,缺氧+TLR9激动剂+JNK抑制剂组RPASMCs JNK磷酸化[(0.82±0.14)vs(1.59±0.30),P<0.001]和相对增殖水平[(1.08±0.05)vs(1.35±0.02),P<0.001]都显著降低。结论缺氧时TLR9通过激活JNK通路促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。

橙皮苷对果糖-高脂饮食诱导非酒精性脂肪性肝病小鼠肝脏中TLR4和TRL9表达影响

目的研究橙皮苷对果糖-高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏Toll样受体-4(TLR4)和Toll样受体-9(TLR9)表达的影响。方法60只昆明小鼠随机分为正常、模型、辛伐他汀、橙皮苷低、中和高剂量组,n=10,10%果糖水+高脂饲料诱导造模,后接受4周治疗,治疗结束后收集血清检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TG)、游离脂肪酸(FFA)、白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,收集肝脏苏木精伊红(HE)染色检测肝脏病理学,以及采用实时荧光定量PCR和Western Blotting检测肝脏组织Toll样受体-4(TLR-4)和TLR-9蛋白及m RNA表达。结果肝脏组织病理学可见正常组正常,而模型组则出现弥漫性脂肪颗粒浸润,与模型组相比,各治疗组均明显改善;与正常组相比,模型组AST、ALT、TG、FFA、IL-1和TNF-α均明显升高(P<0.05),与模型组相比,各治疗组上述指标均明显降低(P<0.05),此外橙皮苷高剂量组AST、ALT、TG和FFA与辛伐他汀组相比并没有差异,而IL-1和TNF-α则明显低于辛伐他汀组(P<0.05);与正常组相比,模型组TLR-4和TLR-9蛋白表达均明显升高(P<0.05),各治疗组则明显降低,此外橙皮苷高剂量TLR-4和TLR-9明显低于辛伐他汀组(P<0.05)。结论橙皮苷能够明显改善果糖和高脂饮食诱导的脂肪肝病肝功能和血脂,同时降低炎症刺激,其作用机制与其可下调肝脏中TLR-4和TLR-9表达有关。

糖尿病足感染患者病原学及其与Toll样受体信号通路的关系

目的 分析糖尿病足感染患者病原菌分布、Toll样受体(TLR)信号通路表达变化及其与感染的关系。方法 选择2019年1月-2021年12月广西贵港市人民医院收治的糖尿病足感染患者308例(糖尿病足Wagner分级2级58例、3级103例、4级114例、5级33例)纳入研究组,单独糖尿病足患者314例纳入对照组;分析两组临床资料,糖尿病足感染患者病原菌特征,研究组、对照组及不同感染程度患者TLR信号通路指标,通过Pesrson相关性分析法分析TLR信号通路与血清指标的相关性,通过Spearman相关性分析TLR信号通路与感染程度的相关性。结果 研究组患者血清甘油三酯(TG)、胰岛素(FINS)水平高于对照组,25羟维生素D[25(OH)D]水平低于对照组(P<0.05);308例糖尿病足感染患者共分离病原菌375株,其中革兰阴性菌232株占61.87%,革兰阳性菌137株占36.53%,真菌6株占1.60%;研究组外周血TLR-2、TLR-4、TLR-9水平高于对照组(P<0.05);2级、3级、4级、5级糖尿病足感染患者外周血TLR-2、TLR-4、TLR-9水平呈升高趋势(P<0.05);TG、FINS与TLR-2、TLR-4、TLR-9呈正相关(P<0.05);25(OH)D与TLR-2、TLR-4、TLR-9呈负相关(P<0.05);TLR-2、TLR-4、TLR-9与感染程度呈正相关(P<0.05)。结论 糖尿病足感染患者病原菌以革兰阴性菌为主,TLR-2、TLR-4、TLR-9表达增加,且TLR-2、TLR-4、TLR-9水平与病情进展及疾病相关血清指标密切相关,可作为临床诊治的新靶点。

TLR9基因rs352140位点多态性与重症肌无力的关系

目的探讨TLR9基因rs352140位点多态性与重症肌无力(MG)的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段多态性(PCR-RFLP)方法检测MG患者TLR9基因rs352140位点的多态性,比较各基因型和等位基因在MG患者不同性别、发病年龄、胸腺瘤伴发情况、Osserman分型、最大严重程度等亚组中的分布并观察其与MG严重程度和糖皮质激素近期疗效的关系。结果 MG组和对照组间以及MG各亚组间基因型和等位基因频率无统计学差异(P>0.05);糖皮质激素近期疗效差的患者中全身型比例高于眼肌型(OR=3.592,P=0.03),伴胸腺瘤者比例高于不伴胸腺瘤者(OR=4.350,P=0.016);糖皮质激素疗效差者治疗前平均定量MG评分(QMG)高于疗效好者(P=0.026);经多因素Logistic回归分析发现治疗前QMG评分越高激素疗效越差(OR=1.154,P=0.043)。结论 TLR9基因rs352140位点多态性与MG易感性无相关性,也与激素近期疗效无相关性。

CpG-ODN对肾小球肾炎进展的影响

目的观察CpG-ODN对肾小球肾炎进展的影响。方法将Wistar雄性大鼠随机分为N组(正常对照)、M组(模型对照)、CpG组和GpC组。N组大鼠经尾静脉注射生理盐水2.5ml/(kg·d),其余3组大鼠经尾静脉注射抗-thy1.1单克隆抗体2.5ml/(kg·d),隔日1次,共3次。注射抗-thy1.1单克隆抗体后,隔天,CpG组经尾静脉注射CpG-ODN,300μg/只,GpC组经尾静脉注射GpC-ODN,300μg/只,隔日注射,共3次。各组大鼠分别于用药前和第1针注射后1周测定尿蛋白;用药后第8周留取大鼠24h尿、血清及肾脏组织,检测24h尿蛋白定量、血清白蛋白和肾功;肾脏组织用于肾脏病理检查以及RT-PCR法检测TLR-9mRNA的表达。结果CpG组与M组和GpC组相比,血清白蛋白含量明显降低,且差异有显著意义;M组、CpG组和GpC组在给药后1周均出现尿蛋白,在给药后8周,24h尿蛋白含量明显增多;CpG组与M组相比,TLR-9mRNA在肾脏的表达水平明显增加,且差异有显著意义;GpC组与M组相比,差异无显著意义;光镜下可见CpG组肾组织病理改变明显加重。结论天然CpG-ODN可促进肾小球肾炎病情加重,TLR-9可能在其发生机理中起重要作用。

CHB并EBV感染患者外周血单个核细胞中TLR4、TLR9表达及临床意义

目的研究慢性乙肝(CHB)合并EB病毒(EBV)感染患者外周血单个核细胞中Toll样受体4(TLR4)、Toll样受体9(TLR9)表达水平及临床意义。方法选取2017年3月至2020年3月江苏省中医院收治的54例CHB合并EBV感染患者作为研究对象,另选取本院同期收治的25例CHB未合并EBV感染患者作为对照组1,25例仅感染EBV病毒患者作为对照组2。检测所有患者丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、碱性磷酸酶(ALP)水平,采用流式细胞术检测TLR4、TLR9阳性表达情况,采用Spearman分析数据间相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线对比两组患者生存情况。结果研究组患者外周血单个核细胞TLR4、TLR9阳性表达情况显著高于两组对照组,差异有统计学意义(P<0.05);研究组患者的血ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、ALP水平均明显高于两组对照组,差异有统计学意义(P<0.05);TLR4阳性表达与血ALT、AST、DBIL及ALP水平呈正相关,TLR9阳性表达与血ALT、AST、IBIL及ALP水平呈正相关;TLR4、TLR9高表达患者疾病进展率高于低表达患者,差异有统计学意义(χ^(2)=6.135、5.684,P<0.05);TLR4、TLR9高表达患者15个月生存率较低表达患者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CHB合并EBV感染患者外周血单个核细胞TLR4、TLR9阳性表达增多,与肝功能损伤加重和疾病进展相关。

TLR9信号通路参与急性肺损伤的作用机制研究

目的研究Toll样受体-9在急性肺损伤中的作用机制，为临床诊疗提供理论依据。方法分离40例急性肺损伤患者的外周血单个核细胞，采用RT—PCR检测Toll样受体-9mRNA表达，外周血单个核细胞（PBMC）经过非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列的寡脱氧核苷酸（CpGODN）和不含非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸序列的寡脱氧核苷酸（non—CpGODN）、空白培养三种形式培养72h。采用3H—TdR掺入法测定PBMC增值变化，采用流式细胞仪检测T细胞亚群比例、T细胞表面CD69分子变化及CD8＋T细胞内IFN-γ和IL-4的表达。采用ELISA法对PBMC上清液IFN-α的浓度，并评价其对氯喹和抑制性ODN的反应程度。结果急性肺损伤患者PBMC表达TLR9mRNA的表达强度为（0．75±0．08），与健康组（0．76±0．09）比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CpGODN诱导急性肺损伤患者PBMC增殖（P〈0．05），增加CD3＋T细胞表面CD69分子的表达（P〈0．05）；增强CD8＋T细胞产生IFN-γ的能力（P〈0．05）；增强CD4＋T／CD8＋T比值（P〈0．05）；CpGODN可促进IFN-α的分泌（P〈0．05）；氯喹和抑制性ODN会抑制CpGODN产生IFN—α。结论TLR9参与急性肺损伤患者的免疫调节，其激活效应包括促进PMBC活化、增加PBMC中CD4＋T的比例，诱导并增殖IFN-α产生，促进CD8＋T分泌IFN-γ。

菊苣酸调控TLR9/NF-κB通路改善脓毒症小鼠肠损伤研究

目的研究菊苣酸对脓毒症小鼠肠损伤的影响及作用机制。方法60只雄性C57小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松(5 mg/kg)组和菊苣酸高、中、低剂量(40、20、10 mg/kg)组,每组10只。各给药组ip相应药物3 d后,采用盲肠结扎穿孔手术(cecal ligation and puncture,CLP)诱导建立脓毒症小鼠模型。造模成功后连续给药48 h,采用苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肠组织病理变化;采用ELISA法测定肠组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β水平;取对照组、模型组和菊苣酸中剂量组的肠组织样本,基于Illumina测序平台进行转录组学分析;采用Western blotting检测肠组织Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65,NF-κB p65)、p-NF-κB p65和干扰素调节因子7(interferon regulatory factor 7,IRF7)蛋白表达。结果与模型组比较,各给药组肠黏膜损伤程度明显改善,肠组织炎症因子水平均显著降低(P<0.05、0.01)。转录组学分析显示,与对照组比较,模型组共分析出1140个差异表达基因;与模型组比较,给药组共分析出497个差异表达基因,差异基因均富集于NF-κB信号通路。与模型组比较,菊苣酸给药后肠组织TLR9、MyD88、p-NF-κB p65和IRF7蛋白表达水平均显著降低(P<0.05、0.01)。结论菊苣酸可通过TLR9/NF-κB信号通路改善脓毒症诱导的肠黏膜损伤。

白芍总苷下调果糖-高脂诱导大鼠非酒精性脂肪性肝病ERK1/2,TLR4和TRL9蛋白表达的作用

目的观察白芍总苷对果糖-高脂诱导非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝脏组织胞外信号调节激酶-1/2(p-ERK1/2)、Toll样受体-4(TLR4)和Toll样受体-9(TLR9)蛋白的表达。方法 SD大鼠随机分为正常对照组和果糖-高脂诱导造模组,后者连续10周果糖-高脂喂饲;第6周末建立疾病模型后,病鼠随机分为模型组、二甲双胍组(200mg·kg-1)、白芍总苷低剂量组(100 mg·kg-1)和高剂量组(200 mg·kg-1),每组均为10只。用药4周后处死所有实验大鼠,观察上述药物对血清空腹血糖(FBG),胰岛素含量(FIns),胰岛素敏感指数(ISI),胆固醇(TC),低密度脂蛋白-胆固醇(LDLC),高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C),三酰甘油(TG),游离脂肪酸(FFA)含量,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷胱甘肽转移酶(GST)活性和肝脏指数(liver index),以及采用蛋白质印迹法检测肝脏组织p-ERK1/2、Toll样受体-4、TLR9蛋白表达。结果与正常大鼠比较,模型大鼠血糖、胰岛素、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇、三酰甘油及游离脂肪酸含量、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和谷胱甘肽转移酶的活性单位、肝脏指数、p-ERK1/2、Toll样受体-4和TLR9蛋白表达明显上调(P<0.01或P<0.05),胰岛素敏感指数水平及高密度脂蛋白-胆固醇含量明显降低(P<0.01),二甲双胍和白芍总苷低、高剂量组均能改善此现象(P<0.01或P<0.05),但对丙氨酸氨基转移酶的含量改变没有统计学差异(P>0.05)。结论白芍总苷能改善果糖-高脂诱导非酒精性脂肪性肝病大鼠糖脂代谢异常及拮抗胰岛素抵抗,增强胰岛素敏感性,改善肝功能;其作用机制与白芍总苷下调肝脏组织p-ERK1/2、Toll样受体-4、TLR9蛋白表达作用有关。

乌司他丁联合奥曲肽对重症急性胰腺炎患者炎症风暴和肺损伤的作用及机制

目的探讨乌司他丁联合奥曲肽对重症急性胰腺炎(SAP)患者炎症风暴和肺损伤的影响及其机制研究。方法前瞻性选择2016年1月至2019年12月西安交通大学第二附属医院收治的60例SAP患者为研究对象,采用随机数字表法分为对照组和干预组,每组30例。对照组给予包括奥曲肽在内的常规治疗,干预组在对照组的基础上联合应用乌司他丁。治疗7 d后,采用免疫散射比浊法检测并比较两组超敏C反应蛋白(hs-CRP),电化学发光法检测并比较两组白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),流式细胞术检测并比较两组单核细胞Toll样受体(TLR4、TLR9)水平;采用Pearson法分析患者单核细胞TLR4、TLR9与炎症因子IL-6及TNF-α的关系,并比较两组患者7 d内肺损伤发生率及严重程度。结果干预前,两组患者hs-CRP、IL-6、TNF-α等炎症反应指标及单核细胞TLR4、TLR9水平均无统计学差异(P>0.05);干预7 d后,两组上述指标均较干预前降低(P<0.05),且干预组上述指标的下降程度均大于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析表明,外周血单核细胞TLR4、TLR9表达情况与IL-6、TNF-α均呈正相关性。7 d内干预组患者肺损伤发生率及严重程度均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁联合奥曲肽治疗有助于抑制SAP患者炎性反应,减轻肺损伤,其机制可能与抑制TLR4、TLR9表达及调控TLR4、TLR9介导的炎症信号转导有关。