伏立诺他调节高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号通路对脑出血小鼠神经功能损伤的影响

目的 探讨伏立诺他(SAHA)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/Toll样受体4(TLR4)信号通路对脑出血(ICH)小鼠神经功能损伤的影响。方法 通过注射Ⅶ型胶原酶建立ICH小鼠模型。将造模小鼠随机分为ICH组、SAHA组(15 mg/kg SAHA)、重组高迁移率组蛋白B1(rHMGB1)组(16μg/kg rHMGB1)、SAHA+rHMGB1组(16μg/kg rHMGB1+15 mg/kg SAHA),每组10只;以不注射Ⅶ型胶原酶的10只小鼠为假手术组。干预结束后,对小鼠进行神经功能缺损评分(NDS),检测小鼠认知障碍状况及脑水肿变化、血清TNF-α及IL-1β水平、神经元细胞凋亡数量、血肿周围组织中HMGB1/TLR4通路相关蛋白的表达。结果 与ICH组比较,假手术组、SAHA组NDS评分、脑水肿率、神经元凋亡数量、TNF-α水平、IL-1β水平及HMGB1、TLR4蛋白表达显著降低,分辨指数显著升高(均P<0.05),rHMGB1组NDS评分、脑水肿率、神经元凋亡数量、TNF-α水平、IL-1β水平及HMGB1、TLR4蛋白表达显著升高,分辨指数显著降低(均P<0.05)。与SAHA+rHMGB1组比较,SAHA组NDS评分、脑水肿率、神经元凋亡数量、TNF-α水平、IL-1β水平及HMGB1、TLR4蛋白表达显著降低,分辨指数显著升高(均P<0.05),rHMGB1组NDS评分、脑水肿率、神经元凋亡数量、TNF-α水平、IL-1β水平及HMGB1、TLR4蛋白表达显著升高,分辨指数显著降低(均P<0.05)。结论 SAHA抑制HMGB1/TLR4信号通路的炎症反应,改善ICH小鼠神经功能。

薏苡附子败酱散通过抗三结构域蛋白21-Toll样受体4-t-核因子-κB信号通路对类风湿关节炎MH7A细胞的影响

目的观察不同浓度薏苡附子败酱散对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维细胞(MH7A)增殖、凋亡及炎症反应的影响,探究其作用机制。方法2022年2―8月,大鼠用不同浓度薏苡附子败酱散及蒸馏水灌胃制备含药血清;20μg/L的TNF-α处理的MH7A细胞记为TNF-α组,TNF-α+含药血清处理的MH7A细胞记为薏苡附子败酱散低浓度组、薏苡附子败酱散中浓度组、薏苡附子败酱散高浓度组,正常培养的MH7A细胞标记为对照组。细胞计数试剂盒(CCK8)、流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞的存活、凋亡及白细胞介素(IL)-1β、干扰素(IFN)-γ;蛋白质印迹法(WB)检测基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-9、抗三结构域蛋白21(TRIM21)、Toll样受体4(TLR4)、t-核因子(NF)-κB p65、磷酸化(p)-NF-κB p65、p-NF-κB抑制因子(IκB)-α和t-IκB-α蛋白表达。pcDNA 3.1组(转染空载体)、pcDNA+TRIM21组(转染pcDNA 3.1+TRIM21)、薏苡附子败酱散中浓度+si-con组(转染si-con+4.70 g/kg含药血清)、薏苡附子败酱散中浓度+si-TRIM21组(转染si-TRIM21+4.70 g/kg含药血清)。结果与对照组相比,TNF-α组细胞存活率(105.07±1.90比185.67±3.06)、TRIM21(0.56±0.02比0.68±0.04)、MMP-3(0.18±0.00比0.63±0.02)、MMP-9(0.39±0.01比0.82±0.01)、TLR4(0.25±0.02比0.68±0.07)、p-NF-κB p65(0.24±0.01比0.68±0.06)、p-IκB-α(0.22±0.01比0.55±0.04)蛋白表达和IL-1β(31.65±0.66比101.93±0.60)、IFN-γ(8.53±0.16比63.76±1.35)含量均显著升高,凋亡率(6.54±0.06比1.17±0.08)均显著降低;与TNF-α组相比,薏苡附子败酱散低浓度组(185.67±3.06比153.77±3.09;0.68±0.04比0.37±0.02;0.63±0.02比0.47±0.02;0.82±0.01比0.73±0.01;103.2±0.7比92.93±0.85;66.3±1.45比54.47±1.46;0.68±0.07比0.53±0.05;0.68±0.06比0.53±0.06;0.55±0.04比0.47±0.01;1.84±0.07比6.67±0.28)、薏苡附子败酱散中浓度组(185.67±3.06比136.23±1.57;0.68±0.04比0.57±0.02;0.63±0.02比0.37±0.02;0.82±0.01比0.57±0.00;103.2±0.7比86.4±0.75;66.3±1.45比38.1±0.92;0.68±0.07比0.43±0.07;0.68±0.06比0.59±0.01;0.55±0.04比0.40±0.03;1.84±0.07比9.59±0.29)、薏苡附子败酱散高浓度组(185.67±3.06比143.47±1.50;0.68±0.04比0.47±0.02;0.63±0.02比0.41±0.05;0.82±0.01比0.62±0.00;103.2±0.7比89.63±0.42;66.3±1.45比40.17±0.90;0.68±0.07比0.51±0.06;0.68±0.06比0.69±0.07;0.55±0.04比0.41±0.02;1.84±0.07比8.89±0.08)细胞存活率、TRIM21、MMP-3、MMP-9蛋白和IL-1β、IFN-γ含量及TLR4、p-NF-κB p65、p-IκB-α蛋白表达均显著降低,凋亡率均显著升高(P<0.05);与pcDNA组相比,pcDNA+TRIM21组细胞TRIM21蛋白表达(0.24±0.03比0.51±0.04)、细胞凋亡率(1.61±0.11比12.43±0.61)均显著升高,MMP-3(0.64±0.02比0.41±0.04)、MMP-9(0.82±0.03比0.45±0.02)、IL-1β(110.63±0.55比90.93±0.60)、IFN-γ(64.5±0.82比48.1±1.25)及细胞存活率(179.03±0.74比120.07±0.60)均显著降低;敲减TRIM21显著抑制薏苡附子败酱散中浓度对损伤细胞的治疗作用且显著升高TLR4(0.45±0.06比0.61±0.02)、p-NF-κB p65(0.49±0.02比0.56±0.02)、p-IκB-α(0.38±0.01比0.62±0.01)的蛋白表达。结论薏苡附子败酱散增强TNF-α诱导的MH7A细胞的生存能力,其作用机制与上调TRIM21抑制TLR4-NF-κB信号通路活性有关。

基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4信号通路分析血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗对急性脑梗死患者的机制研究

目的基于高迁移率族蛋白B1/Toll样受体4(HMGB1/TLR4)信号通路分析血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗对急性脑梗死(ACI)患者的作用机制。方法将106例ACI患者随机分为对照组(n=53)与研究组(n=53)。对照组进行阿替普酶静脉溶栓治疗,研究组在对照组基础上应用血栓通注射液治疗。比较2组临床疗效与不良反应,治疗前及治疗后7、14 d的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,治疗前后的外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量,以及治疗前后炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平。采用Pearson检验和Spearman检验分析ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与NIHSS评分、疗效总有效率的相关性。结果治疗后7、14 d时,研究组NIHSS评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平较治疗前降低,且研究组HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组血清HMGB1、TLR4蛋白含量较治疗前降低,且研究组血清HMGB1、TLR4蛋白含量低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,2组血清TNF-α、IL-6水平低于治疗前,且研究组血清TNF-α、IL-6水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组总有效率为75.47%,研究组总有效率为94.34%,差异有统计学意义(P<0.05);对照组不良反应总发生率为9.43%,研究组不良反应总发生率为15.09%,差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson检验显示,ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与NIHSS评分呈正相关(r=0.431、0.443、0.396、0.375,P均<0.001);Spearman检验显示,ACI患者外周血单个核细胞内HMGB1 mRNA、TLR4 mRNA表达水平及血清中HMGB1、TLR4蛋白含量与疗效总有效率呈负相关(r=-0.536、-0.481、-0.475、-0.506,P均<0.001)。结论血栓通注射液联合阿替普酶静脉溶栓治疗能有效改善ACI患者神经功能并降低机体炎症水平,其机制可能与下调HMGB1/TLR4信号通路有关。

抵当汤对高速泳动族蛋白B1/Toll样受体4/核因子κB通路的调控作用

目的:探讨抵当汤及其拆方对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症反应的影响及作用机制。方法:将体外培养的HUVECs随机分为空白血清组、LPS组、LPS+抵当汤组、LPS+植物药组、LPS+动物药组;抑制Toll样受体4(TLR4)后分为TAK-242组、抵当汤TAK-242组、植物药TAK-242组、动物药TAK-242组,给予相应处理后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清中高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;蛋白质免疫印迹法检测HUVECs中HMGB1、TLR4和核因子κB p65的蛋白表达水平,实时定量PCR(RT-qPCR)法检测HMGB1、TLR4和核因子κB p65的基因表达情况,免疫荧光法测定HMGB1、TLR4和核因子κBp65的荧光强度。结果:与A组比较,LPS组细胞上清液及HUVECs中HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κB p65表达均增强(均P<0.01)。与LPS组比较,LPS+抵当汤组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65的表达均减弱(P<0.05,P<0.01)。与LPS+抵当汤组比较,LPS+植物药组和LPS+动物药组细胞上清液及HUVECs中的HMGB1、IL-6、TNF-α、TLR4和核因子κBp65表达显著增强(P<0.05,P<0.01)。LPS+植物药组中的HMGB1、IL-6和TNF-α表达低于LPS+动物药组(P<0.05,P<0.01),TLR4和核因子κBp65表达高于LPS+动物药组(P<0.05)。抑制TLR4后,与LPS组比较,TAK-242组的HMGB1、TLR4、核因子κBp65表达减弱(P<0.05,P<0.01)。与TAK-242组比较,抵当汤TAK-242组各指标表达低于TAK-242组(P<0.05,P<0.01)。与抵当汤TAK-242组比较,植物药TAK-242组和动物药TAK-242组各指标表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:抵当汤及其拆方可通过抑制细胞炎症反应对HUVECs发挥保护和改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/TLR4/核因子κB信号通路活化有关。

氯替泼诺联合人工泪液对白内障术后干眼症患者Toll样受体-核因子κB信号通路相关因子的影响

目的分析氯替泼诺联合人工泪液对白内障术后干眼症患者Toll样受体(TLR)-核因子κB(NF-κB)信号通路相关因子的影响。方法回顾性分析2020年12月至2023年12月赣州启明星眼科医院收治的110例白内障术后干眼症患者的临床资料,根据治疗方法的不同分为对照组(n=55)与试验组(n=55)。对照组给予人工泪液治疗,试验组给予氯替泼诺联合人工泪液治疗,比较两组患者的治疗总有效率、角膜荧光素染色(FL)评分、美国国家眼科研究所视觉相关生命质量量表(NEI-VFQ-25)评分、泪液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平及血清TLR4、NF-κB水平。结果对照组、试验组患者治疗总有效率分别为74.55%、90.91%,试验组的治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的FL评分均低于同组治疗前,且试验组的FL评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的TNF-α、IL-1β水平均低于同组治疗前,且试验组的TNF-α、IL-1β水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的TLR4、NF-κB水平均低于同组治疗前,且试验组的TLR4、NF-κB水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患者的生活质量各项评分均高于同组治疗前,且试验组的生活质量各项评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论氯替泼诺联合人工泪液治疗白内障术后干眼症患者效果较好,可有效提高泪膜稳定性,可提高患者生活质量,与氯替泼诺联合人工泪液治疗通过介导TLR-NF-κB信号通路降低眼表炎症状态有关,可推广应用。

加味当归贝母苦参丸对MFC胃癌荷瘤小鼠瘤组织Toll样受体通路分子的影响

目的观察加味当归贝母苦参丸对MFC胃癌荷瘤小鼠瘤组织Toll样受体(TLR2、TLR4、TLR6)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)和髓分化因子88(My D88)表达的影响,探讨其相关的作用机制。方法建立MFC胃癌荷瘤小鼠模型进行体内抗肿瘤试验。将筛选合格的48只MFC胃癌荷瘤小鼠随机分为模型组,阳性对照组(顺铂组),加味当归贝母苦参丸高剂量组(当高组)、低剂量组(当低组)和顺铂联合加味当归贝母苦参丸高剂量组(顺高组)、低剂量组(顺低组),各给药组给予相应药物灌胃,连续14 d,观察肿瘤生长情况及小鼠一般情况、肿瘤大体标本及HE染色后组织形态;RT-q PCR和免疫组化分别检测肿瘤组织TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88的表达。结果模型组肿瘤细胞丰富,细胞大小不一、体积大、核大深染、异型明显,可见小灶性坏死,间质血管丰富;各给药组肿瘤细胞数量减少、排列疏松、细胞体积明显缩小、核固缩,细胞坏死明显增加,间质血管数量减少,胶原纤维增多,其中以顺低组、顺高组较为明显。与模型组比较,各给药组TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88 m RNA和蛋白表达均降低,顺低组、顺高组TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88蛋白着色变浅,呈弱阳性表达,较顺铂组、当高组、当低组蛋白改变更加明显。结论加味当归贝母苦参丸可能通过下调荷瘤小鼠肿瘤组织TLR2、TLR4、TLR6、TRAF6和My D88 m RNA和蛋白的表达,发挥抗肿瘤作用。

Toll样受体信号通路中MyD88的研究进展

MyD88是Toll样受体信号通路中的重要转导蛋白,其依赖的信号通路以及调控的基因产物在固有免疫和适应性免疫中均发挥着关键作用。本文对MyD88及其依赖的信号通路做一简要综述,以期为临床预防和治疗疾病提供新的思路和方法。

对虾Toll样受体通路研究进展

对虾是我国重要的海水养殖品种,但频繁爆发的病害威胁着对虾养殖的可持续发展。Toll通路是对虾重要的免疫应答通路,在对虾的抗病原体感染中起重要作用。文章综述了国内外关于对虾Toll通路的最新研究进展,总结了国内外的研究成果,指出对虾Toll通路研究的重要意义和未来的研究方向。

Toll样受体9信号通路在重症急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障功能障碍中的作用

目的探讨Toll样受体9(TLR9)信号通路在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠黏膜屏障功能障碍发病过程中的作用。方法 24只SD大鼠随机分成观察组(n=18)和对照组(n=6)。观察组采用牛磺胆酸钠逆行注射胰胆管诱导SAP模型,对照组采用生理盐水代替牛磺胆酸钠胰胆管注射。观察组分别在造模后6、12、24 h活杀,每个时间点活杀6只,对照组造模后24 h活杀,分别取回肠黏膜组织检测TLR9的表达情况和核因子-κB(NF-κB)的活性,取外周静脉血测定血清淀粉酶(AMS)、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-Lac)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,取胰腺和小肠组织进行病理评分,比较两组各项指标的差异。结果观察组各时间点小肠组织TLR9表达和NF-κB活性均显示高于对照组(P<0.05),血清AMS、DAO、D-Lac、TNF-α和IL-6水平也明显高于对照组(P<0.05),胰腺组织和小肠组织病理评分也明显高于对照组(P<0.05)。TLR9与NF-κB有较高的相关性(r=0.619,P<0.05),NF-κB与TNF-α也有较高的相关性(r=0.683,P<0.05)。结论 TLR9信号通路通过调节炎症介质水平,在SAP大鼠的肠黏膜屏障功能障碍发病过程中起着重要作用。

电针通过Toll样受体信号通路调控细胞因子减轻脓毒症免疫抑制的作用及其机制

目的:研究电针通过Toll样受体信号通路调控细胞因子减轻脓毒症免疫抑制的作用及其相关机制。方法:建立大鼠脓毒症模型,将其随机分为电针组(电针刺激足三里穴与关元穴,n=24)与假电针组(假性刺激,n=24),以正常大鼠为空白对照组(正常饲养,不做任何处理,n=8)。连续干预3 d后,采集试验大鼠外周血,淋巴细胞分离液分离外周血单核细胞(PBMC),荧光免疫聚合酶链式反应检测PBMC表面TLR-4表达水平,流式细胞仪检测PBMC表面核因子-κΒ(NF-κΒ)表达水平。流式细胞术检测外周血T淋巴亚群。同时检测外周血炎症因子水平[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)]。探究电针刺激足三里穴与关元穴在促进脓毒症康复中可能的作用机制。结果:电针组及假电针组大鼠外周血TLR4表达水平及TLR4表面NK-κΒmRNA相对表达量均显著高于空白对照组大鼠(P<0.05),但电针组大鼠外周血TLR4水平及TLR4表面NK-κΒmRNA相对表达量显著低于假电针组(P<0.05)。电针组及假电针组大鼠外周血CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)水平均显著低于空白对照组大鼠(P<0.05),3组CD8^(+)水平比较差异无统计学意义(P>0.05),但电针组大鼠外周血CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)水平均显著高于假电针组(P<0.05)。电针组及假电针组大鼠外周血TNF-α、IL-6及NLR水平均显著高于空白对照组大鼠(P<0.05),但电针组大鼠外周血TNF-α、IL-6及NLR显著低于假电针组(P<0.05)。结论:电针刺激足三里穴与关元穴可能通过TLR4/NK-κΒ信号通路减少炎症因子的释放并减轻脓毒症大鼠机体免疫抑制状况,进而促进疾病康复。

氧化苦参碱对慢性乙型病毒性肝炎Toll样受体9信号通路的影响

目的探讨氧化苦参碱抗乙型肝炎病毒(HBV)感染的作用机制。方法分离提取慢性乙型病毒性肝炎患者外周血单个核细胞(PBMCs),在体外加入氧化苦参碱刺激,检测其诱导抗病毒细胞因子产生的能力,及对Toll样受体9(TLR9)信号通路表达及功能的调节作用。结果氧化苦参碱可直接刺激PBMCs分泌大量干扰素α(IFN-α)和干扰素γ(IFN-γ),上调PBMCs细胞TLR9信号通路中TLR9、髓样分化因子88及肿瘤坏死因子受体相关因子6等信号传递分子,并诱导信号通路活化释放大量抗病毒细胞因子(IFN-α、IFN-γ和肿瘤坏死因子-α)。结论氧化苦参碱通过直接诱导抗病毒细胞因子释放及上调活化TLR9信号通路发挥其抗HBV作用。

盐酸吡格列酮对糖尿病大鼠肾组织TOLL受体4/MAPKs信号通路的影响

目的:探讨吡格列酮对糖尿病肾病大鼠肾组织中TOLL受体4/MAPKs信号通路的影响。方法:将雄性SD随机分为对照组(n=8)和试验组(n=32)。试验组SD鼠造模成功后随机分为3组进行干预,应用Western blot检测对照组和干预组大鼠肾组织中丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2及p38MAPK磷酸化水平。结果:与对照组比较,各组大鼠肾组织中TOLL受体4表达增强,其中ERK1/2与JNK磷酸化水平明显升高(P<0.05),但p38MAPK水平变化不明显(P>0.05);与模型组比较,吡咯列酮干预组大鼠肾组织中ERK1/2与p38MAPK磷酸化水平降低(P<0.05)。结论:吡格列酮通过TOLL受体4/MAPKs/ERK1/2与TOLL受体4/MAPKs/JNK信号通路来完成,延缓糖尿病肾病的发生与发展。

从Toll样受体/核因子-κB信号通路探讨中药免疫调节作用机制

许多中药从整体水平发挥了显著的免疫调节作用,近年来也从细胞、分子、基因等不同水平对其机理进行了大量的探索。本文在中药既往研究成果的基础上,结合Toll样受体/核因子-κB(TLRs/NF-κB)信号通路,对两者的关系进行了简要介绍,指出中药免疫调节作用与TLRs/NF-κB信号通路密切相关,这不仅对进一步深化中药免疫调节药理认识具有重要理论价值,而且对提高中药治疗疾病的疗效和中药新药开发,都具有重要的现实意义。

Toll样受体4/NF-κB信号通路参与黄芪多糖对肿瘤坏死因子α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的抑制作用

目的探讨黄芪多糖(APS)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的乳大鼠心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法 原代培养乳大鼠心肌细胞分别加入APS 25,50和100 mg.L-1作用30 min后再加入TNF-α50μg.L-1作用48 h。考马斯亮蓝法测定心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;RT-PCR检测心肌心钠素(ANP)和Toll样受体4(TLR4)的mRNA表达;Western印迹法检测心肌细胞p65和IκBα的蛋白表达;ELISA法检测细胞外液白细胞介素1β(IL-1β)的含量。结果 与正常对照组相比,TNF-α组心肌细胞蛋白含量增加了52.8%,细胞体积增大了66.7%,ANP和TLR4 mRNA分别增加了60.3%和68.7%,p65蛋白表达增加了50.5%,IκBα蛋白表达减少了43.1%,IL-1β表达增加了59.0%,差异均有统计学意义(P<0.01)。与TNF-α模型组相比,APS 50,100 mg.L-1和IκBα阻断BAY11-7082 5μmo.l L-1组蛋白含量、细胞体积、ANP mRNA、TLR4 mRNA、IL-1β和p65蛋白表达显著降低(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增高(P<0.05);APS 25 mg.L-1组蛋白含量、细胞体积和ANP mRNA表达显著性降低(P<0.05)。结论 APS对TNF-α诱导的乳大鼠心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

糖化白蛋白调控肾损伤相关分子与Toll样受体信号通路及齐墩果酸对其干预作用的研究

目的探讨人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞系)在糖化白蛋白(glycated albumin,GA)与齐墩果酸(oleanolic acid,OA)作用下,肾损伤分子-1 (kidney injury molecule-1,KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)及Toll样受体信号通路相关分子的表达情况。方法采用GA及OA处理HK-2细胞24 h,real-time PCR检测KIM-1、NGAL以及p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)、白细胞介素-1受体相关激酶4(interleukin-1receptor-associated kinase 4,IRAK4)、Toll样受体(Toll-like receptor,TLR) 1、TLR2、TLR7和TLR9的mRNA表达,ELISA法检测细胞上清液KIM-1与NGAL水平,Western blotting法检测细胞内p38 MAPK、IRAK4、TLR1、TLR2、TLR7和TLR9蛋白表达。结果与对照组比较,GA能显著上调KIM-1、NGAL mRNA与蛋白的含量(P<0.05),并促进p38 MAPK、IRAK4、TLR1、TLR2 mRNA及蛋白的表达(P<0.05);加入OA能显著抑制上述作用(P<0.05)。结论 GA能够上调KIM-1和NGAL的表达与释放,激活Toll样受体信号通路,对人近端肾小管上皮细胞造成损伤;而加入OA能够有效干预GA调控的损伤。

Toll样受体信号通路对大鼠创伤后深静脉血栓形成影响的实验研究

目的 探讨Toll样受体信号通路在创伤性深静脉血栓（TDVT）形成中的意义.方法 将30只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）和模型组.模型组根据造模后的不同生物学状态再分为两组：高峰期血栓形成组（B组）、高峰期血栓不形成组（C组）,在相应时相点无创切取股静脉血管组织,随后抽取各组大鼠总RNA,用Genechip Rat Genome 430 2.0芯片测定股静脉RNA表达,并分析Toll样受体信号通路基因表达的变化情况.结果 Toll样受体信号通路中TLR2、CD14、IFNα/βR、Rac1、TOLILP、PI3K、AKT、CASP8、IL-1β、IL-6、MIP-1α、IP-10、I-TAC等关键基因均上调,下调的有IL-12.结论 Toll样受体信号通路可能是调控血栓生物学状态的重要信号通路之一.

高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路与下肢动脉硬化闭塞症介入治疗后复发的相关性分析

目的研究高迁移率蛋白1/Toll样受体4信号通路(HMGB1/TLR4)与老年下肢动脉硬化闭塞症(ASO)介入治疗后复发风险的相关性。方法2020年1月~2021年1月间收治的行介入治疗的ASO病人84例,共96条病变血管,采用逆转录实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法于术后1周检测病人外周血单个核细胞(PBMCs)内HMGB1及TLR4 mRNA表达水平,放射免疫法及免疫比浊法检测血清内皮素-1(ET-1)及高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。术后随访12个月,统计靶血管再狭窄情况,将血管再狭窄者纳为复发组,无狭窄者纳为对照组,比较两组外周血PBMCs内HMGB1、TLR4水平及血清hs-CRP及ET-1水平,分析以上指标与ASO介入术治疗病人血管再狭窄之间的关系。结果介入治疗后,84例病人96条病变血管均开通,随访12个月后经双下肢超声及CTA检查提示有16例病人共18条病变血管再狭窄。复发组病人外周血PBMCs内HMGB1及TLR4表达水平及血清ET-1及hs-CRP高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。复发组病人外周血PBMCs的HMGB1及TLR4表达量与血清ET-1及hs-CRP水平均呈正相关(r=0.393,0.378,0.411,0.407,P<0.05)。结论HMGB1/TLR4信号通路可能通过激活炎症因子释放,促进血管损伤,参与ASO病人介入术后复发。

探讨中药穴位注射通过调控Toll样受体4通路对溃疡性结肠炎大鼠的影响

目的:探究中药穴位注射通过调控Toll样受体4(TLR4)通路对溃疡性结肠炎(UC)大鼠的影响。方法:在40只雄性清洁级SD大鼠中随机选取10只作为对照组,其余大鼠建立UC模型,30只大鼠均建模成功并随机分为模型组、西药组、观察组,每组10只。西药组给予柳氮磺胺吡啶(SASP)溶液,以10 mg/kg的剂量灌胃,每日两次;观察组固定后于“足三里”“天枢”给予穴位注射黄芪液,每穴0.2 mL,每日1次;对照组、模型组、西药组给予与观察组相同的固定。连续给药10 d后,检测大鼠肠黏膜组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-10水平,比较结肠组织病理评分及结肠组织TLR4、髓样分化因子88(MyD88)蛋白表达情况。结果:模型组TNF-α水平、结肠组织病理评分及TLR4、MyD88蛋白表达高于对照组(P<0.05),IL-4、IL-10水平低于对照组(P<0.05);西药组及观察组TNF-α水平、结肠组织病理评分及TLR4、MyD88蛋白表达低于模型组(P<0.05),IL-4、IL-10水平高于模型组(P<0.05);观察组TNF-α水平、结肠组织病理评分高于西药组(P<0.05),IL-4、IL-10水平及TLR4、MyD88蛋白表达低于西药组(P<0.05)。结论:中药穴位注射能改善UC大鼠结肠组织炎症水平及受损程度,其机制可能与抑制TLR4通路有关。

鸡源复合益生菌对肉仔鸡免疫球蛋白及Toll样受体通路的影响

【目的】探究益生菌对肉仔鸡血清免疫球蛋白与肠道Toll样受体通路的影响。【方法】选择90只1日龄白羽肉杂鸡,随机分为3组,即对照组、益生菌低剂量组和益生菌高剂量组。其中对照组饲喂基础日粮,益生菌低剂量组在每千克基础日粮中添加复合益生菌10^9 cfu,益生菌高剂量组在每千克基础日粮中添加复合益生菌2×10^9 cfu。第21天,每组随机选取10只鸡放血致死,并立即采集样本,进行ELISA、免疫组化、qPCR及Western blot检测。【结果】在第21天,益生菌低剂量组和益生菌高剂量组鸡的料肉比分别比对照组降低9%和12%(P<0.05),血清IgG含量分别升高28%和40%(P<0.01),血清IgM含量分别升高44%和58%(P<0.01)。益生菌低剂量组TLR4蛋白表达和mRNA相对表达量比对照组分别升高33%和28%,AP-1蛋白表达和mRNA相对表达量分别比对照组升高106%和67%(P<0.01);益生菌高剂量组TLR4蛋白表达及mRNA相对表达量比对照组分别升高106%和69%,AP-1蛋白表达及mRNA相对表达量比对照组分别升高163%和98%(P<0.01)。【结论】饲喂益生菌可降低肉仔鸡料肉比,提高血清中IgG、IgM的含量,并且通过调节Toll样受体通路蛋白表达可以提高机体免疫力。

白术多糖可能通过Toll样受体4信号通路缓解环磷酰胺诱导的雏鹅肝脏损伤

本试验旨在探讨白术多糖(PAMK)对环磷酰胺(CTX)诱导的雏鹅肝脏损伤的影响及可能的作用机制。试验选用健康的1日龄马岗鹅雏鹅180只,采用单因素完全随机分组试验设计,随机分成3组(对照组、CTX组、PAMK+CTX组),每组3个重复,每个重复20只。PAMK+CTX组从4日龄开始在基础饲粮中添加400 mg/kg的PAM K,直至试验结束。19、20、21日龄,对照组雏鹅腿肌注射0.5 mL生理盐水,CTX组、PAMK+CTX组雏鹅分别腿肌注射40 mg/kg BW的CTX溶液。试验期28 d。结果表明:1)与对照组相比,CTX组肝脏指数显著升高(P<0.05),胆囊指数显著下降(P<0.05);PAMK+CTX组肝脏指数和胆囊指数与对照组相比无显著差异(P>0.05)。2) CTX组和PAMK+CTX组肝脏中的8-羟基脱氧鸟苷含量显著高于对照组(P<0.05)。3) CTX可导致肝脏损伤,出现组织纤维化、炎性小灶增多及胆汁淤积等病变,肝细胞DNA氧化损伤;而PAMK可减轻肝脏组织受损程度,减少坏死肝细胞数量。4)与对照组相比,CTX组肝脏中丙二醛(MDA)含量显著升高(P<0.05),肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)活性显著降低(P<0.05)。PAMK+CTX组肝脏中MDA含量和GSH-Px、i NOS活性与对照组无显著差异(P>0.05)。5) CTX组肝脏Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、细胞外信号调节激酶激酶1(MEKK1)、丝裂原活化蛋白激酶激酶3(MKK3)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、IκB激酶α(IKKα) mRNA的相对表达量显著低于对照组(P<0.05)。PAMK+CTX组肝脏TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、MEKK1、MKK3、丝裂原活化蛋白激酶激酶6(MKK6)、IκB激酶ε(IKKε)、IκBαmRNA的相对表达量显著高于CTX组(P<0.05),肝脏MyD88、MKK6 mRNA的相对表达量显著高于对照组(P<0.05),肝脏TRAF6、MEKK1、MKK3、p38MAPK mRNA的相对表达量显著低于对照组(P>0.05)。由此可见,PAM K对CTX诱导的雏鹅肝损伤的调节作用可能是通过TLR4信号通路来实现的。