剪切波弹性成像技术评价通痹灵治疗类风湿性关节炎的效果

目的通过剪切波弹性成像技术(SWE)评价通痹灵对类风湿性关节炎(RA)患者膝关节滑膜的改善情况。方法选择初次服用通痹灵治疗的RA患者20例,并分别于治疗前、治疗3个月及治疗6个月后对所有患者进行膝关节滑膜厚度、滑膜弹性模量值的检测。比较RA患者治疗前、治疗3个月后及治疗6个月后膝关节滑膜厚度、弹性模量值的差异。结果治疗前、治疗3个月后、治疗6个月后,两组RA患者滑膜厚度、弹性模量最大值(EImax)及弹性模量平均值(EImean)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,弹性模量最小值(EImin)与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗前与治疗6个月后、治疗6个月与治疗3个月后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SWE可用于通痹灵治疗RA患者膝关节滑膜病变的效果评估。

固相萃取反相高效液相色谱法测定通痹灵人血清中士的宁浓度

[目的]建立测定人血清中士的宁含量的方法,以监控服通痹灵后人血清中士的宁的浓度,避免药物蓄积中毒。[方法]应用固相萃取小柱提取血清中士的宁,采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil Division ODS C18分析柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(70:30),1000 mL中加入磷酸二氢钾0.6 g、十二烷基磺酸钠1.0 g(冰醋酸调pH至4.5),检测波长254 nm,流速1.0 mL/min,室温操作。[结果]士的宁浓度在0.031～2.000μg·mL-1的范围内线性关系良好,最小检测浓度为0.01μg·mL-1,平均回收率大于90％,日内、日间RSD为1.53％～5.32％。[结论]该方法快速准确,样品处理简便易行,适用于士的宁的浓度检测。

通痹灵对大鼠佐剂性关节炎滑膜细胞功能的影响

目的：研究通痹灵（ＴＢＬ）对佐剂性关节炎（ＡＡ）大鼠滑膜成纤维细胞增殖及滑膜细胞分泌白细胞介素１（ＩＬ１）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）和前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的影响。方法：采用组织块培养的方法获得滑膜成纤维细胞，检测原代培养大鼠滑膜细胞培养上清对滑膜成纤维细胞增殖反应的影响，以及滑膜细胞培养上清中ＩＬ１、ＴＮＦα的活性和ＰＧＥ２的含量。结果：ＴＢＬ可以明显抑制ＡＡ大鼠滑膜成纤维细胞增殖（Ｐ＜０００１），下调ＡＡ大鼠滑膜细胞分泌ＩＬ１、ＴＮＦα和ＰＧＥ２（Ｐ＜００１）；消炎痛对滑膜成纤维细胞的增殖具有明显的刺激作用（Ｐ＜０００１），虽能显著抑制ＡＡ大鼠滑膜细胞分泌ＰＧＥ２，但进一步上调了ＩＬ１、ＴＮＦα的产生（Ｐ＜００１）。结论：ＴＢＬ治疗ＲＡ的机理之一可能是通过下调滑膜细胞的分泌功能。

微渗析技术研究依诺沙星眼用缓释凝胶剂兔眼内药动学

目的:研究依诺沙星家兔眼内药动学。方法:采用微渗析技术进行依诺沙星眼用缓释凝胶剂在体药动学的研究,数据经非隔室模型处理,以方差分析和双单侧t检验评价各参数。结果:眼用缓释凝胶剂的药动学参数为:AUC=(1·615±0·900)μg·h·mL-1,Cmax=(2·726±1·790)μg·mL-1,Tmax=(0·33±0·24)h,Ke=(0·270±0·140);滴眼液的药动学参数为:AUC=(0·414±0·210)μg·h·mL-1,Cmax=(0·689±0·890)μg·mL-1,Tmax=(0·25±0·10)h,Ke=(0·548±0·500)。结论:眼用缓释凝胶剂明显提高了药物在眼内的生物利用度,并且延长了作用时间,达到了缓释制剂的设计要求。

通痹灵治疗强直性脊柱炎临床疗效评价

[目的]评价通痹灵治疗活动期强直性脊柱炎(ＡＳ)的临床疗效、毒副反应。[方法]采用随机对照单盲双模拟的方法,将６９例活动期 ＡＳ分为通痹灵治疗组(３６例)和消炎痛对照组(３３例)。通痹灵组口服通痹灵ⅠＡ,每次 ６片,每天 ３次;消炎痛组口服消炎痛(通痹灵ⅡＡ),每片舍消炎病２５ｍｇ,每次６片,每天３次。[结果]①总有效率两组间无显著性差异(Ｐ＞０．０５),但通痹灵组控显率优于消炎痛组(Ｐ＜０．０１)。②两组治疗前后疼痛积分、晨僵时间和指地距离改善明显Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５),扩胸度和枕墙距均无改善(Ｐ＞０．０５)。通痹灵组关节肿胀积分、Ｓｃｈｏｂｅｒ试验、整体功能、实验指标(ＥＳＲ、ＣＲＰ、ＰＬＴ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ)和骶髂关节影像积分均有明显改善(Ｐ＜０．０１);消炎痛组关节肿胀积分、整体功能、实验指标和骶髂关节影像积分无改善(Ｐ＞０．０５)。通痹灵组改善肿胀积分、晨僵时间、指地距离、整体功能和实验指标(除ＣＲＰ外)优于消炎痛组(两组治疗后比较,Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５)。③通痹灵组未发现明显不良反应。[结论]通痹灵对活动期ＡＳ具有改善临床症状、体征和实验指标的作用,且对ＡＳ骨质损害具有保护作用,未发现不良反应。

通痹灵对CIA大鼠滑膜组织病理改变的影响

目的 :研究通痹灵对Ⅱ型胶原蛋白诱导的关节炎 (CIA)模型大鼠滑膜组织病理的影响。方法 :滑膜组织常规脱水、包埋、制片、苏木精 伊红染色 ,观察炎性细胞浸润、纤维组织增生、滑膜细胞增生及巨噬样A型细胞增生情况。结果 :通痹灵对CIA大鼠滑膜组织的炎性细胞浸润、纤维组织增生和巨噬样A型细胞有明显抑制作用。 4种细胞病理改变的总积分与模型组比较 ,差异有非常显著性。结论 :通痹灵治疗类风湿性关节炎的机制可能与抑制炎性细胞浸润。

通痹灵对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞TNF-αmRNA表达的影响

类风湿性关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是一种免疫介导的炎症性疾病，多种细胞因子如：ＩＬ－１、ＩＬ－６及ＴＮＦ单独或联合介导ＲＡ炎症组织损伤。其中ＴＮＦ在ＲＡ炎症、软骨吸收和骨破坏中起重要作用，是ＲＡ发病机理中居中心地位的促炎症...

通痹灵对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞产生IL-1、TNF-α及PGE_2的影响

为探讨中药复方制剂通痹灵（以桂枝芍药知母汤为基础）对佐剂性关节炎大鼠（ＡＡ）滑膜细胞分泌白细胞介素１（ＩＬ－１）、肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）和前列腺素Ｅ２（ＰＧＥ２）的影响，采用大鼠膝关节滑膜细胞原代培养的方法，检测脂多糖（ＬＰＳ）诱导关节滑膜细胞培养上清中ＩＬ－１、ＴＮＦ－α的活性和ＰＧＥ２的含量。结果：ＡＡ大鼠滑膜细胞培养上清中ＩＬ－１、ＴＮＦ－α的活性和ＰＧＥ２的含量高于正常组（Ｐ＜０．０１）；通痹灵可使ＡＡ大鼠滑膜细胞异常升高的ＩＬ－１、ＴＮＦ－α和ＰＧＥ２分泌功能恢复正常（与ＡＡ组比Ｐ＜０．０１，与正常组比Ｐ＜０．０５）；甲氨喋呤（ＭＴＸ）也在一定程度上下调了滑膜细胞的分泌功能（与ＡＡ组比Ｐ＜０．０１，与正常组比Ｐ＜０．０５）；消炎痛对ＰＧＥ２的产生具有明显的抑制作用（与ＡＡ组比Ｐ＜０．０１，与正常组比Ｐ＜０．０１），但进一步上调了ＡＡ大鼠滑膜细胞分泌ＩＬ－１、ＴＮＦ－α的功能（与正常组比Ｐ＜０．０１）。结论：ＩＬ－１、ＴＮＦ－α和ＰＧＥ２在类风湿性关节炎（ＲＡ）发病机理中占有重要地位；通痹灵对ＲＡ的治疗作用可能与其抑制滑膜细胞过度分泌细胞因子及炎症介质有关。

通痹灵对类风湿关节炎滑膜细胞血管内皮生长因子mRNA的影响

目的观察通痹灵对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织消化分离滑膜细胞进行分组培养。空白对照组:含生理盐水+10%胎牛血清的DMEM培养;通痹灵低剂量组:50mg/L通痹灵+10%胎牛血清的DMEM培养;通痹灵高剂量组:200mg/L通痹灵+10%胎牛血清的DMEM培养。提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGFmRNA的表达。结果通痹灵高、低剂量组VEGFmRNA表达较对照组明显降低(P<0.05)。结论通痹灵可以下调RA患者滑膜细胞VEGFmRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖。

通痹灵总碱对活化的小鼠T淋巴细胞CD69表达的影响

目的:研究通痹灵(TBL)总碱对活化的小鼠T淋巴细胞表达CD69的影响及其可能的免疫调控机制。方法:培养小鼠淋巴细胞,加入不同浓度的TBL总碱预孵1h后,再加佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA),24 h后,用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率。结果:不同质量浓度的TBL总碱对PDB或ConA激活的T淋巴细胞表达CD69,均有明显的下调作用(对ConA激活的T淋巴细胞的作用要强于PDB激活的T淋巴细胞),呈明显的量效关系。结论:TBL总碱可明显抑制 活化的小鼠T淋巴细胞CD69的表达,为其用于类风湿性关节炎的治疗提供了实验依据。

通痹灵总生物碱抑制关节破坏的细胞免疫作用机制

目的:证实通痹灵总生物碱抑制胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎症和关节破坏的药效,揭示其调节细胞免疫的作用机制。方法:牛II型胶原混合弗氏不完全佐剂于SPF级Wistar大鼠尾根部注射,足肿后随机分为造模加生理盐水组,甲氨蝶呤(MTX)治疗组和通痹灵总生物碱(以马钱子碱和士的宁为主的生物碱,TBL总碱)治疗组,容积法评价后肢肿胀度;给药后35d,乳腺钼靶机大鼠全身摄片,计分法评价各组大鼠X光片四肢96块骨侵蚀和100个关节间隙变化;处死动物,取左前肢和右后肢近端第3足趾关节苏木素-伊红(HE)染色,评价中性粒、淋巴细胞、浆细胞浸润、滑膜细胞增生的情况;MTT法检测TBL总碱对Jurkat细胞增殖的影响;Western blot检测TBL总碱对Jurkat细胞ERK1/2磷酸化的影响。结果:造模成功后,MTX和TBL总碱给药35d都可明显抑制大鼠关节肿胀和关节破坏,与造模加生理盐水组有统计学差异(P<0.01);TBL总碱可明显抑制CIA淋巴细胞、浆细胞的浸润和滑膜增生(P<0.05),MTX可抑制滑膜增生。TBL总碱可显著抑制T细胞增殖以及ERK1/2的磷酸化。结论:TBL总碱具有抑制关节免疫炎症和关节破坏的作用,其机制可能是通过干预T细胞MAPK信号转导,抑制T细胞的活化和增殖来实现的,为TBL总碱治疗RA提供了实验依据。

通痹灵对于胶原诱导型关节炎大鼠关节炎及骨质破坏的影响

目的研究通痹灵对于胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节炎以及骨质破坏的影响。方法采用CIA大鼠动物模型,容积法测量足肿胀度,血小板计数,整体X线片分析骨质破坏情况。结果通痹灵高剂量明显减轻CIA大鼠的关节炎所致的足肿胀和降低血小板总数(P<0.05),通痹灵高剂量和甲氨喋呤高剂量可抑制CIA大鼠骨质破坏(P<0.05)。结论通痹灵可通过降低CIA大鼠血小板总数,减轻关节的炎症,并且具有抑制骨质破坏的作用。

通痹灵对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠模型滑膜细胞凋亡的影响

目的研究通痹灵对Ⅱ型胶原蛋白诱导性大鼠关节模型(CIA)滑膜细胞凋亡的影响。方法原位细胞凋亡检测试剂盒检测各组原代大鼠滑膜细胞凋亡的水平。结果通痹灵组CIA大鼠滑膜细胞的凋亡数明显增加。结论通痹灵治疗类风湿性关节炎的机制可能与诱导滑膜细胞凋亡有关。

通痹灵对抗胶原诱导性关节炎小鼠骨质破坏的作用研究

[目的]探讨通痹灵(TBL)抗关节炎骨质破坏的作用机理。[方法]以小鼠胶原诱导性关节炎(CIA)为动物模型,分别以高剂量和低制量TBL对模型小鼠灌胃给药,并以甲氨喋呤(MTX)作为阳性对照,观察TBL对CIA小鼠关节炎症程度、关节破坏程度以及关节切片免疫组化染色中明胶酶A和B表达的影响。[结果](1)TBL高剂量(5.7g·kg-1·d-1)治疗8周能降低关节炎症状计分及放射线计分(P<0.01或P<0.001);(2)明胶酶A和B表达与关节炎症状计分及关节放射线计分显著相关(P<0.05或P<0.005);(3)TBL高剂量治疗能明显降低明胶酶A和B在关节滑膜、软骨和滑膜翳中的表达(与CIA组相比P<0.01或P<0.001)。[结论]中药TBL可控制CIA小鼠关节明胶酶A和B的表达,这可能是其能改善RA的软骨和骨质破坏的机制之一。

反相高效液相法测定通痹灵片中马钱子碱、士的宁的含量

[目的]建立测定通痹灵片中马钱子碱、士的宁含量的方法。[方法]采用反相高效液相色谱法,色谱柱为NUCLEODUR C_(18) Gravity分析柱(125mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇—水(60:40)1000 mL中加入磷酸二氢钾0.5g、十二烷基磺酸钠1.0g、三乙胺0.5ml(冰醋酸调pH至4.5),检测波长254nm,流速1.0mL/min,室温操作。[结果]马钱子碱、士的宁平均回收率分别为97.69％(RSD=2.03％),97.93％(RSD=2.61％)。[结论]本方法快速准确,可作为通痹灵片的质控指标。

通痹灵对胶原诱导型关节炎大鼠关节破坏的影响

【目的】观察通痹灵对胶原诱导型关节炎(CIA)模型大鼠关节破坏的影响。【方法】采用牛Ⅱ型胶原混合弗氏不完全佐剂于Wistar大鼠尾根部注射复制CIA模型,造模成功后随机分为模型组、通痹灵组(剂量为3.0 g.kg-1.d-1)、甲氨蝶呤组(MTX组,剂量为每周7.6 mg.kg-1),并设正常对照组;各组按设计剂量灌胃相应药物或生理盐水35 d后,采用容积法评价后肢肿胀度,采用乳腺钼靶机进行全身X光照片,比较各组大鼠各关节破坏程度的差异。【结果】通痹灵可显著性减轻CIA模型大鼠的足肿胀度和四肢关节肿胀数,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05或P<0.01);模型组大鼠X光片显示各关节骨面受到严重侵蚀,关节间隙变窄,通痹灵可显著性抑制CIA大鼠的关节破坏程度(P<0.05或P<0.01),其作用与阳性对照药MTX相仿(P>0.05)。【结论】通痹灵治疗类风湿性关节炎的作用可能与其抑制关节破坏程度,减轻关节炎症有关。

通痹灵总碱对T细胞内Th1型细胞因子表达的影响

目的 :研究通痹灵总碱 (TBL)对T细胞中Th1型细胞因子表达的影响 ,并揭示其抗炎机制 ,为临床用药提供理论依据。方法 :分离小鼠肠系膜淋巴结细胞 ,加入不同浓度的TBL作用 1h ,再加多克隆刺激剂佛波醇酯 (PDB)和离子酶素 ,继续培养 4h收获细胞 ,进行双色荧光素标记 ,以流式细胞术对Th1型细胞因子INF γ和TNF α的表达进行分析。结果 :2 0 0mg/L 和 10 0mg/L的TBL ,能显著抑制T细胞内INF γ和TNF α的表达。结论 :TBL可抑制Th1型炎症性细胞因子的表达 。

通痹灵总碱对LPS(脂多糖)刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子的影响

目的:观察中药通痹灵(TBL)的有效部位-总生物碱对LPS(脂多糖)刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的影响。方法:培养人类单核白血病细胞系———THP-1细胞,在PMA(Phorbol12-myristate13-acetate)作用下分化为巨噬细胞。体外用LPS(Lipopolysaccharide)刺激分化的巨噬细胞,以MTX(甲氨喋呤)作为对照,培养有药物作用的细胞24小时后检测细胞上清液中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α含量并用PR-PCR(逆转录-聚合酶链式反应)半定量测定IL-1βmRNA、TNF-αmRNA的表达。结果:LPS刺激PMA分化后的THP-1细胞,其IL-1β、TNF-α含量明显升高(与正常组比较P<0.01),不同浓度的通痹灵总碱(200、100、50、25mg/L)及MTX明显抑制IL-1β、TNF-α的产生(P<0.01),并下调IL-1βmRNA、TNF-αmRNA的表达。结论:通痹灵总碱抑制巨噬细胞分泌炎性细胞因子IL-1β、TNF-α,进而抑制了一系列免疫炎症反应造成的病理损伤。

通痹灵对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织血管内皮生长因子表达水平的影响

[目的]观察通痹灵对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠关节滑膜组织炎症和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的影响,以探讨通痹灵治疗类风湿性关节炎(RA)的作用机理。[方法]大鼠尾根部皮下注射Ⅱ型胶原蛋白建立CIA模型,分组给药治疗.给药37d后处死动物,对动物膝关节滑膜组织病理切片后分别常规HE染色和免疫组化染色。对HE染色切片用显微镜观察炎症细胞浸润、巨噬细胞增生和纤维增生情况,对免疫组化染色切片观察血管内皮生长因子(VEGF)阳性细胞情况以了解各组动物关节滑膜VEGF的表达水平。[结果]HE染色切片显示通痹灵高剂量组滑膜炎症细胞浸润、巨噬样A型细胞增生和纤维组织增生的程度均比模型组低(P<0.05或P<0.01),并与正常组相仿(P>0.05)。免疫组化染色切片显示通痹灵和雷公藤高剂量组均能降低滑膜VEGF表达水平(P<0.05)。[结论]通痹灵有改善大鼠关节滑膜炎症,抑制滑膜VEGF表达作用,这可能是通痹灵治疗关节炎取得临床疗效的机理之一。

通痹灵对胶原诱导性关节炎大鼠软骨破坏的对抗作用

[目的]探讨中药通痹灵对类风湿关节炎软骨破坏的对抗作用。[方法]采用大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型,用关节软骨免疫组化染色方法,评价造模后通痹灵早期给药治疗对大鼠软骨病变中肿瘤坏死因子—α(TNF—α)、转化生长因子—β(TGF—β)的表达的影响,并与模型组、甲氨碟呤(MTX)组、雷公藤组等进行半定量的平行对比研究。[结果]正常组的软骨组织中TNF—α阳性软骨细胞数呈低表达,且染色浅,与模型组的高阳性表达深染色有显著性差异(P<0.01),也明显优于MTX低剂量组(P<0.01)。通痹灵高、低剂量组及雷公藤高剂量组较接近正常组的表现,优于MTX高、低剂量组(P<0.05),与模型组比较差异有显著性(P<0.01)。正常组软骨组织中TGF—β呈较活跃的表达,模型组与雷公藤高、低组则表达少而染色浅,与正常组比较有显著性差异(P<0.05)。通痹灵高、低剂量组是各病理组中最接近正常组表现的,与模型组比较有显著性差异(P<0.01)。[结论]通痹灵治疗和改善软骨病变的机制可能与其降低软骨细胞异常升高的致炎、致溶骨的细胞因子TNF—α的分泌并升高保护性因子TGF—β的含量有关。