欧前胡素调节MAPK/mTOR/p70S6K信号通路对急性髓系白血病细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨欧前胡素(IMP)对急性髓系白血病(AML)细胞恶性生物学行为的影响以及对MAPK/mTOR/p70S6K信号通路的调节机制。方法将人AML细胞HL-60进行培养传代,并分为对照组(未处理组),ERK抑制剂组(PD98059组),IMP低、中、高剂量组,IMP高剂量+ERK激活剂组(IMP高+Cearoin组),每组均设置6个重复。MTT法检测IMP对HL-60细胞的毒性;MTT法、软琼脂克隆形成实验检测HL-60细胞的增殖活性;流式细胞仪术检测HL-60细胞凋亡;Transwell小室检测HL-60细胞迁移和侵袭能力;ELISA检测HL-60细胞培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平;Western blot检测通路相关蛋白及Bcl-2、Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白的表达。结果与未处理组比较,PD98059组和IMP低、中、高剂量组HL-60细胞的存活率、克隆形成数量、迁移和侵袭数量、促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及ERK1/2、mTOR、p70S6K磷酸化水平、Bcl-2表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ显著升高(P<0.05);与IMP高剂量组比较,IMP高+Cearoin组中ERK激活剂明显消除了IMP对上述指标的影响(P<0.05)。结论IMP可能通过抑制MAPK/mTOR/p70S6K信号通路,抑制AML细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞自噬和凋亡。

基于mTOR/p70S6K信号通路探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤的影响

目的:探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响。方法:将小鼠足细胞MPC5分为:对照组(5.5mmoL/L葡萄糖)、高糖诱导组(30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷低浓度组(2.5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷中浓度组(5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷高浓度组(10μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)。各组向RPMI 1640培养基中加入上述浓度的相应试剂或药物,培养72h。酶标仪测定各组MPC5细胞吸光度值,计算细胞活力;流式细胞仪测定各组MPC5细胞凋亡情况;鬼笔环肽染色观察各组MPC5细胞骨架形态;荧光定量PCR和蛋白印迹法分别测定各组MPC5细胞mTOR、p70S6K信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。结果:对照组MPC5细胞骨架形态正常,细胞长轴呈线性分布,荧光染色明显;与对照组比较,高糖诱导组MPC5细胞骨架断裂,细胞萎缩,荧光染色黯淡,吸光度值、细胞活力显著降低,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与高糖诱导组比较,紫丁香苷低、中、高浓度组MPC5细胞骨架结构恢复清晰,荧光强度逐渐变亮,足突趋于明显,吸光度值、细胞活力依次升高,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。结论:紫丁香苷对高糖诱导的MPC5细胞损伤具有保护作用,能明显促进MPC5细胞增殖,抑制其凋亡;其机制可能与紫丁香苷抑制高糖状态下MPC5细胞中mTOR/p70S6K通路的激活有关。

鲍曼不动杆菌外膜蛋白A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264.7细胞自噬

目的:分析鲍曼不动杆菌标准株ATCC 19606(Acinetobacter baumannii ATCC 19606)外膜蛋白A(outer membrane protein A,Omp A)对RAW264. 7细胞的自噬诱导作用。方法:建立Omp A刺激RAW264. 7细胞的模型,通过细胞免疫荧光染色、Western blot和透射电子显微镜检测Omp A对RAW264. 7细胞自噬的影响。结果:Omp A可以引起自噬蛋白LC3B-II表达升高,并抑制Akt/mTOR/p70S6K的磷酸化水平;雷帕霉素可以进一步降低mTOR和p70S6K磷酸化,并提高Omp A引起的LC3B-II表达升高。结论:鲍曼不动杆菌Omp A通过Akt/mTOR/p70S6K信号通路引起RAW264. 7细胞自噬。这为将来进一步研究鲍曼不动杆菌引起自噬的分子机制及找到对抗其感染的新方法提供理论依据。

中药肝复康对肝星状细胞mTOR/P70S6K信号通路的干预作用

目的观察中药肝复康含药血清对乙醛刺激的肝星状细胞mTOR/P70S6K信号通路的影响,以探讨肝复康抗纤维化的分子生物学机制。方法体外培养大鼠HSC-T6细胞,用肝复康对乙醛刺激的HSCs进行干预,采用RT-PCR法测定HSCs中Ⅰ、Ⅲ型胶原、mTOR、P70S6K的表达。结果空白对照组肝星状细胞各指标表达量呈相对较低水平,乙醛刺激组细胞Ⅰ型胶原、mTOR、P70S6K和Ⅲ型胶原表达量明显升高(P<0.05),而肝复康干预对于细胞Ⅰ型胶原、mTOR和P70S6K的升高有明显的抑制作用(P<0.01)。结论 mTOR/P70S6K信号通路在HSCs活化过程中起到重要作用,肝复康发挥抗纤维化的作用机制与阻断mTOR/P70S6K信号通路有关。

原发性胆囊癌组织中mTOR/p70S6K信号通路的表达及其临床病理学意义

目的探讨mTOR/p70S6K信号通路在原发性胆囊癌组织中的表达和临床意义。方法随机选取原发性胆囊癌患者86例,慢性胆囊炎患者15例,采用SABC免疫组化方法,检测胆囊癌组织和慢性胆囊炎症组织中mTOR及p70S6K蛋白的表达情况。并分析其与原发性胆囊癌组织临床病理学特征之间的关系。结果mTOR及p70S6K蛋白在原发性胆囊癌组织中的阳性表达率分别为77.91%(67/86)及80.23%(69/86),显著高于两者在慢性胆囊炎组织中的阳性表达率。两者在原发性胆囊癌组织中的表达呈正相关(r=0.791,P<0.01)。mTOR及p70S6K蛋白的阳性表达率与胆囊癌组织的分化程度、Nevin分期和淋巴结转移密切相关(均P<0.05),而与肿瘤直径、患者性别无明显关系。结论mTOR/p70S6K信号通路的特异性激活可能在原发性胆囊癌的发生、浸润、转移中起重要作用。

沉默YAP1可能通过调控mTOR/p70s6k信号通路对卵巢癌细胞生长和转移的影响

目的探讨Yes相关蛋白1(YAP1)可能通过调控mTOR/p70s6k信号通路对卵巢癌细胞生长和转移的影响。方法以卵巢癌细胞SKOV3为研究对象,将细胞分为si-NC组(转染si-NC)、si-YAP1组(转染si-YAP1)和si-YAP1+3-BDO组(转染si-YAP1后,加入100μmol/L的mTOR通路激活剂3-BDO)。然后采用qRT-PCR检测YAP1 mRNA的表达量;CCK8检测细胞活力;Western blot检测YAP1、Ki67、E-cadherin、N-cadherin和mTOR/p70s6k通路相关蛋白的表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果si-YAP1组的YAP1 mRNA和蛋白表达、细胞活力、Ki67蛋白表达、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达、p-mTOR蛋白表达、p-p70s6k蛋白表达明显低于si-NC组,E-cadherin蛋白表达明显高于si-NC组。si-YAP1+3-BDO组的p-mTOR蛋白表达、p-p70s6k蛋白表达、细胞活力、Ki67蛋白表达、迁移细胞数目、侵袭细胞数目、N-cadherin蛋白表达明显高于si-YAP1组,E-cadherin蛋白表达明显低于si-YAP1组。结论沉默YAP1可能通过激活mTOR/p70s6k信号通路促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

下调Ets2表达对裸鼠食管鳞癌移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响

目的:探讨下调Ets2表达对裸鼠Eca109移植瘤生长及mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法:选择已筛选出的在体外靶向下调Ets2基因表达的siRNA片段,构建包含此片段的慢病毒(LV-siE ts2)并感染Eca109,15只裸鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和LV-siE ts2组,分别背部皮下接种Eca109、LV感染的Eca109和LV-siE ts2感染的Eca109,形成移植瘤,之后观察肿瘤生长情况、绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤抑制率。应用qRT-PCR检测肿瘤组织中Ets2 mRNA的表达,TUNEL法检测肿瘤组织细胞的凋亡,Western blot法检测肿瘤组织中Ets2、Caspase-3、Bcl-2、E-cadherin以及mTOR/p70S6K信号通路蛋白的表达。结果:LV-siE ts2组肿瘤生长速度明显变慢,肿瘤体积和质量显著小于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);LV-siE ts2组肿瘤组织中Ets2 mRNA及蛋白表达水平均显著降低;LV-siE ts2能引起Eca109细胞的凋亡,且上调Caspase-3和E-cadherin蛋白表达水平,而下调Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05);LV-siE ts2能显著降低mTOR及p70S6K的蛋白表达。结论:LV-siE ts2在体内通过抑制mTOR/p70S6K信号通路促进细胞凋亡,从而抑制裸鼠Eca109移植瘤的生长。

mTOR/P70S6K信号通路活化在肝硬化门静脉高压症中意义的实验研究

目的探讨mTOR/P70S6K信号通路在早期肝硬化门静脉高压症中的活化状态,证实mTOR信号通路的激活参与肝硬化门静脉高压症的发病,并探讨其可能机制。方法本实验采用胆道结扎离断制备大鼠肝硬化门静脉高压症模型。雄性SD大鼠20只随机分为假手术组和模型组。通过组织病理学、形态学和血流动力学评估肝纤维化、炎症、和门静脉压力。采用RT-PCR和Western blot法分别测定肝纤维化标志物PC-αI、α-SMA、TGFβ1及PDGF基因的转录和mTOR信号通路标志物P70S6K和磷酸化的P70S6K(P-P70S6K)的表达。结果模型组大鼠胆道结扎离断3周后,P-P70S6K表达量明显增高而总蛋白P70S6K无显著差异,同时HSCs和胆管细胞活化增殖显著,肝脏促纤维化基因明显上调,间质胶原合成增加。结论mTOR/P70S6K信号通路主要以磷酸化功能状态参与肝硬化门静脉高压症的形成,阻断该通路可能成为肝硬化门静脉高压症治疗的新靶向。

木瓜总三萜通过调节miR-10a和PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导胃癌细胞凋亡

目的:通过观察木瓜总三萜对人胃癌HGC-27细胞株生长的抑制作用,探寻其可能的作用机制。方法:将HGC-27细胞分别单用木瓜总三萜或同转染miR-10a mimic、PI3K抑制剂LY294002、mTOR抑制剂CCI-779及分别与木瓜总三萜联用处理后,采用MTT和JC-1法检测细胞活性和线粒体活性,实时定量PCR法检测miR-10a mRNA表达,Western blot法检测HGC-27细胞中PI3K、Akt、mTOR、p70S6K蛋白表达及其磷酸化。结果:木瓜总三萜可显著降低HGC-27细胞活性和线粒体活性,促进细胞凋亡;上调miR-10a mRNA表达,下调p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达及降低p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR、p-p70S6K/p70S6K比值(P<0.05)。结论:木瓜总三萜具有抑制人胃癌HGC-27细胞线粒体活性和细胞增殖的作用,其机制可能与促进miR-10a表达,抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路激活有关。

miR-10b通过mTOR/P70S6K信号通路对宫颈癌大鼠的作用机制研究

目的探讨miR-10b通过mTOR/P70S6K信号通路对宫颈癌大鼠的作用机制。方法采用人宫颈癌HeLa细胞株构建宫颈癌大鼠模型,分为Gg组(宫颈癌大鼠)、Gm组(注射miR-10b-mimics)、Gi组(注射miR-10b-inhibitions)。采用HE染色观察癌组织变化,Western blotting、RT-PCR检测mTOR/P70S6K的mRNA和蛋白表达水平,Transwell检测HeLa细胞的侵袭能力。结果Gg组肿瘤组织出现丰富的血供,界限分明,切面呈鱼肉状,肿瘤细胞大小较为均等;Gm组肿瘤组织中有大量纤维血管形成,肿瘤细胞大小不等,胞浆着色较深;Gi组肿瘤组织中纤维血管较少,胞浆着色稍浅。Western blotting结果显示,mTOR/P70S6K蛋白表达水平为Gm组<Gg组<Gi组(P<0.05)。RT-PCR结果显示,mTOR/P70S6K mRNA水平为Gi组>Gg组>Gm组(P<0.05),miR-10b mRNA水平为Gi组<Gg组<Gm组(P<0.05)。Transwell结果显示,肿瘤细胞侵袭能力为Gi组>Gg组>Gm组(P<0.05)。结论miR-10b过表达可激活mTOR蛋白,增加P70S6K活性,抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移,有望成为宫颈癌治疗的新靶点。

Cx43和mTOR/p70S6K信号通路在胃癌中的研究进展

在我国,胃癌占恶性肿瘤的第二位[1],好发于中老年男性。胃癌一直是研究热点,但胃癌的发生机制尚不清楚。目前达成共识的结论是:胃癌的发生发展是一个多因素、多步骤、复杂的渐进过程,涉及多条信号传导通路的异常改变[2]。近年来,对于细胞缝隙连接通讯(gap junction intercellular communciation,GJIC)结构和功能的研究,为探索多种肿瘤的发生机制提供了新思路[3]。GJIC是由6个相同或相似的缝隙连接蛋白(Connexin,Cx)环绕而成的直径约1.5mm亲水性跨膜孔道,其中Cx43介导的GJIC与肿瘤关系最为密切。许多研究发现,Cx43介导的GJIC在肿瘤中表达水平和膜定位可影响癌细胞的发生、粘附及转移[4]。

依沙佐米通过mTOR/p70S6K信号通路诱导食管鳞癌细胞凋亡

目的探讨依沙佐米通过mTOR/p70S6K信号通路诱导食管鳞癌细胞凋亡的机制。方法用依沙佐米处理食管鳞癌细胞KYSE-140和KYSE-150,分别用CCK-8法和Edu法检测细胞增殖,流式细胞仪检测依沙佐米处理后KYSE-140和KYSE-150的细胞凋亡,以及caspase-3等凋亡因子的表达,RT-qPCR和Western blot检测依沙佐米处理后mTOR、p70S6K和4E-BP1的mRNA和蛋白表达水平,以及p-p70S6KThr421/Ser424和p-4E-BP1Thr36蛋白的表达。结果依沙佐米可以抑制食管鳞癌细胞KYSE-140和KYSE-150的增殖,且存在剂量依赖性。流式细胞仪检测结果显示依沙佐米处理后,KYSE-140和KYSE-150细胞的凋亡率显著增加(P<0.05),caspase-3活性显著增高(P<0.05),处理组出现PARP的裂解产物cleaved PARP,而未处理组未见PARP的裂解,并且细胞凋亡激活物p-p38的表达升高(P<0.05)。与对照组相比,依沙佐米处理组mTOR的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),p70S6K和4E-BP1的mRNA表达水平显著下降(P<0.05),且p-p70S6KThr421/Ser424和p-4E-BP1Thr36的表达显著下降(P<0.05)。结论依沙佐米可通过抑制mTOR/p70S6K信号通路诱导食管鳞癌细胞的凋亡。

莪术提取物通过mTOR/p70S6K信号通路调控胆囊癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的机制

目的:探讨莪术提取物(β-榄香烯)通过调控mTOR/p70S6K信号通路对胆囊癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:采取不同浓度(0、20、50、100μg/mL)的莪术提取物处理胆囊癌细胞GBC-SD,记为0μg/mL组、20μg/mL组、50μg/mL组、100μg/mL组;选取100μg/mL的莪术提取物和20μmoL/L的mTOR抑制剂CCI-779,记为莪术提取物组和莪术提取物+CCI-779组。采用MTT、流式细胞仪检测细胞的活力和凋亡;Transwell检测细胞的迁移和侵袭;Western blot检测Cleave-capase3、Bax、MMP2和mTOR/p70S6K信号通路相关蛋白的表达。结果:不同浓度的莪术提取物组可以降低细胞活力、细胞迁移数目和侵袭数目,增加细胞的凋亡率,上调Cleave-capase3、Bax蛋白表达,下调MMP2、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达,呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(P<0.05)。莪术提取物+CCI-779组的细胞活力、细胞迁移数目、侵袭数目和MMP2蛋白表达低于莪术提取物组,细胞凋亡率、Cleave-capase3、Bax蛋白表达高于莪术提取物组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:莪术提取物通过抑制mTOR/p70S6K信号通路抑制胆囊癌细胞增殖、侵袭和迁移,并促进其凋亡。

KLF4通过mTOR/P70S6K途径激活细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:分析Krüppel样转录因子4(KLF4)对高糖诱导的足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养MPC5细胞,将MPC5细胞分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、高糖+空载质粒对照组(HG+NC组)、高糖+KLF4过表达组(HG+KLF4组)。采用qRT-PCR法检测细胞中KLF4 mRNA表达水平,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,HG组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量降低,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中突触足蛋白(synaptopodin)、足蛋白(podocin)、肾蛋白(nephrin)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin1蛋白表达量降低,P62蛋白表达量、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR和磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p-P70S6K)/P70S6K比值升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。与HG组比较,HG+KLF4组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量升高,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中synaptopodin、podocin、nephrin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达量升高,P62蛋白表达量、p-mTOR/mTOR和p-P70S6K/P70S6K比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:KLF4通过激活足细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤,其作用机制可能与调控mTOR/P70S6K信号通路有关。

胡桃醌通过Akt/mTOR/p70S6K通路调控肺癌细胞A549自噬的研究

目的:研究胡桃醌通过Akt/mTOR/p70S6K通路调控肺癌细胞A549自噬,发挥其抗肺癌作用的机制。方法:MTT法检测胡桃醌对A549细胞存活率的影响。透射电镜和细胞自噬染色检测试剂盒(MDC)观察胡桃醌诱导A549细胞自噬。蛋白免疫印迹法检测自噬标志蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ和LC3I蛋白和自噬经典通路Akt/mTOR/p70S6K相关蛋白的表达水平。RT-PCR法检测A549细胞中Beclin-1和LC3ⅡmRNA表达水平。结果:MTT结果表明胡桃醌抑制A549细胞增殖,IC 50=10μmol/L;透射电镜和MDC实验发现胡桃醌可以诱导A549细胞产生自噬;与对照组相比,胡桃醌可以显著增加Beclin-1蛋白表达水平、LC3Ⅱ/LC3I比值和Beclin-1、LC3ⅡmRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);胡桃醌干预后,与对照组相比,Akt、mTOR和p70S6K蛋白的表达水平基本不变,但Akt、mTOR和p70S6K磷酸化蛋白的表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:胡桃醌可能通过Akt/mTOR/p70S6K通路调控肺癌细胞A549自噬。

利多卡因通过调控miR-520a/AKT/mTOR/p70S6K通路对SH-SY5Y细胞自噬的影响

目的探讨利多卡因通过调控自噬对神经毒性的影响及相关分子机制。方法培养人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y,MTT实验和乳酸脱氢酶(LDH)测定检测利多卡因对SH-SY5Y细胞活力和毒性的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-520a的相对表达;Western blot检测利多卡因对AKT/mTOR/p70S6K通路相关蛋白和自噬相关蛋白的影响;细胞免疫荧光染色评估LC3B的表达;生物信息学预测AKT1是miR-520a的潜在靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-520a和AKT1之间的相互作用。结果与对照组比较,SH-SY5Y细胞活力受到明显的抑制,且呈时间和剂量依赖性,LDH的释放量随利多卡因剂量增多而增加,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达显著升高,p62蛋白表达显著降低,LC3B的荧光强度显著增强,miR-520a的表达显著增加,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达均显著降低(P<0.05)。与NC inhibitor组比较,miR-520ainhibitor组WT-AKT1的荧光素酶活性显著升高(P<0.05),而MUT-AKT1的荧光素酶活性没有变化(P>0.05)。与利多卡因组+NC inhibitor组比较,利多卡因+miR-520a inhibitor组SH-SY5Y细胞中miR-520a水平降低,LDH的释放量显著降低,p-AKT、p-mTOR、p-p70S6K蛋白表达均显著升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1蛋白表达显著降低,p62蛋白表达显著升高,LC3B的荧光强度显著降低(P<0.05)。结论利多卡因通过上调miR-520a的表达和抑制AKT/mTOR/p70S6K信号通路促进神经细胞自噬。

异甘草素对宫颈癌细胞生物学特性及mTOR/P70S6K信号通路的影响

目的探讨异甘草素对宫颈癌细胞生物学特性及mTOR/P70S6K信号通路的影响。方法选择Si Ha人宫颈癌细胞,将浓度为25、50、100μg/ml的异甘草素培养液加入Si Ha细胞中,其中一组Si Ha细胞不加入异甘草素培养液作为Si组(Si Ha细胞),Ds组(25μg/ml)、Zs组(50μg/ml)、Gs组(100μg/ml),RT-PCR、Westernblot法分别检测mTOR、P70S6K水平、蛋白变化,Transwell法、MTT法对Si Ha细胞的迁移、增值变化,流式细胞仪测定Si Ha细胞凋亡率。结果 Si组mTOR、P70S6K水平高于其他3组,其余3组Ds组mTOR、P70S6K最高,Zs组其次、Gs组最低,4组比对差距显著(P<0.05)。Si组为正常Si Ha细胞mTOR、P70S6K蛋白最高,其余3组mTOR、P70S6K蛋白表达从低至高依次为Gs组、Zs组、Ds组,4组比对差距显著(P<0.05)。Ds组Si Ha细胞凋亡率最高,其次为Ds组、Zs组,Si组Hep-G2细胞凋亡率最低,4组调亡率比对差距显著(P<0.05)。Si组Si Ha细胞迁移能力最高,其余3组Siha细胞迁移能力,Gs组迁移能力最低,Zs组迁移能力高于Ds组,Gs组较Zs组低,4组细胞迁移能力比对差距显著(P<0.05)。Gs组Si Ha细胞增殖能力最低,Nc组细胞增值能力最高,Zs组低于Ds组高于Gs组,4组增值能力比对差距显著(P<0.05)。结论异甘草素在si Ha细胞的凋亡中发挥重要作用,其作用机制可能降低mTOR/P70S6K水平的表达从而抑制细胞增值和迁移。

老鼠簕生物碱A对肝纤维化大鼠PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路的影响

目的观察老鼠簕生物碱A(HBOA)对四氯化碳(CCl4)致肝纤维化大鼠磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响,探讨HBOA抗肝纤维化的作用机制。方法大鼠随机分成对照组、模型组及HBOA高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组和秋水仙碱(0.4 mg/kg)组。除对照组外,其余各组ig给予50%CCl4橄榄油溶液,每周2次,连续12周,诱导肝纤维化大鼠模型。于造模第9周起,给药组分别ig相应的受试药物,每天1次,给药4周。实验结束后,计算各组大鼠体质量变化、肝脏指数;检测各组大鼠肝匀浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)活性;蛋白免疫印迹法(Western blotting)法检测肝组织P-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K蛋白的表达。结果与模型组比较,各给药组大鼠体质量增加量显著升高,均能降低肝脏指数及肝组织中ALT、AST活性;此外,HBOA高、中剂量组均能显著抑制p-PI3K、p-Akt、p-m TOR、p-p70S6K蛋白的表达。结论 HBOA对肝纤维化大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/m TOR/p70S6K信号通路有关。

基于mTOR/p70S6K信号通路探讨艾灸对阿尔茨海默病小鼠自噬的影响

目的:探讨艾灸对淀粉样前体蛋白/早老素1(APP/PS1)双转基因阿尔茨海默病(AD)小鼠自噬和β-淀粉样蛋白1-42(Aβ)蛋白表达的影响。方法:将56只6月龄APP/PS1双转基因AD小鼠适应性饲养2个月后,随机分为模型组、艾灸组、雷帕霉素组、抑制剂组,每组14只;14只同月龄C57BL/6J小鼠作为正常组。艾灸组小鼠予隔附子饼实按灸“百会”“风府”“大椎”20 min,雷帕霉素组小鼠予腹腔注射雷帕霉素(2 mg/kg),抑制剂组小鼠在艾灸组基础上注射1.5mg/kg3-甲基腺嘌呤(3-MA),均每日1次,连续2周。HE染色法观察各组小鼠海马组织形态,透射电镜观察各组小鼠海马组织细胞超微结构,免疫组化法检测各组小鼠额叶皮质和海马组织Aβ蛋白表达,Western blot法检测各组小鼠海马组织雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、P70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)和磷酸化p70S6K(p-p70S6K)蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠神经元细胞数量减少,细胞坏死且变形,自噬泡和溶酶体减少。与模型组比较,艾灸组和雷帕霉素组小鼠神经元细胞数量增多,细胞坏死减少,自噬泡和溶酶体增多。与正常组比较,模型组小鼠Aβ、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达增多(P<0.05);与模型组比较,艾灸组、雷帕霉素组和抑制剂组小鼠Aβ、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达减少(P<0.05);与抑制剂组比较,艾灸组、雷帕霉素组小鼠Aβ、mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达减少(P<0.05);与雷帕霉素组比较,艾灸组小鼠mTOR、p-mTOR、p70S6K、p-p70S6K蛋白表达减少(P<0.05)。结论:艾灸可增强APP/PS1双转基因AD小鼠海马组织细胞自噬,减少脑组织Aβ异常聚集,其机制可能与抑制m TOR/p70S6K信号通路有关。

mTOR/p70s6k通路与运动诱导的肌肉蛋白质合成

肌肉运动可以激活一些生长因子,这些生长因子是肌肉蛋白质合成的有力刺激物。mTOR信号转导通路通过增加特异性mRNA的翻译从而在不同水平上控制蛋白质合成,mTOR是被其上游信号PI3K和Akt所激活的,最后在力学负荷过载的情况下激活其效应子p70s6k。运动经由PI3K/Akt/mTOR/p70s6k信号转导通路能有效刺激肌肉合成代谢信号分子的激活。虽然对磷脂酸、整联蛋白的研究已经取得了一定的进展,但是还有一些问题需要进一步研究,特别是其与mTOR信号转导通路的关系。由于不同的运动模式对于mTOR/p70s6k信号通路的影响是不一样的,因此更详细地了解不同运动模型的类型、强度和时间,有利于更好地了解mTOR/p70s6k信号转导通路。