Raptor蛋白在慢性前列腺炎和前列腺上皮内瘤变及前列腺癌组织中的表达及意义

慢性前列腺炎（CP）与前列腺癌（PCa）是男性常见疾病，前列腺上皮内瘤变（PIN）是前列腺癌的癌前病变。有研究结果表明．CP是发生PIN和PCa的高危因素。同时，在慢性炎性微环境中常存在细胞内信号通路的异常激活。P13K／Ak∥mTOR信号通路的过度活化常发生在细胞恶变早期或肿瘤进展期，是正常细胞对外界致癌因子作用产生的快速反应，导致细胞过度增殖和凋亡阈值上调。

日本血吸虫TOR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

本研究扩增到日本血吸虫Sj TOR完整的蛋白编码区并将其克隆到p XJ40-FLAG载体的HindⅢ、XhoⅠ酶切位点,构建真核表达质粒p XJ40-FLAG-TOR。将测序正确的质粒转染到293T细胞中进行表达,然后应用间接免疫荧光、实时荧光定量PCR、Western blot检测其在293T细胞中的表达情况。测序结果表明Sj TOR蛋白编码区为1245 bp,真核表达质粒p XJ40-FLAG-TOR构建成功。转染293T细胞48 h后,应用间接免疫荧光染色可观察到转染重组质粒的细胞有特异性绿色荧光,空质粒对照则未见。实时荧光定量PCR结果显示,在转染质粒p XJ40-FLAG-TOR 6 h后Sj TOR蛋白的基因已有转录,至转染24 h时转录水平最高,随后开始降低。Western blot结果显示Sj TOR蛋白分子量约53 k Da,可被FLAG单抗和抗Sj TOR-ED1抗血清识别。结果表明Sj TOR蛋白可以在293 T细胞中表达,为进一步研究Sj TOR蛋白的生物学功能和DNA疫苗打下了基础。

结肠癌组织及转移淋巴结中磷酸化mTOR的表达及其预后作用

目的探讨p-mTOR在结肠癌组织及转移淋巴结中的表达及其对预后的影响。方法收集136例结肠癌根治术病例,根据淋巴结转移情况分为3组,应用免疫组织化学方法检测各组结肠癌组织及转移淋巴结组织中p-mTOR的表达,结合临床病理资料进行统计分析。结果免疫组化结果显示p-mTOR广泛表达于结肠癌组织及转移淋巴结中。结肠癌组织表达阳性率为47.1%,其中LN3组的表达阳性率(64.3%)显著高于LN1组和LN2组(37.8%和40.8%),结肠癌组织p-mTOR的表达率与淋巴转移程度呈线性相关(P=0.026)。转移淋巴结中p-mTOR的表达阳性率为67.0%,其中LN3组阳性率(85.7%)显著高于LN2组(51.0%,P=0.001)。结肠癌组织与转移淋巴结中p-mTOR表达阳性率呈显著相关(P=0.014)。生存分析显示结肠癌组织p-mTOR阳性表达对于各组病例生存率影响不大。而转移淋巴结p-mTOR阳性表达病例5年生存率均显著低于阴性组(P=0.042/P=0.027),转移淋巴结p-mTOR阳性表达患者预后较差。结论 mTOR信号通路在结肠癌发生发展中发挥了重要作用,结肠癌组织p-mTOR的表达与淋巴结转移程度密切相关,转移淋巴结p-mTOR表达可作为中晚期结肠癌的预后标志,mTOR是结肠癌淋巴转移的重要治疗靶点之一。

2017年拉斯克奖

北京时间2017年9月6日,拉斯克奖获奖者名单公布。基础医学奖授予瑞士巴塞尔大学的Michael N.Hall教授,以表彰他发现了营养活化的西罗莫司靶蛋白(target of rapamycin,TOR)及其在细胞生长代谢调控中的关键作用。临床医学研究奖授予美国国立癌症研究所的Douglas R.Lowy教授和John T.Schiller教授,以表彰他们为预防宫颈癌及其他肿瘤而开发的人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)疫苗所带来的技术进步。公共服务奖授予美国计划生育联合会,以表彰该机构在过去超过一个世纪的时间里为数百万妇女提供必需的健康服务和生殖保健服务。

美国科学家发现基因调控新机制

美国华盛顿大学医学院的研究人员发现了能够调控一大组群基因的新机制。当引用酵母对一种新型抗癌药物进行实验时,研究小组发现一种能使酵母基因组中的大多数基因同时静默,而不是某一个基因静默的机制。

氧化型低密度脂蛋白通过Akt／mTOR／p70S6K通路诱导血管内皮细胞自噬

目的探讨氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, oxLDL）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）自噬和Akt/mTOR/p70S6K信号通路的影响。方法将培养的HUVECs分为oxLDL组和对照组，分别用100 μg/ml oxLDL和等体积磷酸盐缓冲液处理。在培养6 h和12 h后收集细胞。应用透射电子显微镜观察自噬小体，实时荧光定量聚合酶链反应检测微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3）和p62 mRNA表达，应用蛋白质印迹法检测LC3、p62、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR和p-p70S6K/p70S6K蛋白表达。结果与对照组相比，oxLDL处理组细胞内的自噬小体数量明显增多（P〈0.05），LC3 mRNA及蛋白表达水平均显著增高（P均〈0.05），而p62 mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P均〈0.05）。此外，oxLDL处理组Akt、mTOR、p70S6K磷酸化蛋白表达水平均较对照组显著降低（P均〈0.01），但Akt、mTOR和p70S6K总蛋白表达水平与对照组无显著差异。结论oxLDL可通过抑制Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导HUVECs自噬。

依维莫司增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞的作用

背景:阿霉素能够抑制骨肉瘤细胞的增殖,但是阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用以及依维莫司联合阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用未见报道。目的:研究mTOR通路抑制剂依维莫司联合骨肉瘤化疗一线药物阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖及侵袭的影响。方法:用免疫磁珠分选法分离人骨肉瘤细胞株MG63中的CD133^+骨肉瘤干细胞。MTT检测0,0.1,0.2,0.4 mg/L阿霉素以及0.2 mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖的影响。Transwell小室检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞侵袭的影响。Western Blot检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白表达的影响。结果与结论:(1)阿霉素能在一定质量浓度下抑制骨肉瘤干细胞的增殖,且依维莫司联合阿霉素较单独使用阿霉素时明显抑制骨肉瘤干细胞的增殖,说明依维莫司能够增强阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖的抑制作用;(2)与单独使用阿霉素比较,依维莫司联合阿霉素作用于骨肉瘤干细胞后侵袭细胞数明显减少;(3)依维莫司联合阿霉素显著抑制骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白的表达,提示依维莫司能够增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞增殖与侵袭的能力。

植物TOR激酶响应上游信号的研究进展

雷帕霉素靶蛋白(TOR)是真核生物中高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能整合营养、能量、生长因子及环境信号,协调细胞增殖、生长和代谢等过程,是真核生物生长发育的核心调控因子。近年来,随着相关研究系统的建立,植物TOR的功能和机制研究取得了众多突破,发现其进化上保守的生物学功能及植物中特有的信号通路。该文概述了TOR蛋白复合体的构成,以及植物TOR响应糖、营养元素(氮、磷和硫)、激素及逆境胁迫信号来调控下游基因转录、蛋白翻译、代谢、细胞自噬和胁迫应答等生物学过程的分子机制,并提出了植物TOR领域一些亟待解决的科学问题,以期为全面揭示植物TOR的生物学功能提供参考。

Akt／mTOR在高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化中的表达及对核心结合因子的调节

目的观察蛋白激酶B／哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（Akt/mTOR）在高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）钙化模型中的表达及其对核心结合因子α1（Cbfα1）表达的调节。方法体外培养的大鼠VSMC，分为正常磷组（1．3mmol/L）和高磷组（2．6mmol／L），培养7d后，观察细胞形态及茜素红染色细胞钙盐沉积，实时定量PCR检测Cbfα1、骨桥蛋白（OPN）mRNA水平，Western印迹检测磷酸化Akt（p-Akt）（ser473）、磷酸化mTOR（P-mTOR）（S2448）、Cbfα1和OPN蛋白的表达。检测到Akt、mTOR活化表达后，给予不同浓度的渥曼青霉素（5、10、30、50和100nmol/L）和雷帕霉素（1、10和100ng／m1）干预24、48h后，检测Cbfα1、OPN、P-Akt和P-mTOR基因和蛋白表达，7d后观察VSMC钙盐沉积变化。结果VSMC高磷干预7d后，与正常磷组相比，高磷组钙盐沉积明显，cbfal、OPNmRNA表达增高（均P〈0．05），p-Akt、P-mTOR、Cbfα1和OPN蛋白表达增高（均P〈0．05）。渥曼青霉素、雷帕霉素干预24h后，相对于高磷组，高磷＋渥曼青霉素30、50、100nmol/L组cbfal、OPNmRNA表达明显下调（均P〈0．05）；高磷＋雷帕霉素1、10和100ng／ml组Cbfα1、OPNmRNA表达下调（均P〈0．05）。渥曼青霉素、雷帕霉素干预48h后，与高磷组比较，高磷＋渥曼青霉素30、50、100nmol/L）组p-Akt、Cbfα1和OPN蛋白表达明显下调（均P〈0．05）；高磷＋雷帕霉素1、10、100ng/ml组，p-mTOR、CbfM和OPN蛋白表达呈剂量依赖性下调（均P〈0．05）。VSMC培养7d后，与高磷组相比，高磷＋渥曼青霉素和高磷＋雷帕霉素组钙盐沉积明显减轻。结论高磷可体外诱导大鼠VSMC钙化，Akt、mTOR参与了高磷诱导的大鼠VSMC钙化，并可能通过调控Cbfα1因子而起作用。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白与自身免疫性溶血性贫血发病的研究进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过调控不同种类T细胞、B细胞和树突状细胞(DC),参与自身免疫性溶血性贫血(AIHA)发病.mTOR抑制剂作用于mTOR信号通路,可以发挥上调调节性T细胞(Treg)数量,下调辅助性T细胞(Th)1、Th2、Th17数量的作用,在复发/难治性AIHA的治疗中发挥重要作用.笔者拟对mTOR分子结构及其信号通路,mTOR参与免疫细胞的调控,以及mTOR抑制剂治疗AIHA等进行综述.

脑缺血后自噬调控的信号通路

大量证据显示，自噬参与了脑缺血再灌注的发生和发展过程，自噬及其相关信号转导通路很可能是缺血性脑损伤的有效治疗靶点。文章对脑缺血后自噬调控的相关信号转导通路进行了综述。