痛风患者血小板来源NLRP3和高迁移率族蛋白1的表达水平及临床意义

目的探讨痛风患者血小板来源含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)与高迁移率族蛋白1(HMGB1)的表达水平,以及两者在痛风中的临床意义。方法收集2022年1月至2023年1月青海大学附属医院风湿免疫科痛风性关节炎(GA)男性患者25例,高尿酸血症(HUA)男性患者23例,同时于医院体检中心选取年龄相匹配的男性健康对照(HC)者15例。提取所有研究对象血小板,采用流式细胞术(FCM)检测血小板来源NLRP3、HMGB1的表达水平。同时收集所有研究对象的一般资料及实验室指标,并对NLRP3、HMGB1与其实验室指标进行Pearson线性相关和Spearman秩相关分析。结果GA组NLRP3、HMGB1阳性细胞率高于HUA组、HC组,HUA组高于HC组,差异有统计学意义(P<0.05)。GA组身体质量指数(BMI)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、中性粒细胞计数(NEUT)、血小板计数(PLT)、血尿酸(UA)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(DD)水平高于HUA组、HC组,HUA组BMI、PLT、UA水平高于HC组(P<0.05);GA组饮酒比例、三酰甘油(TG)水平高于HC组,HUA组饮酒比例、TG水平高于HC组(P<0.05);GA组血小板平均体积(MPV)水平低于HC组(P<0.05)。GA组NLRP3阳性细胞率分别与ESR、CRP、NEUT、PLT、TG、UA、FIB、DD呈正相关,与MPV呈负相关(P<0.05);GA组HMGB1阳性细胞率分别与CRP、NEUT、PLT、TG、FIB、DD呈正相关(P<0.05);HUA组NLRP3阳性细胞率分别与PLT、TG、UA呈正相关(P<0.05);HUA组HMGB1阳性细胞率分别与PLT、TG呈正相关(P<0.05)。结论血小板来源的NLRP3、HMGB1可间接反映痛风患者体内炎症及疾病的活动程度,可能参与了痛风的发生及发展,或有望成为评估痛风的生物学指标。

稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立

目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒载体。经酶切和测序鉴定后,将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和病毒滴度检测。用获得的慢病毒液转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过嘌呤霉素选择性培养,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞中TOX3 mRNA的表达,Western blot法检测MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了pLVEF-1a/GFP-Puro和pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒表达载体,病毒包装后检测病毒滴度分别为2×108TU/mL和1×108TU/mL,转染MDA-MB-231细胞后,GFP表达的细胞达95%以上。与阴性对照组相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,MDA-MB-231-TOX3细胞中TOX3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。结论成功构建了TOX3慢病毒表达载体并建立了稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞系。

CircFNDC3B调节miR-107/HMGA1轴对胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状RNA FNDC3B(CircFNDC3B)调节微小RNA-107/高迁移率家族蛋白A1(miR-107/HMGA1)轴对胃癌(GC)细胞恶性生物学行为的影响。方法体外培养正常胃上皮细胞GES-1和人胃癌细胞系AGS、HCG27、MKN28、BGC-823,RT-qPCR检测CircFNDC3B、miR-107和HMGA1表达,筛选出最佳细胞系。双荧光素酶报告基因实验验证miR-107与CircFNDC3B、HMGA1的靶向关系;选择BGC-823细胞进行转染,将细胞分为si-NC组、si-CircFNDC3B组、si-CircFNDC3B+NC inhibitor、si-CircFNDC3B+miR-107 inhibi-tor组、miR-NC组、miR-107 mimics组、miR-107 mimics+pcDNA、miR-107 mimics+HMGA1组,MTT法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞技术检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、Cyclin D1、Bcl-2、cleaved caspase3、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。结果在胃癌细胞系中CircFNDC3B、HMGA1表达显著增加,miR-107表达显著下降(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-107与CircFNDC3B、HMGA1具有靶向关系;沉默CircFNDC3B表达或过表达miR-107可显著抑制细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,促进细胞凋亡(P<0.05);抑制miR-107表达或过表达HMGA1可逆转沉默CircFNDC3B或过表达miR-107对BGC-823细胞增殖、迁移、侵袭和EMT的抑制作用(P<0.05)。结论CircFNDC3B在胃癌细胞中高表达,沉默CircFNDC3B通过调节miR-107/HMGA1轴抑制胃癌细胞恶性生物学行为。

高迁移率族蛋白B3异常与肝细胞肝癌患者预后分析

目的高迁移率超蛋白家族与肝细胞性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展有关,本研究旨在探讨新标志物高迁移率超蛋白家族成员B3(high mobility group Box 3,HMGB3)对肝癌患者预后的临床预测价值。方法以自身配对法收集2015-08-06-2017-05-23南通大学附属医院行手术治疗肝癌患者的肝癌组织和癌旁组织50例,以免疫组化法分析HMGB3蛋白表达,结合癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)及基因表达数据库相关信息,分析HMGB3基因转录对肝癌患者预后的影响;设计、筛选和验证HMGB3特异shRNA,转染肝癌HCCLM3细胞株,以四甲基偶氮唑盐比色法、克隆形成实验、划痕和Transwell实验分析癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭等,分析HMGB3与HCC生物学特性的关系。结果肝癌HMGB3阳性率(72.0%)高于癌旁组织(28.0%),χ2=19.360,P<0.001。TCGA数据库信息显示,372例肝癌组织HMGB3mRNA高于50例正常肝组织,t=5.041,P<0.001;HMGB3高表达患者中位生存期(47.4个月)低于低表达患者(100.6个月),P=0.031;HMGB3高表达的早期肝癌患者中位生存期(71.0个月)低于低表达患者(108.6个月),P=0.033;接受索拉菲尼治疗的HMGB3高表达肝癌患者中位生存期(22.0个月)低于低表达患者(52.0个月),P<0.001;以有效的shRNA-1干扰质粒转染HCCLM3细胞后,癌细胞增殖、克隆形成(t=5.056,P<0.001)、迁移(t=7.4,P<0.001)和侵袭(t=12.2,P<0.001)等生物学行为受抑制,差异均有统计学意义。结论 HMGB3异常表达与肝癌增殖、迁移、浸润和预后密切相关,是肝癌预后判别且具有应用前景的潜在标志物。

多参数TOX免疫表型法的建立及在母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤中的应用

目的:建立多参数流式检测胸腺细胞选择相关高迁移率族蛋白(TOX)在PD-1、Tim-3和CD244耗竭性T细胞中的免疫表型法,以及其在1例罕见CD4-CD56^(+)表型的血液恶性肿瘤母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)患者中的应用分析。方法:收集1例BPDCN患者骨髓(BM)和外周血(PB),2例非肿瘤手术患者和1例健康者BM以及11例健康者(HI)PB分别作为BM和PB对照组,利用多色流式单抗CD45、CD3、CD4、CD8、CD25、FoxP3、TOX、PD-1、Tim-3、CD244及相应同型对照进行流式细胞检测。结果:流式检测结果提示,BPDCN患者BM和PB中TOX^(+)CD3^(+)、TOX^(+)CD4^(+)和TOX^(+)CD8^(+)T细胞比例均比对照组升高;BPDCN患者BM和PB中TOX^(+)PD-1^(+)CD8^(+)、TOX^(+)Tim-3^(+)CD8^(+)和TOX^(+)CD244^(+)CD8^(+)耗竭性T细胞中的分布比例也显著高于对照组。此外,在BPDCN患者BM和PB的CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg细胞中TOX^(+)细胞分布比例高于对照组;同时TOX^(+)细胞在PD-1^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg、Tim-3^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg和CD244^(+)CD4^(+)CD25^(+)FoxP3^(+)Treg耗竭性T细胞中的分布比例也明显高于对照组。结论:成功建立多参数流式细胞术检测PD-1、Tim-3和CD244耗竭性T细胞亚群中TOX免疫表型法,TOX可能是BPDCN患者T细胞免疫调节的重要转录因子。

基于生物信息学数据库的肺腺癌组织中HMGB1表达及相关下游通路分析

目的:通过生物信息技术探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)促进肺癌进展的潜在关键通路和环节。方法:UALCAN数据库分析HMGB1表达相关的基因和相关基因的生存分析。STRING数据库分析蛋白质-蛋白质相互作用。AnimalTFDB3.0和JASPAR数据库预测转录因子以及结合位点。KEGG数据库分析相关信号通路。结果:生物信息分析结果显示细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)、H2A组蛋白家族成员Z(H2AFZ)与HMGB1的表达在肺腺癌(LUAD)中呈正相关关系,且CDK1和H2AFZ与LUAD的不良预后有关。预测到SOX2和SP1是CDK1或H2AFZ的转录因子。信号通路分析结果显示Akt和ERK可以调控SOX2的表达。结论:CDK1、H2AFZ可能是HMGB1参与LUAD进展的重要节点,HMGB1-Akt/ERK-SOX2-CDK1/H2AFZ可能是HMGB1促进LUAD进展的关键通路。

CYP2C19慢代谢型和HMGB1及YKL-40预测冠脉介入治疗术后感染的临床价值

目的分析老年冠心病患者冠脉介入治疗术后感染现况及细胞色素P450家族成员2C19(CYP2C19)慢代谢型、高迁移率族蛋白(HMGB1)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)联合预测价值。方法将2020年3月-2023年3月锦州医科大学附属第一医院收治的205例冠脉介入治疗患者纳入研究,其中术后感染55例纳入感染组,无术后感染150例纳入非感染组,分析术后感染病原菌分布,比较两组患者CYP2C19慢代谢型占比及血清HMGB1、YKL-40水平,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CYP2C19慢代谢型、HMGB1、YKL-40对术后感染的预测价值。结果205例老年冠心病冠脉介入治疗患者,术后感染55例,感染发生率为26.83%;共分离病原菌69株,其中革兰阴性菌占比71.01%;感染组CYP2C19慢代谢型占比、血清HMGB1、YKL-40水平高于非感染组(P<0.05);ROC曲线分析显示,CYP2C19慢代谢型、HMGB1、YKL-40联合对老年冠心病患者冠脉介入治疗术后感染的预测价值更高,曲线下面积(AUC)为0.924。结论老年冠心病患者冠脉介入治疗术后感染发生风险较高,病原菌以革兰阴性菌为主,CYP2C19慢代谢型、HMGB1、YKL-40水平与术后感染发生相关。

大黄素甲醚通过HMGB1-NLRP3信号通路缓解药物性肝损伤的作用研究

目的探讨大黄素甲醚(physcion,PHY)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠药物性肝损伤的保护作用及其机制。方法C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为5组,分别为对照组,模型组,阳性对照组,大黄素甲醚低、高剂量(20、40 mg/kg)组,采用ip APAP(300 mg/kg)建立药物性肝损伤小鼠模型,观察大黄素甲醚对小鼠肝脏形态及病理学的影响,检测小鼠血清中天冬氨酸转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase,ALT)及肝组织谷胱甘肽(glutathione,GSH)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平;采用Western blotting及反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测小鼠肝组织高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin结构域蛋白3(nucleotide binding oligomerization domainlike receptor family pyrin domain protein 3,NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)蛋白及m RNA水平,同时检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-18 m RNA表达水平。结果与模型组相比,大黄素甲醚低、高剂量组小鼠血清AST、ALT水平及肝组织MDA水平,HMGB1、NLRP3、Caspase-1蛋白和m RNA表达量,IL-1β、IL-18 m RNA表达量显著降低(P<0.01),肝组织GSH活性显著升高(P<0.01)。病理学染色结果显示,与模型组相比,大黄素甲醚可明显改善小鼠肝组织坏死、细胞炎性浸润,且呈剂量相关性。结论大黄素甲醚对APAP诱导的药物性肝损伤有一定的保护作用,其机制可能与其抗氧化应激、减少炎性反应,抑制HMGB1-NLRP3炎性小体信号通路有关。

阿尔茨海默病患者血清NLRP3,HMGB1的表达水平变化及其对患者不良预后的评估价值

目的 探讨阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)患者血清高迁移率族蛋白B1(High mobility group protein B1,HMGB1)、NOD样受体家族蛋白3炎症小体(Nod-like receptor family protein 3 inflammasome,NLRP3)的表达水平变化及其对患者不良预后的评估价值。方法 选取本院于2019年2月-2020年5月收治的AD患者116例,观察患者治疗1年后的预后情况,并根据预后情况分为预后好转组和预后不良组,统计2组患者相关资料,分析AD患者治疗后预后不良的风险因素,并绘制受试者工作特征(Receiver operating characteristic,ROC)曲线,分析血清NLRP3和HMGB1水平对AD患者不良预后的评估价值。结果 预后不良组血清HMGB1、同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein related phospholipase A2,Lp-PLA2)、NLRP3水平均高于预后好转组(P<0.05);Logistic回归分析发现,血清HMGB1,NLRP3,Hcy水平升高为AD患者发生预后不良的独立危险因素(P<0.05);ROC曲线显示,血清HMGB1,NLRP3水平及两者联合对AD患者发生预后不良评估的AUC分别是0.725、0.729、0.796。结论 血清NLRP3和HMGB1水平是评估AD患者预后不良的较好指标,两者联合对AD患者发生预后不良的评估价值较高。