抗HBV多聚酶TP区VH抗体体外可抑制HBV复制

目的:研究抗HBV多聚酶TP区VH抗体抑制HepG2.2.15 细胞的HBV分泌与复制. 方法:用HepG2.2.15细胞分泌的HBV的多聚酶TP区作为抗原,用PCA方法进行VH抗体选择.VH抗体基因克隆到真核表达载体pZeoSV2(+),把载体转化入HepG2.2.1 5细胞而抑制细胞分泌病毒颗粒.荧光定量PCR检测各组细胞HBV DNA含量. 结果:在抗体库中共选择出3个TP区相关抗体.抗TP 区VH抗体可以抑制HepG2.2.15细胞分泌病毒颗粒.加入VH抗体的HepG2.2.15细胞(C组)比没加入VH抗体的HepG2.2.15细胞(A,B组)分泌病毒颗粒明显减少(上清内:3.480±0.32 vs 5.268±0.07,5.105±0.78. P<0.05;细胞内:5.718±0.15 vs 7.716±0.74.7.394±0.97,P<0.05). 结论:抗HBV多聚酶TP区VH抗体可以抑制HepG2.2.15 细胞的HBV分泌与复制.

通过自诱导方法对乙型肝炎病毒聚合酶TP区进行可溶性表达及鉴定

目的构建包含乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)聚合酶TP区段的重组原核表达质粒,转化表达型大肠埃希菌,以自诱导培养方法获得可溶性表达,并对其进行鉴定。方法分析HBV(A型)聚合酶N-末端1-192 AA区域的DNA序列,通过网络工具(http://www.jcat.de/)在线优化,并在5′和3′端分别添加NdeⅠ和XhoⅠ限制性内切酶位点后,送英潍捷基(上海)贸易有限公司进行人工合成;将人工合成的TP-DNA双酶切后,插入pET32a(+)原核表达载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS进行自诱导表达。结果重组原核表达质粒pET32a(+)/POL-TP-Opt经双酶切及测序证明构建正确;在表达菌的破菌上清中有特异性表达的蛋白,相对分子质量约20 000,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,为可溶性的重组TP蛋白。结论通过自诱导培养方法,直接成功获得可溶性的重组TP蛋白,改变了长期以来依靠包涵体复性对TP蛋白相关功能进行研究的状况。

慢性乙型肝炎peg干扰素疗效与TP区和RT区核酸研究

目的探讨慢乙肝聚乙二醇干扰素治疗疗效与TP区和RT区复杂程度的相关性。方法入组HBeAg阳性,HBV DNA阳性的慢乙肝患者,给予聚乙二醇干扰素180μg每周1次皮下注射治疗,收集基线患者血清和患者基线与治疗12周临床信息。对基线HBV DNA的TP区和RT区片段进行扩增、建库、高通量测序,计算香农商和平均遗传距离。结果对108例患者进行logistic回归分析。RT区片段马氏距离和TP区片段的香农商有利于HBVDNA应答,ALT有利于HBeAg应答,HBsAg不利于HBsAg应答。结论基线TP区和RT区核酸可能与慢乙肝聚乙二醇干扰素治疗疗效有关。