梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究

目的初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒p ET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10μg/m L)的r Tp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了p ET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出r Tp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论r Tp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。

梅毒螺旋体TP0136蛋白的研究进展

黏附介导的微生物定植在病原菌感染的起始阶段发挥重要作用,特别是能黏附到宿主多个组织器官,导致全身性播散,引起梅毒螺旋体(Tp)的感染。因此如何能在感染早期通过阻断Tp黏附到宿主成分从而避免传播成为近年研究热点。TP0136蛋白作为三种已知能黏附到细胞外基质纤连蛋白的Tp蛋白之一,在Tp的黏附定植和病原体感染早期发挥重要作用。本文对TP0136蛋白作为Tp重要的黏附蛋白在梅毒致病机制、临床检测和疫苗开发中的研究价值三方面进行综述。

梅毒螺旋体黏附素蛋白TP0136不同亚型重组蛋白在神经梅毒患者血清诊断中的应用

目的探讨不同亚型梅毒螺旋体(Tp)黏附素蛋白TP0136在神经梅毒(NS)患者血液中的诊断价值。方法比较60例NS患者与120例非神经梅毒的梅毒患者(NNS)一般情况。通过分子克隆技术构建表达和纯化Nichols Seattle TP0136(NST)和Nichols Houston TP0136(NHT)重组蛋白,采用ELISA方法检查NS和NNS患者血清中NST和NHT抗体水平。结果NS和NNS患者两组之间年龄、性别、来源地、职业无统计学差异(均P>0.05),而婚姻状况、神经系统症状、血清或血浆TRUST和TPPA滴度、血清或血浆TP-IgM阳性率、脑脊液TRUST和TPPA滴度均有统计学差异(均P<0.05)。NST在NS组和NNS组血清或血浆中抗体水平无差异(t=0.15,P=0.920);NHT在NNS组血清或血浆中抗体水平高于NS患者,差异有统计学意义(t=3.68,P=0.021)。结论Tp黏附素蛋白TP0136重组蛋白NHT或可作为NS诊断的潜在血液学标志物。

梅毒螺旋体Tp0136活性肽段的可溶性表达、纯化及鉴定

目的 筛选梅毒螺旋体特异性抗原Tp0136的活性肽段,可溶性表达和纯化该肽段,并鉴定其免疫活性,探索Tp0136活性肽段在早期梅毒诊断中的价值.方法 通过生物信息学方法对Tp0136亲水性、B细胞表位和二级结构等进行分析,筛选出Tp0136活性肽段（Tp0136B）替代全蛋白.将Tp0136B基因插入到pET22b（＋）上,在E.coli BL21中表达.镍离子亲和色谱纯化表达产物,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以重组Tp0136B蛋白为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体.结果 重组工程菌可溶性表达相对分子质量约为28×103的rTp0136B,表达率为21%,制备得到纯度大于98%的rTp0136B.纯化的rTp0136B能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1：16.Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为85.5%.结论 重组表达的Tp0136活性肽段具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景.

梅毒螺旋体重组蛋白Tp0136的表达、纯化及免疫活性分析

目的 克隆并表达梅毒螺旋体Tp0136基因，对其表达产物进行纯化以及免疫活性分析。方法 全基因合成Tp0136基因，构建E.coli表达载体；诱导表达并纯化重组蛋白，用SDS-PAGE和Western印迹鉴定。用纯化的重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔，并以重组Tp0136作为包被抗原建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）以鉴定其免疫原性，Western印迹检测梅毒阳性血清鉴定其免疫反应性。结果 成功构建E.coli表达载体pET28a-Tp0136，并表达和纯化出膜蛋白Tp0136，相对分子质量为50 000，纯度 〉 95%。用重组蛋白Tp0136免疫新西兰兔，能刺激其产生高滴度抗体，具有较强的免疫原性。Western印迹显示其能与梅毒阳性血清发生特异性反应，具有较好的免疫反应性。结论 成功表达具有Tp0136全基因和较强免疫活性的膜蛋白，Ｔp０１３６可能在梅毒螺旋体的免疫致病机制中起到重要作用。

梅毒螺旋体外膜蛋白Tp0136的制备及在血清学诊断中的应用

目的:为探索梅毒螺旋体(Treponema Pallidum,Tp)外膜蛋白Tp0136在早期梅毒诊断中的价值,利用基因重组技术制备Tp0136蛋白,用于血清抗体的检测。方法:采用PCR扩增Tp0136基因,构建不含信号肽序列的Tp0136基因原核表达载体,SDS-PAGE检测目的蛋白的表达情况,镍离子亲和凝胶分子筛二步法纯化目的蛋白,Western blot检测其免疫反应性,免疫日本大耳白兔评价其免疫原性,免疫双扩检测其效价,以rTp0136为包被抗原的间接ELISA检测早期梅毒血清抗体。结果:重组工程菌包涵体形式表达相对分子质量约为46 KDa的rTp0136,表达率为15%,制备得到纯度大于98%的rTp0136。纯化的rTp0136能诱导大耳白兔产生特异性免疫应答,免疫双扩测得其效价为1:32。Western blot检测重组蛋白能与兔抗Tp0136多克隆抗体发生特异性反应。间接ELISA检测正常人血清均为阴性,而早期梅毒血清抗体的阳性率为75.1%。结论:重组Tp0136具有良好的免疫活性,预示其在早期梅毒血清学诊断中具有良好的前景。

基于TP0136蛋白异质性建立一种新的苍白密螺旋体分子分型方法

目的基于苍白密螺旋体属(TP)TP0136蛋白的异质性,建立一种新的TP分子分型方法。方法从GenBank中查询9株梅毒苍白密螺旋体(TPA)、3株雅司苍白密螺旋体(TPE)、1株未分类的类人猿密螺旋体(FB)和1株地方密螺旋体(TEN)的TP0136开放阅读框(ORF)氨基酸序列并进行多重序列比对,得出TP0136蛋白分子分型结果。利用建立的TP0136蛋白分子分型方法,对2015年1月至2018年12月南方医科大学皮肤病医院收集的23株TPA临床分离株进行分类,并将分型结果与传统的Arp/Tpr/TP0548三基因分型方法进行比较。结果TP0136蛋白在不同种TP株中具有高度异质性,根据TP0136氨基酸序列,TPE、FB和TEN分为Ⅰ~Ⅳ4个亚型,TPA分为Ⅴ~Ⅹ6个亚型,TPA临床株分为Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ4个亚型。通过TPA传统的三基因分型方法可将23株TPA临床株分为13D/d、14D/f、14D/g、15D/f、16A/e 5型。将TP0136分型法与传统分型法相结合,可将上述临床株进一步细分为10型,其中14D/f型应用TP0136分型法可进一步分为3个亚型。结论TP0136分子分型方法可用于TP种的区分,有助于传统TPA分子分型的进一步完善。