梅毒螺旋体Tp0993重组蛋白的表达及鉴定

目的表达、鉴定梅毒螺旋体(Tp)重组蛋白Tp0993(rTp0993),为进一步评价其在梅毒血清学诊断中的意义奠定基础。方法 PCR扩增去除信号肽核苷酸序列的Tp0993基因,构建原核重组体pET-28a/Tp0933并诱导表达蛋白;Ni-NTA法纯化重组蛋白,Western blot检测表达产物的抗原性。结果成功构建了原核重组体pET-28a/Tp0993,经诱导表达了一分子量大约为40 Ku的重组蛋白;Western blot结果显示纯化蛋白能被梅毒患者血清特异性识别。结论 rTp0993有较好的抗原性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的作用奠定了基础。

梅毒螺旋体TP0993重组蛋白的表达、纯化及免疫活性分析

目的探讨梅毒螺旋体重组蛋白TP0993在梅毒血清学诊断中的应用价值。方法通过生物信息学分析，获取TP0993基因序列，构建原核载体进行诱导表达；Ni—NTA亲合层析柱纯化重组蛋白，Western印迹检测其免疫抗原性，用重组蛋白直接注射免疫新西兰家兔，评价其免疫原性。用纯化的TP0993重组蛋白包被微孔板，建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，检测临床梅毒患者血清和健康体检者正常血清，同时与梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）进行比较，根据重组蛋白与梅毒阴阳性血清的反应情况，评价重组抗原在梅毒血清学诊断中的应用价值。结果成功构建PET-28a（＋）-0993原核表达载体，经表达、纯化后获得相对分子质量约为34000的重组蛋白；Western印迹检测显示该重组蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应；利用纯化的TP0993重组蛋白免疫新西兰兔，能诱导新西兰兔产生特异性免疫应答。以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法，对TPPA法检测的480份临床血清进行检测，与TPPA法比较ELISA法的灵敏度为88．3％，特异度为85．8％，ELISA法与TPPA法符合率为86．5％。结论重组表达的TP0993蛋白具有较好的免疫活性，可作为梅毒血清学诊断的候选抗原之一。