茵陈蒿汤对代谢相关脂肪性肝病小鼠“肠TPH1-肝HTR2A轴”的影响

目的基于肠TPH1-肝HTR2A轴探讨茵陈蒿汤防治MAFLD的作用机制。方法24只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、茵陈蒿汤组,每组8只。模型组、茵陈蒿汤组小鼠采用高脂饲料喂饲,12周后,茵陈蒿汤组给予茵陈蒿汤灌胃,每日1次,连续4周。采用HE染色和油红O染色观察肝脏组织病理变化,检测血清HDL-C、LDL-C、TC、TG、AST、ALT和5-HT含量,肝脏TC、TG、DAG、PLC含量,小肠TPH1、SERT及肝脏HTR2A、SREBP-1c、GPAT1、FASN mRNA水平,小肠TPH1、SERT及肝脏HTR2A、PKC-ε、P-PI3K、P-AKT、P-mTOR、SREBP-1c、GPAT1、FASN蛋白表达。结果对照组肝细胞排列整齐,无明显脂肪变性;模型组肝细胞体积肿胀,有明显脂肪变性;与模型组比,茵陈蒿汤组肝细胞脂肪变性显著减少。相较于对照组,模型组肝脏脂质沉积显著升高,茵陈蒿汤显著改善肝脏脂质沉积。与对照组比,模型组肝脏TG和TC水平显著升高(P<0.05);血清AST、ALT、HDL-C、LDL-C、TG、TC水平显著升高(P<0.05);血清5-HT及肝脏DAG、PLC水平显著升高(P<0.05);小肠TPH1及肝脏HTR2A、SREBP-1c、GPAT1、FASN mRNA表达水平显著升高,小肠SERT mRNA表达水平显著降低(P<0.05);小肠TPH1及肝脏HTR2A、PKC-ε、P-PI3K、P-AKT、P-mTOR、SREBP-1c、GPAT1、FASN蛋白表达水平显著升高,小肠SERT蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比,茵陈蒿汤组肝脏TG和TC水平显著降低(P<0.05);血清AST、ALT、HDL-C、LDL-C、TG、TC水平显著降低(P<0.05);血清5-HT及肝脏DAG、PLC水平显著降低(P<0.05);小肠TPH1及肝脏HTR2A、SREBP-1c、GPAT1、FASN mRNA表达水平显著降低,小肠SERT mRNA表达水平显著升高(P<0.05);小肠TPH1及肝脏HTR2A、PKC-ε、P-PI3K、P-AKT、P-mTOR、SREBP-1c、GPAT1、FASN蛋白表达水平显著降低,小肠SERT蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论茵陈蒿汤可能通过肠TPH1-肝HTR2A轴调节肝脏TG合成,从而抑制MAFLD发生发展。

抗精神分裂症药物对吐鲁番斗鸡5-HTT和TPH1基因表达的影响

为探讨不同抗精神分裂症药物对吐鲁番斗鸡攻击行为影响的分子机理,试验将36只斗鸡随机分为12组,并选取利培酮、阿立哌唑、盐酸曲唑酮、盐酸舍曲林4种抗精神分裂症药物,且每种药物设有低剂量组(L)、正常剂量组(N)及高剂量组(H),每天人工口服给药。分别在第1、2、5、8、11、14天时,翅下静脉采血,并采用实时荧光定量PCR法对口服不同剂量药物的吐鲁番斗鸡各阶段血液中5-羟色胺转运体(5-hydroxy-tryptamine transporter,5-HTT)、色氨酸羟化酶1(tryptophan hydroxylase 1,TPH1)的mRNA表达量进行检测。结果显示,口服4种药物后,利培酮组和阿立哌唑组斗鸡血液中5-HTT、TPH1基因mRNA的表达变化具有相似性,5-HTT基因整体呈下降趋势,TPH1基因均表现为波动性上升,且利培酮组TPH1基因mRNA的表达量及上升幅度高于阿立哌唑组;盐酸曲唑酮组和盐酸舍曲林组5-HTT基因mRNA的表达均从第5天开始呈直线上升,并于第14天达到峰值,且盐酸舍曲林组TPH1基因的表达呈微上调,盐酸曲唑酮组则无明显变化。利培酮组和阿立哌唑组斗鸡攻击行为减弱与其血液中5-HTT基因mRNA的低表达有关,本试验结果为进一步研究药物影响吐鲁番斗鸡攻击行为的分子机理提供了重要参考依据。

肠源性TPH1、LRP5表达及血清5-HT水平与雄性大鼠增龄性骨量丢失相关

目的观察不同月龄SD雄性大鼠十二指肠TPH1、LRP5表达水平及血清5-HT水平,分析其在增龄中的变化及增龄性骨量丢失的相关性。方法分别选取2、6、12、15和18月龄大鼠各6只,共30只,按照月龄分组以模拟增龄性模型。分别用RT-PCR法、Western blot法检测十二指肠TPH1和LRP5的mRNA和蛋白表达,用ELISA方法检测血清5-HT水平,双能骨密度仪测定大鼠离体股骨骨密度。结果十二指肠TPH1 mRNA和蛋白表达及血清5-HT水平随年龄的增长而增加,与增龄性骨量丢失呈负相关性(P<0.001)。结论肠源性5-HT及其关键合成限速酶TPH1表达在增龄性骨量丢失中发挥着重要作用,可能成为老年性骨质疏松潜在治疗干预靶。

济川煎对老年慢传输型便秘大鼠TPH1、5-HT表达的影响

目的:探索济川煎对老年慢传输型便秘(STC)大鼠结肠色氨酸羟化酶1(TPH1)、五羟色胺(5-HT)表达的影响,阐述济川煎的通便机制。方法:30只老年SD大鼠,随机分为空白对照组、老年STC模型组、济川煎组,每组10只。复方苯乙哌啶饲养大鼠建立老年STC大鼠模型。济川煎组用济川煎汤剂灌胃,空白对照组和老年STC组经灌胃给予等量的生理盐水。10 d后记录各组大鼠一般情况,活性炭灌胃法检测肠道推进率,荧光免疫组织化学法检测结肠TPH1、5-HT表达。结果:与空白组比较,老年STC大鼠肠道推进率下降(48.86±5.98)%(P<0.05),济川煎实验组与模型组比较,肠道推进率上升(62.78±7.26)%(P<0.05)。模型组大鼠结肠TPH1阳性细胞数(9.97±2.94)个,低于空白对照组(28.54±8.94)个,模型组5-HT阳性细胞数(5.6±1.37)个低于空白组(10.72±2.43)个;与模型组比较,济川煎组大鼠结肠TPH1阳性细胞数增多(22.48±7.82)个,5-HT阳性细胞数增多(8.91±2.75)个(P<0.05)。结论:济川煎方可显著改善老年慢传输型便秘模型大鼠便秘症状,可能是通过升高TPH1,提高5-HT表达水平,从而调节肠道功能,发挥治疗慢传输型便秘的作用。

斑马鱼Tph1a蛋白表达、纯化及对脂代谢基因的影响

对斑马鱼色氨酸羟化酶1a (Tph1a)进行原核表达、纯化,探究其在斑马鱼脂代谢中的作用。根据大肠埃希菌的偏爱密码序列,优化斑马鱼tph1a编码区,插入原核表达载体pET-28a,构建融合蛋白表达质粒,并诱导表达、纯化和复性后,腹腔注射斑马鱼,检测其对脂代谢基因表达的影响。结果表明:重组蛋白Tph1a表达形式为包涵体;纯化和复性后的蛋白质具有57 ku的特异性条带;腹腔注射复性蛋白后,高脂组斑马鱼acc、pgc1α基因等表达上调,lpl基因表达下调,且pgc1α基因的表达丰度远高于其他脂代谢基因。这一研究成功构建了原核表达载体pET-28a-tph1a,获得体外高效表达;该蛋白质不仅诱导肥胖斑马鱼的长链脂肪酸合成阻滞,更促进脂肪酸氧化与分解,为探究Tph1a在鱼类脂代谢调控中的功能奠定了基础。

银莱汤对胃肠积热合并肺炎大鼠5-HT水平及Th17/Treg细胞平衡的影响

目的探究银莱汤对胃肠积热合并肺炎大鼠5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平,以及辅助性T细胞17(T helper cell 17,Th17)与调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)细胞平衡的影响,阐明银莱汤治疗胃肠积热合并肺炎的相关机制。方法将30只4周龄SPF级大鼠随机分为正常组、胃肠积热组、肺炎组、胃肠积热合并肺炎组、银莱汤组治疗组,每组6只。正常组给予大鼠维持饲料、纯水灌胃、纯水雾化;胃肠积热组给予高热量饲料配合牛奶灌胃制备胃肠积热模型;肺炎组采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(0.5 mg/mL)雾化吸入制备肺炎模型;胃肠积热合并肺炎组以特制高热量饲料联合LPS雾化制备胃肠积热合并肺炎模型;银莱汤治疗组在胃肠积热合并肺炎模型的基础上给予银莱汤(每100g体重按照0.56 g/mL)灌胃。每日监测大鼠进食量、体质量、肛温等指标。采用HE染色观察肺组织病理学改变;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测各组大鼠血清中5-HT及白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、IL-17A、IL-10、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等细胞因子水平;蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes,MLNs)中Th17细胞、Treg细胞特异性转录因子Rorγt和Foxp3的表达水平;RT-PCR和WB检测结肠组织色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase,Tph)1的表达。结果与肺炎组相比,胃肠积热合并肺炎组大鼠肺部炎性损伤明显;血清5-HT、IL-10水平降低,IL-17A水平升高,TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子水平升高;结肠Tph1的mRNA及蛋白表达水平降低;MLNs中Rorγt蛋白表达升高、Foxp3蛋白表达降低。与胃肠积热合并肺炎组相比,银莱汤治疗组大鼠肺部炎性损伤减轻,血清5-HT水平、IL-10水平升高,IL-17A水平降低,TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子水平降低;结肠Tph1 mRNA及蛋白表达水平升高;MLNs中Rorγt蛋白表达降低、Foxp3蛋白表达升高。结论胃肠积热合并肺炎可导致大鼠机体炎性因子水平升高、5-HT水平降低以及Th17/Treg细胞失衡;银莱汤可以通过调节胃肠积热合并肺炎大鼠5-HT水平,调节Th17/Treg细胞平衡,进而起到治疗作用。

当归多糖对慢性应激抑郁小鼠的行为影响及其机制研究

目的:探讨当归多糖对慢性应激抑郁小鼠的影响及其作用机制。方法:将60只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、当归多糖低剂量组(20 mg/kg当归多糖灌胃)、当归多糖高剂量组(40 mg/kg当归多糖灌胃)及氟西汀组(10 mg/kg氟西汀灌胃),每组12只。使用慢性应激方法诱导小鼠抑郁行为并在造模的同时灌胃给药。使用行为学评估方法评价慢性应激小鼠抑郁行为[糖水偏好率、强迫游泳测试(forced swimming test,FST)、悬尾测试(tail suspension test,TST)和高架十字迷宫实验(elevated plus maze test,EPMT)];使用LC-MS/MS色谱法检测小鼠海马组织中神经递质含量[多巴胺(Dopamine,DA)、5羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)、血糖(Glucose,GLU)和GABA/GLU率];使用qPCR法检测小鼠海马组织中色氨酸羟化酶1(recombinant tryptophan hydroxylase 1,TPH1 mRNA)和人突触小体相关蛋白(synaptosomal associated protein 25,SNAP25 mRNA)表达。结果:40 mg/kg当归多糖能够明显增加小鼠FST与TST累积不动时间(P<0.05),降低小鼠EMPT中进入开臂时间及糖水偏好率(P<0.05),减少鼠海马组织中DA、5-HT含量、TPH1 mRNA表达量及GABA/GLU比率(P<0.05)。结论:当归多糖能够改善慢性应激模型小鼠抑郁行为,其作用机制与上调TPH1 mRNA表达,引起5-HT合成增加,提高DA含量及升高GABA/GLU比率有关,可以调节神经递质传导,纠正小鼠兴奋抑制功能紊乱,但与调节SNAP25 mRNA表达变化无关。

色氨酸羟化酶基因遗传多态性与精神分裂症及攻击行为的关联研究进展

对近年来色氨酸羟化酶基因(TPH1、TPH2)遗传多态性与精神分裂症及攻击行为的关联研究进行简要回顾。

新疆维吾尔族群体色氨酸羟化酶1基因T3804A位点多态性与抑郁症的关联

目的探讨新疆维吾尔族群体色氨酸羟化酶1(TPH1)基因T3804A(rs623580)位点多态性与抑郁症的关系。方法采用聚合酶链式反应产物直接测序的方法检测104例抑郁症患者(研究组)和90例正常体检者(对照组)TPH1基因rs623580位点的基因型。应用SPSS10.0分析基因多态性与抑郁症相关性。结果研究组与对照组TPH1基因rs623580位点的基因型频率差异(χ2=6.560,P=0.038)和等位基因频率差异(χ2=5.517,P=0.019)具有统计学意义。研究组与对照组按性别分亚组,女性研究组与对照组基因型频率差异(χ2=8.026,P=0.018)和等位基因频率差异(χ2=7.154,P=0.007)具有统计学意义。男性研究组与对照组基因型频率差异和等位基因频率差异不具有统计学意义。结论新疆维吾尔族群体色氨酸羟化酶1基因T3804A位点与抑郁症的发病可能具有关联性,A等位基因可能是抑郁症的易感基因。

产芽孢菌调控五羟色胺促进胃肠动力的机制研究

为探究产芽孢菌对胃肠运动的调节作用及其潜在机制,利用氯仿提取法在体外提取健康志愿者粪便中的产芽孢菌菌液,并通过聚合酶链式反应验证产芽孢菌菌液的提取效果。运用抗生素鸡尾酒法建立伪无菌(pseudo-germfree,PGF)小鼠模型,并用粪便菌悬液涂板实验及肠杆菌基因间保守重复序列-聚合酶链式反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus sequences-polymerase chain reaction,ERIC-PCR)进行模型评价。PGF小鼠造模第11天,小鼠粪便悬液涂板无明显菌落且ERIC-PCR条带显著减少,表明实验造模成功。成模后,将小鼠随机分为模型组和产芽孢菌定殖组,进行两周的产芽孢菌定殖,采用荧光定量核酸扩增检测方法检测产芽孢菌定殖情况。通过小肠推进率和胃残留率实验测定胃肠动力,并收集小鼠结肠和血浆,检测其中五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的含量以及结肠中色氨酸羟化酶1(tryptophan hydroxylase 1,TPH1)的表达水平。实验结果表明,产芽孢菌定殖后,小鼠胃残留率显著下降(P<0.05),小肠推进率显著升高(P<0.01),粪便中瘤胃球菌属、扭链瘤胃球菌属、多尔氏菌属含量显著上升,结肠和血浆中5-HT含量明显提高,但是结肠中TPH1表达明显下调。表明产芽孢菌可通过提高肠道和血浆中5-HT的含量水平以促进胃肠运动。

蜘蛛香环烯醚萜类成分对肠易激综合征大鼠的作用机制研究

目的探讨蜘蛛香环烯醚萜类成分对肠易激综合征(IBS)模型大鼠5-羟色胺(5-HT)、色氨酸羟化酶1(TPH1)以及单胺氧化酶A(MAO-A)的影响。方法 SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、匹维溴铵组和蜘蛛香环烯醚萜类成分高、中、低剂量(0.60、0.30、0.15 mg/kg)组,采用慢性应激方法建立IBS大鼠模型,观察蜘蛛香环烯醚萜类成分对各组大鼠腹部回撤反射压力阈值的影响。采用高效液相-电化学法测定血清5-HT的含量,RT-PCR检测各组大鼠结肠TPH1mRNA的表达,比色法测定结肠MAO-A活性。结果模型组大鼠的疼痛压力阈值和最大耐受压力阈值显著降低(P<0.01),蜘蛛香环烯醚萜类成分各剂量均可显著增加模型大鼠压力阈值(P<0.01)。模型组大鼠血清5-HT水平升高(P<0.05),结肠TPH1mRNA表达水平升高(P<0.01),MAO-A活性降低(P<0.05)。蜘蛛香环烯醚萜类成分中剂量以及匹维溴铵均可显著降低血清5-HT的水平以及结肠TPH1mRNA表达,并显著增加MAO-A的活性(P<0.01,P<0.05);蜘蛛香环烯醚萜类成分低剂量可显著降低结肠TPH1mRNA表达(P<0.05),并显著增加MAO-A的活性(P<0.05)。结论蜘蛛香环烯醚萜类成分可通过对结肠TPH1和MAO-A的调节作用,影响血清5-HT表达水平,降低IBS大鼠内脏敏感性。