TPO基因修饰的基质细胞对巨核系细胞的定向扩增作用

目的 研究TPO基因修饰的基质细胞对CD34+ 造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响。方法 将TPOcDNA构建到pBabe pura中 ,通过“乒乓转染法”获得产高滴度逆转录病毒载体的包装细胞 ;利用所获的病毒上清转染基质细胞HFCL ,用Northernblot检测细胞中TPO基因的表达 ,并利用TPO依赖株检测上清中的TPO活性 ;以未转基因的HFCL为对照 ,将CD34+ 造血细胞在TPO基因修饰的HFCL支持下扩增 ,用流式细胞仪检测扩增细胞中表型为CD34+ CD41+ 和表型为CD41+ CD6 1+ 细胞的比例。结果 基质细胞HFCL能够有效表达外源性TPO基因 ,在HFCL TPO培养上清中有 0 75ng ml水平的TPO活性 ;并且在HFCL TPO支持下 ,CD34+ 造血细胞经过 7d扩增后 ,CD34+ CD41+ 细胞的比例为 (13 7± 2 0 ) % ,HFCL为 (6 5± 1 8) % (P <0 0 1) ;CD41+ CD6 1+ 细胞的比例为 (11 9± 0 7) % ,略高于HFCL的 (10 6± 1 5 ) % (P >0 0 5 )。结论 基质细胞能够有效表达外源性TPO基因和其蛋白 ,而且TPO基因修饰的基质细胞能显著促进CD34+ CD41+ 巨核祖细胞的扩增 ,但对较成熟的CD41+ CD6 1+

先天性甲状腺功能减低症一家系TPO基因突变分析

目的对一个有2例患者的先天性甲状腺功能减低症家系进行甲状腺过氧化物酶(TPO)基因突变研究。方法对该家系中4名成员采样并提取DNA,用PCR扩增先证者TPO基因各外显子、外显子-内含子交界区以及3'端和5'端非翻译区,以DNA测序技术检测基因突变,并与该家系中其他成员进行对照分析。结果先证者和其患同病的姐姐为TPO基因c.2268insT突变的纯合子,其父母均为此突变的杂合子。结论 TPO基因突变是中国人群先天性甲状腺功能减低症发生的原因之一。

电脉冲介导的Tpo基因转移对正常及实验性血小板减少小鼠的促血小板生成作用

目的 应用电脉冲介导的重组人血小板生成素 (rhTpo)基因的体内转移 ,探讨其对正常及实验性血小板减少小鼠的促血小板生成作用。方法 应用基因重组技术 ,构建真核细胞高表达质粒pcDI Tpo ,将 2 0 0 μgpcDI Tpo质粒注入正常及实验性血小板减少小鼠的股四头肌内 ,随后给予 10 0V、1Hz、40ms电刺激 6次 ,用RT PCR及Westernblot方法观察rhTpo基因在正常小鼠骨骼肌内的表达 ,ELISA法测定小鼠血浆Tpo水平。用细胞计数板计数小鼠外周血血小板。结果 成功构建了真核细胞高表达质粒pcDI Tpo。将pcDI Tpo转染小鼠后 ,在小鼠的骨骼肌内有rhTpomRNA及蛋白的表达 ,血浆Tpo水平由 (2 5 0± 76 )ng L升高至 (1185± 2 6 4)ng L。正常小鼠的外周血血小板由 (2 5 9± 2 7)× 10 9 L最高升高至 (6 40± 31)× 10 9 L ;注射卡铂后 ,转pcDI Tpo组小鼠的血小板最低下降至 (138± 2 4)× 10 9 L ,比转pcDI空载体组 [(98± 19)× 10 9 L]和单纯注射卡铂组 [(92± 16 )× 10 9 L]最低值高 ,同时血小板恢复时间提前 ,第 14天已恢复至 (2 38± 2 6 )× 10 9 L。结论 应用电脉冲介导的基因转移方法 ,可使rhTpo基因在小鼠骨骼肌内有效地表达 。

经典型BCR-ABL1阴性MPNs患者JAK2、CALR及MPL基因突变检测及临床分析

目的分析经典型BCR-ABL1融合基因阴性骨髓增殖性肿瘤(MPNs)患者JAK2 V617F、CALR、MPL基因突变情况及临床特征。方法回顾性分析连续2年来单中心126例经典型BCR-ABL1融合基因阴性的MPNs患者的临床资料及实验室数据。结果①JAK2 V617F突变率在MPNs患者中最高,占77.78%,PV患者占95.24%。ET患者中JAK2 V617F突变阳性患者的血红蛋白计数显著高于三阴性患者,年龄大于CALR突变阳性患者(P<0.05);PMF患者中JAK2 V617F突变阳性的白细胞计数高于三阴性患者(P<0.05)。②年龄≥60岁患者中血栓事件发生率明显高于年龄<60岁患者(P=0.015)。血栓组中WBC、PLT、纤维蛋白原(Fb)较非血栓组明显升高(P<0.05)。结论经典型BCR-ABL1阴性MPNs患者JAK2 V617F突变率高,JAK2 V617F阳性、高龄(≥60岁)、高WBC计数、高PLT计数及高Fb值的患者更易发生血栓事件。

关于中医治疗和研究甲状腺功能亢进症的两点思考

在遵循"经典方剂-临床疗效-机理探讨"的原则,研究甲状腺功能亢进症,发现该病辨证多属阴虚热盛或气阴两虚,与温热病病机多有相同之处,热象是两者共同的病理特征,故将温病学的辨证方法如三焦辨证、卫气营血辨证等用于辨治甲状腺功能亢进症,能够取得良好效果。探讨疗效机理可试从甲状腺球蛋白(TG)、甲状腺过氧化物酶(TPO)基因表达。细胞凋亡等角度进行,在目前国内外尚没有甲亢成熟造模方法的状况下,FRTL细胞则是研究中医药作用机理的一种较好的体外模型。

109例先天性甲状腺功能减低症患儿甲状腺过氧化物酶基因突变检测

目的对109例先天性甲状腺功能减低症患儿进行甲状腺过氧化物酶基因(TPO)基因突变研究。方法对109例先天性甲状腺功能减低症患儿采样并提取DNA,用wafergen验证检测患儿TPO基因突变。PCR扩增患儿TPO基因各外显子、外显子-内含子交界区以及3′端和5′端非翻译区,以DNA测序技术检测TPO基因突变。结果 7例CH患儿存在7种TPO基因突变,分别为c.1082G>T[p.Arg361Leu]、c.1117G>T[p.Ala373Ser]、c.2012G>T[p.Trp671Leu]、c.2268ins T[p.Glu757fs]、c.1471C>T[p.Arg491Cys]、c.2173A>C[p.Thr725Pro]、c.2647C>T[p.Pro883Ser]。结论中国人群先天性甲状腺功能减低症患儿存在较高频率的甲状腺过氧化物酶基因突变。