Mpl受体介导的HEL细胞电子传递反应的变化

为研究Mpl受体介导的HEL细胞电子传递反应的变化，建立了用细胞电极测定HEL细胞电子传递的电化学方法。结果发现，当TPO-Mpl作用后数分钟可以观察到一个向上的“∧”形氯化电位，TPO-Mpl的量大作用出现在5分钟内，TPO-Mpl的解离在二者作用后60分钟趋向明显，240分钟后完全解离。Scatchard分析说明HEL细胞表面有两种Mpl受体亲和力(K1=18pmol/L，K2=1．1nmol／L)。结果提示，TPO与Mpl受体结合迅速，解离缓慢，HEL细胞上存在两种亲和力的Mpl受体。该方法灵敏、方便，可以连续观察，需要细胞少(1．0×10^4细胞)。

人TPO基因转染肝癌细胞后的表达及其受体水平的变化

从hTPO工程菌株中提取的pcDNA3/TPO质粒用脂质体包裹后转染人肝癌细胞株HepG2 ,并以未转染的HepG2和转染pcDNA3野生型质粒的HepG2作为对照 ,研究hTPO和其受体c mpl在三组细胞中的表达情况以及HepG2细胞的生长情况 ,发现 (1 )RT PCR法检测结果表明pcDNA3/TPO基因在转染HepG2细胞后 ,mRNA能有效表达 ,但对c mpl的表达基本无影响 ;(2 )细胞的生长计数和MTT法检测结果说明hTPO的有效表达对人肝癌细胞株HepG2的生长、繁殖有一定的抑制作用 。

TPO在COH/dhfr-中的表达及生物活性测定

目的:研究获得高效表达重组蛋白TPO-His的哺乳动物表达系统稳定细胞株。方法:采用overlap PCR拼接得到带有TPO信号肽的TPO N-端功能区序列;构建重组表达载体pCDNA3.1-TPO-His,然后将其与pSV2-dhfr载体磷酸钙法共转哺乳动物表达系统细胞系COH/dhfr-,经过G418、MTX及条件培养基多重压力筛选得到高效表达重组蛋白TPO-His的稳定细胞株;通过采用GIEMSA法检测TPO刺激UT-7/EPO-Mpl细胞的分化作用来测试重组蛋白TPO-His的生物活性。结果:经过多重压力筛选获得高效稳定分泌表达目的蛋白的细胞株CHO(dhfr-)/pCDNA3.1-TPO-His,其表达量可达2.8μg/106cells/24h,纯化蛋白具有较高的生物活性。结论:研究获得具有高效分泌表达目的蛋白的稳定细胞株,其表达产物TPO-His具有较高的生物学活性。

Combination of two target agonists of the thrombopoietin and thrombopoietin receptor in the treatment of elderly patients with refractory immune thrombocytopenia

Immune thrombocytopenia(ITP)is common in the elderly.Because of the coexistence of multiple diseases,there are many reservations regarding corticosteroid use in the elderly.Thrombopoietin(TPO)and its analogs can promote platelet production,but it is often difficult to correct TP in a short period.Recombinant human TPO(rh-TPO)acting on the cell membrane and the small-molecule TPO-receptor(MPL)agonist acting on the transmembrane receptor may have synergistic effects and accelerate platelet production because of different sites of action in the signaling pathway.In this study,two elderly patients with refractory ITP were successfully treated with two TPO-MPL signaling pathway agonists:recombinant human thrombopoietin(rh-TPO)and eltrombopag.This combination is safe with rapid and lasting effects.However,in elderly patients with refractory,recurrent,and glucocorticoid contraindications,the combination of different TPO agonists'clinical efficacy and adverse reactions needs to be further evaluated.

六味地黄汤、补中益气汤、复方丹参饮对骨髓抑制小鼠保护的作用机制

目的:进一步研究补肾阴、补气、活血中药方对骨髓抑制小鼠保护的作用机制。方法:使用实时荧光定量RT-PCR检测小鼠脾脏促血小板生成素(thrombopoietin,TPO)mRNA、促血小板生成素受体(c-Mpl)mRNA及转录因子GATA-1mRNA表达水平。结果:六味地黄汤、补中益气汤均能明显升高骨髓抑制小鼠TPO,c-Mpl及GATA-1mRNA的表达。复方丹参饮对小鼠脾脏TPO,c-Mpl及GATA-1mRNA表达影响不明显。结论:六味地黄汤、补中益气汤均能通过升高骨髓抑制小鼠TPO,c-Mpl及GATA-1mRNA的表达水平从而促进骨髓抑制小鼠的外周血恢复。