目的:构建TPT1真核表达载体,并转染肝癌细胞系SMMC-7721,为进一步研究奠定基础。方法:通过PCR的方法在TPT1 ORF(open read ing fram e,开放读码框)两侧添加EcoR I和BamH I的识别序列,将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-...目的:构建TPT1真核表达载体,并转染肝癌细胞系SMMC-7721,为进一步研究奠定基础。方法:通过PCR的方法在TPT1 ORF(open read ing fram e,开放读码框)两侧添加EcoR I和BamH I的识别序列,将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-N3TPT1重构体,卡那霉素筛选阳性克隆,碱裂解法抽提质粒,Sanger法测序,VecScreen和BLAST分析测序结果,lipofectAM INE转染肝癌细胞系SMMC-7721,荧光显微镜及RT-PCR方法检测表达效率。结果:成功扩增了带有特异性核酸内切酶识别位点的TPT1 ORF片段,双酶切后连入pEGFP-N3,测序结果证明TPT1正确插入pEGFP-N3中,转导SMMC-7721后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N3TPT1转导的细胞,TPT1mRNA水平较对照高0.78倍(P<0.05)。结论:成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,pEGFP-N3TPT1可在SMMC-7721细胞内高效表达。展开更多
文摘目的:构建TPT1真核表达载体,并转染肝癌细胞系SMMC-7721,为进一步研究奠定基础。方法:通过PCR的方法在TPT1 ORF(open read ing fram e,开放读码框)两侧添加EcoR I和BamH I的识别序列,将其定向插入真核报告表达载体pEGFP-N3中,构成pEGFP-N3TPT1重构体,卡那霉素筛选阳性克隆,碱裂解法抽提质粒,Sanger法测序,VecScreen和BLAST分析测序结果,lipofectAM INE转染肝癌细胞系SMMC-7721,荧光显微镜及RT-PCR方法检测表达效率。结果:成功扩增了带有特异性核酸内切酶识别位点的TPT1 ORF片段,双酶切后连入pEGFP-N3,测序结果证明TPT1正确插入pEGFP-N3中,转导SMMC-7721后,在荧光显微镜下,可见细胞发出明亮的绿色荧光,转染效率在30%左右。RT-PCR分析显示,pEGFP-N3TPT1转导的细胞,TPT1mRNA水平较对照高0.78倍(P<0.05)。结论:成功构建了TPT1的真核报告表达载体pEGFP-N3TPT1,pEGFP-N3TPT1可在SMMC-7721细胞内高效表达。
文摘目的明确TPT1-AS1在胃癌及远端基本正常组织中的差异表达,探讨其表达水平与胃癌临床病理特征的相关性,评价其作为胃癌生物标志物的可能性。方法采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)方法检测TPT1-AS1在胃癌患者的肿瘤组织(73例)及远端基本正常组织(66例)标本的表达水平。结果TPT1-AS1在胃癌组织中的表达水平较远端基本正常组织低表达,其表达水平与胃癌临床病理特征如年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤生长部位等无相关性( P >0.05)。TPT1-AS1作为胃癌诊断生物标志物时,曲线下面积、灵敏度及特异性分别为0.641、72.6%及51.5%。生存分析结果显示,高表达患者预后优于低表达患者,但差异无统计学意义( P >0.05)。结论TPT1-AS1在胃癌组织中表达降低,具有作为胃癌诊断生物标志物的可能,本研究为胃癌的早诊、早治提供新的线索。
