EB病毒潜伏膜蛋白1通过TRAF/TRADD激活JNK信号途径

为了探讨在鼻咽癌细胞中EB病毒编码的潜伏膜蛋白 1(LMP1)激活c Jun氨基端激酶 (JNK)信号途径的分子机制 ,利用可调控表达LMP1的鼻咽癌细胞系L7,蛋白质印迹检测 ,发现LMP1能够促进JNK的活化 ;利用稳定表达LMP1的鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1及其三种突变体HNE2 LMP1ΔCTAR 1、HNE2 LMP1ΔCTAR2、HNE2 LMP1ΔCTAR 1,2及LMP1阴性的HNE2 为材料 ,采用蛋白质印迹和报告基因法分析JNK和活化蛋白 1(AP1)活化情况 ,结果显示HNE2 LMP1和HNE2 LMP1ΔCTAR1中磷酸化JNK蛋白表达量和AP1活性都无显著差异 ,而与HNE2 LMP1ΔCTAR2、HNE2 LMP1ΔCTAR1,2、阴性对照HNE2及空白载体转染细胞的JNK蛋白表达和AP1活性具有显著差异 ;进一步比较转染TRAF、TRADD显性负性突变体鼻咽癌细胞系HNE2 LMP1中磷酸化的JNK量和AP1活性 ,结果显示 :TRAF DN和TRADD DN的导入使活化的JNK蛋白和AP 1活性显著降低 ,二者间无显著差异 ,提示TRAF和TRADD可能参与了LMP1对JNK和AP 1的活化 .以上结果提示在鼻咽癌细胞系中LMP1功能结构域CTAR2通过结合TRAF/TRADD激活JNK从而活化重要的转录因子AP1.

脱氢胆酸调控OPG/RANK和TRAF3抑制破骨细胞分化

目的探讨脱氢胆酸(dehydrocholic acid,DHCA)对破骨细胞(osteoclasts,OCs)分化及功能的影响。方法采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa B(NF-κB)-ligand,RANKL)诱导成熟骨髓来源的巨噬细胞分化为OCs。通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP/ACP5)染色,确定DHCA抑制OCs形成的最佳浓度。qRT-PCR检测OCs分化和功能相关基因TRAP/ACP5、组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP9)的基因表达。Western blot检测OCs中TNF受体相关因子3(TNF receptor-associated factor 3,TRAF3)、NF-κB受体活化因子(receptor activator of NF-κB,RANK)和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)的蛋白水平。结果DHCA浓度为200μmol/L是抑制OCs形成的最佳剂量(P<0.01)。DHCA抑制OCs分化和功能相关基因ACP5、CTSK和MMP9的表达(P<0.01)。DHCA通过下调RANK蛋白和增加TRAF3和OPG蛋白的表达来抑制OCs的分化(P<0.01)。结论DHCA通过调控OPG/RANK和TRAF3抑制OCs分化,这可能是一种有效的骨质疏松前体药物。

许氏平鲉(Sebastes schlegelii)TRAF基因的鉴定及其响应杀鱼爱德华氏菌侵染的表达模式研究

TRAF是机体内一种具有信息传导作用的胞内因子,承担多个受体家族的信号转导工作,在固有免疫以及获得性免疫方面都发挥出重要作用。TRAF作为一类胞内接头蛋白,对多条信号途径的活化具有一定的影响,包括细胞的增殖、生存、凋亡、炎症反应、免疫反应等。目前已有研究表明鱼类中的TRAF基因也发挥重要的免疫防疫作用。以许氏平鲉为研究对象,基于基因组和转录组的数据库,进行了许氏平鲉TRAF基因家族的系统鉴定。在许氏平鲉中共鉴定到9个TRAF基因,并对这些TRAF基因的长度和氨基酸个数进行了统计分析。同时,分析了这9个TRAF基因的结构特征。选取了包括许氏平鲉在内的6种鱼类进行了TRAF基因的共线性分析。结果显示,TRAF基因在硬骨鱼类中具有保守的共线性。通过系统发育分析,更好地解析了TRAF家族基因的进化关系,同时也证明了对其鉴定及命名的准确性。此外,还进行了TRAF家族基因的蛋白质相互作用网络预测以及表达模式分析。通过蛋白质相互作用的网络分析,得到TRAF基因与其互作蛋白的关联状况。在杀鱼爱德华氏菌侵染许氏平鲉后的不同时间点,探究TRAF基因在杀鱼爱德华氏菌刺激下的表达模式。定量结果显示,除TRAF4.1外,其他TRAF基因在感染后均存在不同程度的上调。综上所述,从分子水平上揭示了许氏平鲉TRAF家族基因的结构和功能,揭示了TRAF可能依赖的免疫通路,为进一步探究TRAF家族基因在许氏平鲉先天免疫过程中的作用奠定了基础。

siRNA靶向干扰TRAF6的表达对肺癌细胞增殖与凋亡的影响

研究旨在探究体外干扰肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)的表达对肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响以及可能的作用机理。siRNA转染A549细胞,运用荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测siRNA转染后TRAF6的mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测增殖情况,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室探究转染后细胞的侵袭能力,Western blotting检测TRAF6/TAK1通路相关蛋白(TAK1、ub-TAK1、p-TAK1、Bax、Bcl-2)的表达水平。A549细胞经siRNA干扰后,TRAF6 mRNA和蛋白的表达水平与空白对照组相比均显著下降,细胞增殖减少,凋亡增多,且侵袭能力下降明显。同时,干扰TRAF6的表达抑制了TAK1的活化,明显诱导Bax表达,显著抑制了Bcl-2蛋白的表达。结果表明干扰TRAF6的表达可以抑制肺癌细胞的增殖和侵袭,促进凋亡,其作用机制可能与抑制TRAF6/TAK1信号通路活化有关。

基于TRAF2/AP-1信号通路探讨柴苓合剂对痰瘀互结MS-IR大鼠炎症因子影响

目的基于TRAF2/AP-1信号通路探讨柴苓合剂对痰瘀互结代谢综合征胰岛素抵抗(MS-IR)大鼠糖代谢、脂代谢、炎症因子的部分作用机制。方法48只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组和造模组。造模组大鼠采用高脂高糖饲料喂养,注射小剂量链脲佐菌素(STZ)(35 mg/kg),同时用物理刺激方法,建立痰瘀互结型MSIR大鼠模型。造模成功后将大鼠随机分为模型组,柴苓合剂低、中、高剂量组,西药组进行干预。给药各组分别进行柴苓合剂、吡格列酮干预治疗3周,空白组、模型组给予等体积的蒸馏水灌服。生化检测大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);ELISA法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western Blot检测肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达;HE染色切片,光学显微镜观察用药前后肝细胞损伤、肝细胞坏死、脂质堆积、炎症细胞浸润等情况。结果(1)糖代谢指标水平。与空白组相比,模型组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平均降低(P<0.01);与西药组比较,柴苓合剂高剂量组FBG、FINS、HOMA-IR水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组比较,柴苓合剂高、中剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组比较,柴苓合剂高剂量组及西药组FBG、FINS、HOMA-IR水平降低(P<0.01)。(2)脂代谢指标水平。与空白组相比,模型组大鼠甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组TG、CHO水平均降低(P<0.01);与西药组相比,柴苓合剂中、高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.05,P<0.01),柴苓合剂低剂量组TG、CHO水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组相比,柴苓合剂中、高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组相比,柴苓合剂高剂量组TG、CHO水平均降低(P<0.01)。(3)TNF-α、IL-6水平。与空白组相比,模型组大鼠TNF-α、IL-6水平均升高(P<0.01);与模型组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01);与西药组相比,柴苓合剂低、中、高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂低剂量组相比,柴苓合剂中、高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.05,P<0.01);与柴苓合剂中剂量组相比,柴苓合剂高剂量组TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.01)。(4)肝组织TRAF2/JNK/AP-1信号通路蛋白表达。与空白组相比,模型组大鼠肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达均上调(P<0.01);与模型组比较,柴苓合剂低、中、高剂量组及西药组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01);与西药组比较,柴苓合剂高剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.01),柴苓合剂低、中剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与柴苓合剂低剂量组比较,柴苓合剂高剂量组肝组织TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.01),柴苓合剂中剂量组肝组织AP-1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),TRAF2、JNK蛋白表达水平均降低(P<0.01);与柴苓合剂中剂量组比较,柴苓合剂高剂量组TRAF2、JNK、AP-1蛋白表达水平均降低(P<0.05,P<0.01)。结论柴苓合剂高剂量能显著改善痰瘀互结MS-IR大鼠糖代谢、脂代谢和炎症因子,其作用机制可能是柴苓合剂通过调控TRAF2蛋白作用于JNK蛋白,引起它的下游反应,又通过JNK的磷酸化作用于AP-1,释放炎症因子,从而TRAF2作用于JNK,然后磷酸化于AP-1使炎症因子降低有关。

绿原酸联合连翘苷调控细胞因子风暴的网络药理分析及基于TLR4/TRAF6/PI3KC3通路的协同抗炎作用

目的基于网络药理学和体外实验探究绿原酸联合连翘苷调控细胞因子风暴的机制。方法利用Swiss Target Prediction、PharmMapper、SEA和TCMSP数据库预测绿原酸和连翘苷的靶点,在GeneCards、OMIM、DRUGBANK和DisGeNET数据库获取细胞因子风暴的靶点,筛选交集靶点绘制Venn图,以STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络,采用DAVID数据库进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。以脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞构建细胞因子风暴模型;采用细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测巨噬细胞存活率;采用Griess法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)含量;以酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶-2(COX-2)的水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TNF受体相关因子(TRAF4)、TNF受体相关因子6(TRAF6)、磷酸肌醇-3-激酶3(PIK3C3)蛋白表达。结果网络药理分析获得绿原酸联合连翘苷治疗细胞因子风暴的8个核心网络靶点[丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、白蛋白(ALB)、低氧诱导因子1α(HIF1A)、IL-6、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、酪氨酸激酶(SRC)、Toll样受体4(TLR4)];富集关键通路包括PI3K/AKT信号通路等。体外实验结果显示,与对照组比较,模型组中NO、TNF-α、IL-6的释放量和iNOS、COX-2蛋白表达量均显著升高(P<0.001)。与模型组比较,给药后NO、TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2的水平均显著降低(P<0.001)。与单药给药组比较,绿原酸和连翘苷(1∶1)联合用药组炎症指标下降更明显(P<0.001)。与模型组比较,给药组TLR4、TRAF6、PI3K3C的蛋白表达和PI3K3C的磷酸化水平显著下降。结论绿原酸联合连翘苷能协同抑制促炎细胞因子的表达,调控细胞因子风暴,可能通过TLR4/TRAF6/PI3K3C信号通路实现。

circEIF6调节miR-129-5p/TRAF6轴对胰腺癌细胞增殖、凋亡和吉西他滨敏感性的影响

目的:探讨环状RNA真核起始因子6(circEIF6)调节miR-129-5p/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)轴对胰腺癌细胞增殖、凋亡和吉西他滨(GEM)敏感性的影响。方法:将胰腺癌细胞SW1990分为对照组(正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-circEIF6组(转染si-circEIF6)、si-circEIF6+inhibitor-NC组(si-circEIF6和inhibitor-NC共转染)、si-circEIF6+miR-129-5p inhibitor组(si-circEIF6和miR-129-5p inhibitor共转染);RT-qPCR检测circEIF6、miR-129-5p的表达水平;MTT法检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测TRAF6、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达;MTT法检测不同浓度GEM对细胞增殖抑制率的影响;双荧光素酶报告基因实验分别验证circEIF6和miR-129-5p、miR-129-5p和TRAF6的关系。结果:与对照组、si-NC组比较,si-circEIF6组circEIF6表达、OD490值、TRAF6、PCNA蛋白表达降低,miR-129-5p表达、细胞凋亡率、Bax、caspase-3蛋白表达升高;与si-circEIF6组、si-circEIF6+inhibitor-NC组比较,si-circEIF6+miR-129-5p inhibitor组OD490值、TRAF6、PCNA蛋白表达升高,miR-129-5p表达、细胞凋亡率、Bax、caspase-3蛋白表达降低;细胞增殖抑制率在GEM处理下以剂量依赖性的方式显著增加;与对照组比较,GEM处理下细胞的增殖抑制率、凋亡率显著升高,敲低circEIF6可提高GEM处理下细胞的增殖抑制率、凋亡率,而miR-129-5p inhibitor可减弱敲低circEIF6发挥的上述作用;circEIF6靶向负调控miR-129-5p的表达,miR-129-5p靶向负调控TRAF6的表达;双荧光素酶报告实验证实miR-129-5p与circEIF6和TRAF6存在靶向关系。结论:敲低circEIF6可能通过靶向miR-129-5p下调TRAF6表达,进而抑制胰腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡、提高胰腺癌细胞对GEM的敏感性。

ALKBH5通过TRAF1/NF-κB通路减轻脓毒症心肌损伤的机制

目的探讨ALKBH5减轻脓毒症心肌损伤(SIMD)的分子机制。方法采用逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)的方法检测50例SIMD患者及50例健康人血液中ALKBH5和TRAF1表达水平,并通过Pearson分析两者表达水平的相关性;细胞体外实验中,根据不同的处理方式(过表达TARF1和干扰ALKBH5表达)将心肌细胞H9C2分为7组,通过CCK8、免疫吸附实验(ELISA)、Western blot等实验方法研究ALKBH5靶向TRAF1调控脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的分子机制;大鼠体内实验中,根据处理方式不同(过表达TARF1和干扰ALKBH5),将LPS诱导的大鼠分为6组,通过比色法、ELISA、Western blot、HE染色、免疫组化等实验方法进一步研究ALKBH5靶向TRAF1通过NF-κB通路减轻心肌细胞损伤的作用机制。结果ALKBH5和TRAF1在SIMD患者中表达水平下调,且Pearson分析显示两者呈正相关(P<0.001);细胞体外实验表明,过表达TRAF1促进细胞的增殖,抑制炎症因子和NF-κB通路相关蛋白的表达,而敲低ALKBH5得到了相反的结果的;大鼠体内实验结果显示,敲低ALKBH5促进心肌细胞的损伤、炎症因子和NF-κB相关通路蛋白表达以及NF-κB p65蛋白的核易位,而过表达TRAF1得到了相反的结果。结论ALKBH5通过减少TRAF1的甲基化增加TRAF1的稳定性,从而抑制NF-κB通路,进而减轻SIMD。

TRAF4和Eg5在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨TRAF4和Eg5在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法收集65例行手术治疗的卵巢癌患者术后石蜡包埋组织标本,并选取同期行手术治疗的36例卵巢上皮性良性病变肿瘤组织和36例因子宫肌瘤行全子宫及附件切除术的正常卵巢组织。采用免疫组化法检测组织中TRAF4和Eg5的阳性表达情况,实时荧光定量PCR法检测TRAF4和Eg5 mRNA的表达,Person相关性分析TRAF4和Eg5水平的相关性,通过绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析TRAF4和Eg5水平对卵巢癌的诊断效能,Kaplan-Meier曲线分析卵巢癌患者的生存情况。结果卵巢癌组织中TRAF4和Eg5的阳性表达率、TRAF4和Eg5 mRNA明显高于良性病变组织和正常卵巢组织(P<0.001);有淋巴结转移者TRAF4和Eg5 mRNA水平明显高于无淋巴结转移者(P<0.001),FIGO分期中Ⅲ~Ⅳ期TRAF4和Eg5 mRNA水平明显高于Ⅲ~Ⅳ期(P<0.001),浸润程度T3-T4期中TRAF4和Eg5 mRNA水平显著高于T1-T2期(P<0.001);TRAF4和Eg5水平呈正相关性(γ=0.326,P<0.001);TRAF4的ROC曲线面积为0.837(95%CI:0.765~0.908,P<0.001),截断值为1.36时,灵敏度为73.85%,特异度为81.54%;Eg5的ROC曲线面积为0.913(95%CI:0.864~0.961,P<0.001),截断值为1.48时,灵敏度为87.69%,特异度为81.54;TRAF4高表达组5年总生存率为47.06%,明显低于TRAF4低表达组(67.74%)(P<0.05);Eg5高表达组5年总生存率为42.86%,明显低于Eg5低表达组(73.33%)(P<0.05)。结论TRAF4和Eg5在卵巢癌中呈高表达,与淋巴结转移、FIGO分期和浸润程度相关,TRAF4和Eg5的表达检测对卵巢癌的早期诊断和预后具有一定的诊断价值。

Legumain/TRAF6通路在肾脏缺血-再灌注损伤中的作用研究

目的本研究旨在探讨Legumain/TRAF6通路在肾脏缺血-再灌注损伤中的作用机制。方法将50只SPF级C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只,A组:假手术组,B组:模型组,C组:Legumain低表达,D组:Legumain低表达+TRAF6过表达组,E组:Legumain低表达+TRAF6低表达组,再灌注24 h时处死各组小鼠。ELISA测定小鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、肾损伤分子1(KIM-1)含量。TUNEL检测试剂盒检测各组小鼠肾组织细胞凋亡水平,Western blot和RT-PCR法检测Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达水平。结果与A组相比,B组SCr、BUN、LDH、MDA、Kim-1水平、肾组织细胞凋亡率、Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达水平均升高(P<0.05),与B组相比,C组逆转上述五种标志物、细胞凋亡率、Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05),与C组相比,D组逆转了上述五种标志物、细胞凋亡率、Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达的降低,呈现升高趋势(P<0.05),而E组上述五种标志物、细胞凋亡率、Legumain、TRAF6蛋白及mRNA表达均继续降低(P<0.05)。结论Legumain/TRAF6通路参与肾脏缺血-再灌注损伤,抑制Legumain表达可通过TRAF6减轻肾脏缺血-再灌注损伤。

TRAF4促进肿瘤发生发展的研究进展

肿瘤坏死因子受体相关因子4(tumor necrosis factor receptor-associated factor 4,TRAF4)是TRAFs(tumor necrosis factor receptor-associated factors)蛋白家族的成员之一,其作为信号转导的接头分子,具有E3泛素连接酶活性,可激活多种下游信号通路,在神经发生与胚胎发育、免疫调节与炎症反应、氧化损伤及代谢等多种生理过程中发挥着重要的调控作用。TRAF4在多种肿瘤中异常高表达,并调控肿瘤的发生发展。本文根据TRAF4的生理和病理调控功能,对TRAF4与肿瘤发生和发展的关系进行综述,为该基因在肿瘤治疗中的应用提供参考。

牛蒡子苷元抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响

目的研究牛蒡子苷元抑制Toll样受体4(TLR4)/肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF6)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对哮喘模型大鼠气道重塑和Th1/Th2免疫平衡的影响。方法构建急性哮喘大鼠模型,随机分为5组(每组12只模型大鼠):模型组、牛蒡子苷元低、高剂量组、脂多糖(LPS,TLR4激活剂)组、牛蒡子苷元+LPS组,以12只Wistar正常大鼠作为对照组。分组处理后,观察各组大鼠哮喘症状并做评分、分类计数各组大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、检测各组大鼠肺组织病理变化、血清IgE水平、BALF和血清中白细胞介素(IL)-4、干扰素γ(IFN-γ)水平、IFN-γ/IL-4及肺组织TLR4/TRAF6/NF-κB通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肺组织产生严重病理损伤,哮喘症状评分、WAt/Pbm、WAm/Pbm、BALF中巨噬细胞及淋巴细胞计数、血清IgE水平、BALF与血清中IL-4水平、肺组织TLR4、TRAF6表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65升高(P<0.05),BALF与血清中Th1型细胞因子IFN-γ水平、IFN-γ/IL-4降低(P<0.05);与模型组相比,各牛蒡子苷元处理组中模型鼠的上述改变均被扭转,且高剂量牛蒡子苷元作用更强;LPS组大鼠各指标变化与牛蒡子苷元处理组相反,另外LPS可逆转高剂量牛蒡子苷元对大鼠各指标的作用。结论牛蒡子苷元可通过抑制TLR4/TRAF6/NF-κB信号激活而阻止哮喘大鼠气道炎症,促使Th1/Th2免疫平衡向Th1转移,改善大鼠气道重塑和肺损伤。

血清MCP-1、TRAF-6水平在脓毒症严重程度和急性肾损伤评估的作用

目的探讨血清单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)水平在脓毒症严重程度和急性肾损伤评估中的作用。方法回顾性分析2021年6月至2022年6月在新疆维吾尔自治区人民医院重症医学科接受治疗的110例脓毒症患者的病例资料,依据脓毒症相关急性肾损伤发生情况分为发生组(50例)、未发生组(60例)。统计分析两组患者基线资料、血清MCP-1、TRAF-6水平,并分析脓毒症患者血清MCP-1、TRAF-6水平与序贯多器官功能障碍(SOFA)评分、急性生理和慢性健康Ⅱ(APACHEⅡ)评分的相关性,多因素Logistic回归分析脓毒症相关急性肾损伤影响因素。结果110例患者中,脓毒症相关急性肾损伤发生50例,未发生60例,发生率为45.45%。发生组患者的高血压、肺部感染比例均高于未发生组(P<0.05),SOFA评分、APACHEⅡ评分均高于未发生组(P<0.05),氧合指数低于未发生组(P<0.05),肾小球滤过率(eGFR)、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平均高于未发生组(P<0.05),动脉血乳酸水平高于未发生组(P<0.05),但两组患者的性别、年龄、糖尿病比例的差异无统计学意义(P>0.05)。发生组患者的血清MCP-1、TRAF-6水平均高于未发生组(P<0.05)。脓毒症患者血清MCP-1、TRAF-6水平与SOFA评分、APACHEⅡ评分均呈显著的正相关关系(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,脓毒症相关急性肾损伤影响因素包括高血压、肺部感染、SOFA评分、APACHEⅡ评分、肾小球滤过率(eGFR)、动脉血乳酸、MCP-1、TRAF-6(P<0.05),不包括氧合指数、尿素氮(BUN)、SCr(P>0.05)。结论血清MCP-1、TRAF-6水平和脓毒症严重程度和关系密切,可作为急性肾损伤的诊断参考指标。

异甘草素抑制RANKL/RANK/TRAF6信号通路对骨质疏松大鼠成骨细胞分化的影响

目的探究异甘草素对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞分化的影响是否与调控核因子-κB受体活化体配体(RANKL)/核因子-κB受体活化体(RANK)/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)信号通路有关。方法采用去势法建立绝经后OP大鼠模型,造模2周后将大鼠随机分为模型组、阳性组(戊酸雌二醇0.09 mg/kg)、异甘草素低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(40 mg/kg)剂量组,每组10只,另取10只大鼠作为假手术组。给药结束后采用ELISA法检测大鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)、雌二醇(E_(2))水平;Micro-CT扫描观察骨微结构指标;HE染色观察股骨组织病理学;免疫组化法检测大鼠股骨Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达;Western Blot法检测大鼠股骨RANKL、RANK、TRAF6蛋白表达。结果与模型组比,阳性组与异甘草素各剂量组大鼠骨组织病变明显减轻,可见新生骨小梁;ALP[(107.94±9.83)U/L、(75.27±7.51)U/L、(89.35±9.14)U/L、(106.33±10.02)U/L比(53.79±5.62)U/L]、E_(2)[(27.71±2.67)pg/mL、(18.36±1.82)pg/mL、(23.65±2.28)pg/mL、(27.46±2.71)pg/mL比(14.64±1.59)pg/mL]水平,Tb.Th[(0.36±0.04)mm、(0.23±0.02)mm、(0.28±0.03)mm、(0.36±0.03)mm比(0.12±0.01)mm]、Tb.N[(4.45±0.44)1/mm、(2.67±0.27)1/mm、(3.36±0.34)1/mm、(4.41±0.44)1/mm比(1.51±0.12)1/mm]、BMD[(0.37±0.04)g/cm^(2)、(0.22±0.02)g/cm^(2)、(0.29±0.03)g/cm^(2)、(0.38±0.03)g/cm^(2)比(0.14±0.01)g/cm^(2)]、BV/TV[(11.94±1.23)%、(7.12±0.70)%、(8.49±0.85)%、(11.77±1.16)%比(5.75±0.61)%]以及Runx2表达[(0.84±0.08)、(0.41±0.04)、(0.59±0.06)、(0.82±0.08)比(0.27±0.03)]升高(P<0.05),Tb.Sp[(0.25±0.02)mm、(0.43±0.04)mm、(0.34±0.03)mm、(0.23±0.02)mm比(0.56±0.06)mm]以及RANKL[(0.42±0.04)、(0.86±0.08)、(0.64±0.06)、(0.45±0.04)比(1.09±0.11)]、RANK[(0.39±0.04)、(0.81±0.08)、(0.67±0.06)、(0.41±0.04)比(1.03±0.10)]、TRAF6[(0.47±0.05)、(0.77±0.08)、(0.61±0.06)、(0.49±0.05)比(0.96±0.09)]蛋白表达降低(P<0.05),且异甘草素呈剂量依赖性。结论异甘草素可能通过抑制RANKL/RANK/TRAF6信号通路,促进成骨细胞分化,改善股骨病变,有效发挥对OP的治疗作用。

日本鳗鲡TRAF3基因的克隆及功能研究

为探究鱼类TRAF3在鱼类抗病毒免疫应答中的功能及作用机制,实验利用逆转录PCR克隆获得了日本鳗鲡TRAF3转录本(AjTRAF3),利用生物信息学软件分析了AjTRAF3的结构特征,利用实时荧光定量PCR(qPCR)、双荧光素酶报告系统以及免疫共沉淀等方法对其表达规律、功能及作用机理进行了初步分析。AjTRAF3的开放阅读框长度为1707 bp,编码568个氨基酸。序列结构分析结果显示,AjTRAF3由N端的环结构域2个锌指结构域以及1个螺旋结构域和C端高度保守的TRAF-C(MATH)结构域组成。qPCR结果显示,AjTRAF3在日本鳗鲡各组织中均有表达,脑组织中表达量最高,其次为头肾,心脏中的表达量最低。Poly I:C刺激6 h后,日本鳗鲡脾脏组织中AjTRAF3上调倍数最高,为对照组的15.83倍。迟缓爱德华氏菌感染24 h后,日本鳗鲡脾脏组织中AjTRAF3上调倍数最高,为对照组的31.47倍。此外,本研究构建了AjTRAF3真核表达质粒,发现过表达AjTRAF3能显著上调炎症及抗病毒相关基因的表达,可显著增强AjIFN2、AjIFN4和NF-κB启动子荧光素酶活性。并能显著上调由AjRIG-IN、AjMAVS、AjIRF3诱导的AjIFN2、AjIFN4和NF-κB启动子活性。免疫荧光结果显示,AjTRAF3主要定位于细胞质中,且与AjMAVS存在共定位。免疫共沉淀结果显示,AjTRAF3通过MATH结构域与AjMAVS相互结合,缺失该结构域后,其与AjMAVS的相互作用消失,推测AjTRAF3可通过介导RIG-I/MAVS信号转导途径调控鱼类的抗病毒免疫应答。本研究结果为进一步揭示鱼类TRAF3的生物学功能奠定了基础。

罗非鱼TRAF3基因的表达及功能研究

肿瘤坏死因子受体(TNFR)相关因子3(TRAF3)是多种免疫途径中的关键调控因子。从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)中克隆获得了TRAF3基因,命名为OnTRAF3(GeneBank No.MN258118),该基因包含1个环指结构域、1个锌指结构域、1个卷曲螺旋和MATH结构域。多序列比对表明,OnTRAF3与其他已知的TRAF3蛋白具有高度的相似性,尤其是MATH结构域。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析显示,OnTRAF3在各组织中广泛分布,且在脑、皮肤、肠和鳃中表达量较高。在无乳链球菌诱导后,多个组织中的OnTRAF3表达量出现了不同程度的上调,说明OnTRAF3参与了罗非鱼的抗菌免疫应答。亚细胞定位实验显示,OnTRAF3分布在HEK293的细胞质和细胞核中。此外,荧光素酶报告基因实验结果显示,野生型(WT)OnTRAF3可显著激活NF-κB信号,而coiled-coil和MATH结构域缺失后,依然能够显著激活NF-κB活性,而RING和Zinc缺失后,该激活作用则明显减弱,表明RING和Zinc结构域是OnTRAF3在免疫信号通路中行使功能的关键结构域。研究为探索TRAF3在罗非鱼免疫应答中的功能提供了重要的基础。

天麻素经IRE1α/TRAF2/NF-κB通路调控大鼠急性心肌梗死诱导的炎性反应及机制研究

目的探讨天麻素对大鼠急性心肌梗死(AMI)诱导的炎性反应的影响,并分析其作用机制。方法50只SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、模型(AMI)组、天麻素低剂量(L-GAD)组、天麻素高剂量(H-GAD)组、卡托普利(CAP)组,每组10只。采用超声心动图检测大鼠心功能,TTC染色评估大鼠心肌梗死面积比,HE染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化,ELISA法和qRT-PCR法分别检测大鼠血清及心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量及mRNA表达,Western blot法检测大鼠心肌组织中肌醇依赖性激酶1α(IRE1α)/肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)/核因子(NF)-κB通路蛋白表达。结果与Sham组比较,AMI组大鼠心肌组织受损,存在明显心肌梗死,LVEF降低,LVDs和LVDd升高,血清和心肌组织中TNF-α、IL-6、MCP-1水平及mRNA表达升高,心肌组织中TRAF2蛋白表达量、p-IRE1α/IRE1α和p-p65/p65比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与AMI组比较,L-GAD、H-GAD组和CAP组大鼠心肌组织损伤减轻,心肌梗死面积比减小,LVEF升高,LVDs和LVDd降低,血清和心肌组织中TNF-α、IL-6、MCP-1水平及mRNA表达降低,心肌组织中TRAF2蛋白表达量、p-IRE1α/IRE1α和p-p65/p65比值下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论天麻素可通过调控IRE1α/TRAF2/NF-κB通路减轻AMI大鼠心肌组织损伤及心肌梗死面积,改善大鼠心功能,抑制炎性反应。

安肠汤通过TRAF6/IRAK1/NF-κB信号通路对溃疡性结肠炎大鼠的抑制作用研究

目的:从TRAF6/IRAK1/NF-κB信号通路角度观察安肠汤对TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的作用及机制。方法:选择60只实验大鼠,除空白组10只外,其余各组均采用2,4,6-三硝基苯磺酸(2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid sol,TNBS)/乙醇灌肠法建立UC大鼠模型,造模成功大鼠分为模型组,美沙拉嗪组,安肠汤低、中、高剂量组,每组10只。空白组、模型组灌胃生理盐水,美沙拉嗪组采用美沙拉嗪混悬液灌胃,安肠汤各剂量组给予对应剂量安肠汤灌胃。给药14天后处死各组大鼠。观察各组大鼠结肠病理改变;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)水平;Western blot法检测结肠组织中TNF受体关联因子6重组蛋白(recombinant tnf receptor associated factor 6,TRAF6)、白细胞介素1受体相关激酶(recombinant interleukin 1receptor associated kinase 1,IRAK1)、磷酸化细胞核因子NF-κB抗体(phosphorylated nuclear factor NF-κB antibody,p-NF-κB)、核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)蛋白的表达;通过定量聚合酶链反应测定大鼠结肠组织中TRAF6、IRAK1、NF-κB mRNA的相对表达量。结果:与空白组比较,模型组结肠黏膜病理受损严重,血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著升高,结肠组织中TRAF6、IRAK1、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达上调(P<0.05)。与模型组相比,安肠汤各剂量组和美沙拉嗪组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著降低(P<0.05);结肠组织中TRAF6、IRAK1、p-NF-κB、NF-κB蛋白表达下调(P<0.05)。结论:安肠汤对TNBS诱导的UC大鼠有治疗作用,其作用可能与其调节TRAF6/IRAK1/NF-κB通路及相关炎症因子,从而减轻肠道炎症反应,缓解肠黏膜损伤有关。

日本鳗鲡TRAF3基因的克隆、表达及亚细胞定位分析

肿瘤坏死因子受体(TNFR)相关因子3(TRAF3)是激活NF-κB、I型IFN信号通路的重要调节因子。克隆了日本鳗鲡TRAF 3基因全长cDNA序列,命名为AjTRAF 3,可编码568个氨基酸,具有保守的TRAF结构域(MATH结构域)、锌指(ZF)结构域和环指结构域(RING domain)。系统发育树分析表明AjTRAF3与其他鱼类TRAF3聚为一支,而哺乳类、鸟类、两栖类分别聚为一支。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示:天然状态下日本鳗鲡各组织均检测到有AjTRAF 3基因的表达,其中肝脏表达量最高;LPS、Poly I:C、嗜水气单胞菌免疫注射日本鳗鲡后,能引起肝脏、脾脏和肾脏中AjTRAF 3基因的表达水平显著提高;日本鳗鲡肝脏细胞经不同病原相关分子模式LPS、Poly I:C、CpG、PGN和不同浓度嗜水气单胞菌感染刺激后,其AjTRAF 3基因的表达水平均显著升高。亚细胞定位研究显示天然状态下Aj TRAF3蛋白在细胞质中聚集呈散点状分布,经LPS和Poly I:C刺激后,Aj TRAF3蛋白分子可进入细胞核且呈散点状分布。以上结果表明AjTRAF 3在日本鳗鲡抗病毒、细菌免疫应答反应中发挥重要作用。

circRASA2靶向miR-543/TRAF6轴对LPS诱导的牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响

目的:探讨circRASA2在牙周炎中的可能作用及其潜在调控机制。方法:采用脂多糖(LPS)诱导牙周膜细胞(PDLCs),建立牙周炎细胞模型。CCK-8实验检测细胞增殖活性,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western印迹法检测细胞中成骨分化相关蛋白表达。分别利用数据库circinteractome和starBase预测circRASA2的靶miRNA及下游靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验验证目的基因之间的靶向关系。采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计分析。结果:circRASA2在LPS处理的PDLCs细胞中高表达;LPS诱导PDLCs细胞增殖活力、迁移能力和成骨分化能力降低,而敲低circRASA2能促进LPS处理下PDLCs的增殖、迁移和成骨分化能力。circRASA2靶向并负调控miR-543的表达,过表达miR-543能促进LPS处理下PDLCs的增殖、迁移和成骨分化能力。TRAF6是miR-543的下游靶基因,敲低circRASA2可通过miR-543的海绵作用,下调TRAF6的表达。过表达TRAF6能逆转circRASA2敲低对PDLCs增殖、迁移和成骨分化能力的促进作用。结论:circRASA2通过miR-543/TRAF6轴在体外加速牙周炎的病理进程,通过靶向降低circRASA2的表达,可能改善牙周炎症状。