TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及结合力分析

目的 寻找并鉴定TRAG 3来源的HLA A2 .1限制性CTL表位 ,为临床开展基于TRAG 3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法 应用超基序和量化基序方案预测TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位 ;采用标准Fmoc方案合成侯选表位 ,RP HPLC纯化、分析多肽 ,质谱鉴定各肽 ;最后 ,用T2细胞株测定各肽与HLA A2 .1分子的结合力。结果 超基序和量化基序方案预测出了 4个侯选表位肽 ;标准Fmoc方案合成的各肽经纯化后纯度大于 90 % ,各肽的相对分子质量与理论值一致 ;在 4个侯选表位肽中 ,ILLRDAGLV( 58- 6 6 ) 九肽与HLA A2 .1的结合力最强。结论 表位预测的结果与结合力分析实验结果一致性较好 ,两者联合应用初步认为ILLRDAGLV( 58- 6 6 ) 九肽为TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位的可能性最大。

肿瘤抗原TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的鉴定

目的 寻找并鉴定TRAG 3来源的HLA A2 .1限制性CTL表位 ,为临床开展基于TRAG 3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法 应用超基序和量化基序方案 ,预测TRAG 3HLA A2 .1限制性CTL表位。用计算机分子模拟的方法 ,对预测表位进行分子模拟。用流式细胞仪分析测定各肽与HLA A2 .1分子的结合力。最后 ,应用HLA A2 .1阳性健康志愿者外周血单个核细胞 (PBMC)对其体外诱导的CTL效应进行鉴定。结果 应用超基序和量化基序方案 ,预测出 4个候选表位肽 ,用计算机分子模拟发现其中只有TRAG 3( 37- 45) 不符合HLA A2 .1限制性CTL表位的特点。在上述 4个九肽中 ,TRAG 3( 58- 6 6 ) 与HLA A2 .1分子的结合力最高。在进一步的CTL诱导实验中 ,发现TRAG 3( 58- 6 6 ) 能够诱导健康志愿者PBMC产生特异性CTL。结论 表位预测、计算机分子模拟、结合力分析和体外CTL诱导实验的一致性较好。 4种方法一致认为 ,TRAG 3( 58- 6 6 ) (ILLRDA GLV)为HLA A2 .1限制性CTL表位。该表位肽可望用于基于TRAG

非小细胞肺癌内TRAG-3抗原的表达及其临床意义

目的 检测非小细胞肺癌内肿瘤抗原TRAG 3的表达情况 ,分析TRAG 3表达与术前新辅助化疗及肿瘤分期的关系。方法 用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)和免疫组化的方法检测了共 48例非小细胞肺癌患者的手术切除标本中TRAG 3抗原的表达。结果 正常肺组织和癌旁组织中未见TRAG 3表达 ;48例肺癌标本中 ,共有 2 6例 ( 5 4% )非小细胞肺癌表达TRAG 3抗原 ,其中 2 2例肺腺癌中有 16例 ( 73 % )表达 ,而 2 0例肺鳞癌中有 8例 ( 17% )表达 ,两者差异显著 ;术前化疗对TRAG 3的表达无显著影响 ;TRAG 3抗原的表达率与肿瘤的分期无关。结论 非小细胞肺癌内有较高比例的TRAG 3抗原表达 ;TRAG 3抗原在非小细胞肺癌内的表达与术前化疗及肿瘤分期无关。

5-氮-2′-脱氧胞嘧啶诱导肺腺癌A549细胞株TRAG-3肿瘤抗原表达

目的 探讨 5 氮 2′ 脱氧胞嘧啶 (DAC)对肺腺癌A5 4 9细胞株TRAG 3肿瘤抗原表达的影响。方法 采用逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)及免疫组化的方法。结果 RT PCR和免疫组化方法均显示 :正常情况下 ,肺腺癌A5 4 9细胞内不表达肿瘤相关抗原TRAG 3;5 氮 2′ 脱氧胞嘧啶诱导 2 4h后 ,A5 4 9细胞内即可检测到TRAG 3mRNA和蛋白表达 ,直至检测的第 7天仍然有TRAG 3表达 ;TRAG 3蛋白表达位于细胞胞浆内。结论 5 氮 2′ 脱氧胞嘧啶可用于诱导肺癌细胞表达TRAG 3。

泰素耐药相关基因-3细胞毒性T淋巴细胞表位负载树突状细胞疫苗的体外免疫效应研究

目的探讨泰素耐药相关基因(TRAG)3来源的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位负载树突状细胞疫苗的体外免疫效应,为临床开展基于TRAG3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法采用标准Fmoc方案合成表位肽,以反相高压液相色谱仪(RPHPLC)纯化、分析多肽,质谱鉴定多肽;从外周血单个核细胞(PBMC)分离培养树突状细胞(DC),应用相差显微镜和电镜从形态学上鉴定DC,采用流式细胞仪(FACS)分析DC表型;将TRAG3CTL表位肽(50μg/ml)负载的DC体外刺激PBMC3周,应用51Cr释放分析检测效应细胞CTL活性,同时应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测效应细胞IFNγ的分泌。结果Fmoc方案合成的表位肽纯度>90%,质谱鉴定的分子量与预计值一致;PBMC分离培养的DC在光镜、电镜下显示了其特殊形态,FACS分析证实其具有成熟DC的表型;经TRAG3表位肽负载的DC在体外能够有效活化特异性抗瘤CTL反应,并能显著刺激效应细胞内IFNγ的释放。结论TRAG3CTL表位肽负载的DC疫苗在体外能够有效激发抗瘤CTL免疫反应,可开展进一步的临床实验。