肿瘤细胞内特异表达TRAIL载体的构建及其在喉癌细胞株Hepa2中的表达

目的:克隆人可溶性TRAIL(sTRAIL)基因并构建肿瘤细胞特异性真核表达载体,为肿瘤基因治疗的靶向性奠定实验基础.方法:提取人外周血淋巴细胞总RNA,采用RTPCR扩增含有IL2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区的融合基因,克隆入真核表达载体pGL3181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游,构建可分泌表达TRAIL基因的真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL.用WesternBlotting鉴定喉癌细胞株Hepa2中表达产物.结果:RTPCR扩增得到了613bp的cDNA片段.经酶切及测序鉴定,与GenBank中报道的IL2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区cDNA序列完全一致,成功构建了肿瘤特异性高效分泌表达可溶性人TRAIL的重组真核表达载体pGL3181hTERT/TRAIL.WesternBlotting结果显示,获得的瞬时转染TRAIL在喉癌Hepa2肿瘤细胞中能有效表达.结论:重组真核表达载体pGL3/TRAIL的成功构建,为肿瘤基因治疗的靶向性提供了可行的理想工具.

肿瘤靶向性人可溶性TRAIL载体的构建及其在鼻咽癌细胞株CNE-2的表达

目的克隆人可溶性TRAIL(sTRAIL)基因并构建肿瘤细胞特异性真核表达载体,为鼻咽癌基因治疗的靶向性奠定实验基础。方法提取人外周血淋巴细胞总RNA,采用RT-PCR扩增含有IL-2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区的融合基因,克隆入真核表达载体pGL3-181hTERT肿瘤特异性端粒酶启动子的下游,构建可分泌表达TRAIL基因的真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL。用Western blot鉴定鼻咽癌细胞株CNE-2中表达产物。结果RT-PCR扩增得到了613 bp的cDNA片断。经酶切及测序鉴定,与GenBank中报道的IL-2信号肽和TRAIL凋亡诱导功能区cDNA序列完全一致,成功构建了肿瘤特异性高效分泌表达可溶性人TRAIL的重组真核表达载体pGL3-181hTERT/TRAIL。Western blot结果显示,获得的瞬时转染TRAIL在鼻咽癌CNE-2肿瘤细胞中能有效表达。结论重组真核表达载体pGL3/TRAIL的成功构建,为鼻咽癌基因治疗的靶向性提供了可能性。

以银杏古树为节点的环渤海地区国家森林步道建设构想

银杏古树是中国历史文化的重要标识,以银杏古树作为节点建设森林步道可能具有重要的生态、经济和文化意义。文中以环渤海地区为研究对象,调查区域内银杏古树128处161株,评价其区域适宜性、旅游适宜性、建设适宜性,认为总体上银杏古树适宜作为环渤海森林步道的节点。从综合评价来看,适宜作为步道节点的银杏古树,共计100处117株,其中32株古树重点推荐作为途经节点。初步设计了以银杏古树为节点的环渤海地区森林步道选线方案,由6条线路构成,即大连—丹东—迁安线、北京北线、北京南线、易县—肥城线、肥城—淄博—海阳线、肥城—莒县—荣成线,途经银杏古树79处96株,总里程约为7352 km。在此基础上,根据环渤海森林步道以银杏古树为节点这一特色,提出优化建设机制、加强银杏古树原真性保护、加强步道生态保护、强化资金保障、推进步道使用、加强代表性景观的宣传等建议。

TRAIL分子胞外区基因工程蛋白的制备与鉴定

目的 制备人TRAIL配体胞外区基因工程蛋白。方法 应用RT PCR技术从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中扩增TRAIL配体胞外区cDNA ,克隆入PCR2 .1 载体 ,测序验证后用基因重组法构建了TRAIL配体胞外区和组氨酸盒的原核表达质粒pQE hTRAIL。将重组质粒转入大肠杆菌M15中表达 ,经 1mmol LIPTG在 37℃条件下诱导 4h ,亲和层析柱纯化。用SDS -PAGE电泳和Westernblot鉴定表达产物。结果 所表达融合蛋白为人TRAIL配体胞外区分子 ,分子量 30kD。表达量约为 2mg ml。结论 人TRAIL配体胞外区在大肠杆菌中得到良好表达 ,为深入研究TRAIL配体分子在肿瘤与自身免疫病中的可能应用提供了材料。

hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对HeLa裸鼠移植瘤生长抑制的作用

目的：探讨hTERT启动子驱动的TRAIL联合放化疗对宫颈癌HeLa裸鼠皮下移植瘤生长抑制的作用.方法：将含有hTERT启动子的TRAIL基因载体转染宫颈癌细胞HeLa,检测稳定转染细胞中GFP/TRAIL的表达;实验裸鼠分为基因组,化疗组,放疗组,综合组（基因＋放化疗）,对照组,每组5只,未转染HeLa组为对照组,不作任何处理;将稳定转染基因载体及未转染的HeLa细胞种植于裸鼠背部皮下,联合放化疗,来观察移植瘤成瘤情况,移植瘤的体积、质量以及质量抑制率的变化.结果：转染hTERT-TRAIL细胞中GFP/TRAIL（绿色荧光蛋白）表达率高于对照组,有统计学意义（P〈0.01）;各组裸鼠在接种细胞第5~7日全部长出肿瘤小结节,结节出现的时间差异无统计学意义（P〉0.05）;转染hTERT-TRAIL细胞与对照组HeLa细胞裸鼠的移植瘤质量相比差异有统计学意义（P〈0.05）;hTERT-TRAIL细胞在裸鼠体内所形成的移植瘤生长较慢,4wk后肿瘤质量抑制率为43.08%,联合放化疗后肿瘤质量抑制率为61.63%,有统计学意义（P〈0.01）.结论：hTERT启动子驱动的TRAIL对人宫颈癌裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,联合放化疗能抑制裸鼠移植瘤的生长.基因治疗联合放化疗等多途径综合治疗为以后的肿瘤研究和临床治疗提供思路.

TRAIL胞外段基因克隆及其表达与纯化

目的:克隆TNF相关的诱导凋亡配体胞膜外段基因（the extracellular regionof the human TRAIL cDNA,TPAILex）,构建表达载体并在大肠杆菌DH5α中高效表达有生物学活性的TRAIL蛋白胞膜外段。方法:抗CD3McAb刺激正常人外周血淋巴细胞,用RT-PCR、巢式-PCR方法从活化的淋巴细胞中获得人TRAIL基因及其胞膜外段oDNA,并克隆到pGEM-T Easy载体中,DNA测序鉴定。将TRAIL的胞膜外段基因插入表达载体pGEX-2T,构建重组表达质粒pGEX/TRAILex,用IPTC诱导表达TRAIL蛋白的胞膜外段,GST-Agarose4B层析柱纯化 GST-TRAILex融合蛋白,Western-blot鉴定纯化产物。结果:抗CD3 McAb能诱导正常人外周血单个核细胞TRAIL的高表达,成功地克隆了TRAIL胞膜外段基因,构建了重组表达载体pGEX/TRAILex,IPTG诱导后得到高效表达的TRAIL蛋白胞膜外段,经12％SDS-PAGE分析,可观察到一分子量和理论值相符（约54kD）的诱导表达带。Kodak软件分析表面GST-TRAIL胞膜外段融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的28％,进一步分析证实TRAIL蛋白的胞膜外段主要以可溶性的形式表达,用GST-Agarose4B层析柱纯化超声破菌后的上清,每升细菌培养液可得到9.8mg纯度的95％以上的GST-Tex。Western-blot结果证实54kD的表达带可与鼠抗TRAIL McAb起特异性反应。结?

hTERT启动子调控的TRAIL基因载体的构建及表达

目的:构建hTERT启动子调控的TRAIL基因载体,探讨hTERT启动子调控的转基因表达。方法:PCR法扩增膜结合型TRAIL基因,回收产物与带有hTERT启动子的载体连接,构建重组载体ph-TERT-TRAIL;瞬时转染乳腺癌细胞系MCF-7/ADR;采用RT-PCR法检测外源基因TRAILmRNA水平的表达,流式细胞术(FCM)检测蛋白水平的表达。结果:重组载体phTERT-TRAIL经PCR、酶切出现相应长度的片段;测序结果连入TRAIL基因;目的基因的序列分析结果与Genebank中的数据高度同源;RT-PCR显示细胞中外源基因TRAIL在mRNA水平明显表达;FCM显示转染了重组载体phTERT-TRAIL的细胞较未转染带有TRAIL基因载体的细胞TRAIL蛋白表达水平上调。结论:成功构建重组载体ph-TERT-TRAIL,hTERT启动子调控的TRAIL基因在乳腺癌细胞系MCF-7/ADR中明显表达。

华东地区(六省一市)跨省步道系统构建研究

为构建优质高效的华东地区跨省步道系统,推动区域体育资源联动发展,运用GIS空间分析法、因子加权叠加法、层次分析法等方法,综合考虑地理条件、自然条件、交通可达性等因素,创建了具有科学性、准确性、直观性的华东地区适宜性步道选线底图,在此基础上,构建出我国华东地区跨省步道系统。研究得出:沿海岸线步道适宜开展休闲观光、垂钓冲浪等特色项目;长江赣江步道沿江风景步道,适宜开展皮划艇、内陆野营、徒步旅行为主的户外项目;京杭大运河-长深高速步道、淮河步道适宜开展以骑行为主徒步游览为辅的户外运动;318国道(华东段)步道沿途风景优美适宜开展以徒步、骑行越野为特色的户外运动;闽江步道位于南部山区适宜开展户外攀岩、登山、皮划艇等运动。

AMMI模型在甘蔗区域试验中的应用

甘蔗品种区域试验中基因型(G)和环境(E)互作现象普遍存在,AMMI模型作为一种分析G×E互作关系的方法,可非常有效地补充现有区域试验分析方法的不足。AMMI模型中双标图和特殊互作效应值Dge的引入,为直观、定量地估计环境对基因型的分辩力及基因型对环境的特殊适应性提供了一种非常有效的手段。通过对2003～2004年度国家甘蔗新品种第四轮区域试验结果进行分析,2条显著的主成分轴共解释了61.47%的互作平方和,品种粤农91-600、福农95-1702、闽糖92-505为高产稳产型,云蔗94-375、粤糖91-1102为高产但不稳产,桂糖95-53、粤糖96-244为稳产较好但产量较低,川引97-1为产量低而不稳。从AMMI双标图及互作效应值可看出高产类型品种中,福农95-1702除广西南宁、云南开远外,具有广泛的适应性,粤糖91-1102则仅对广东湛江、福建福州有特殊适应性,云蔗94-375则仅对云南开远、江西赣州有特殊适应性。

2012—2013年广西甘蔗品种区域试验初报

为筛选适合在广西生态气候区种植的优良甘蔗新品种,以新台糖22号作对照,对13个甘蔗新品系在南宁、柳州、河池、百色、北海、崇左等6个试点进行品种比较试验,并分析了各参试品系的蔗茎产量、蔗糖分和公顷含糖量。结果表明:在新植试验中,柳糖07-95、桂糖05-818、桂糖04-1045等3个新品系综合表现较好,其产量及蔗糖分均显著高于对照;其次是桂糖03-591、桂糖06-533、桂糖04-2603,其蔗茎产量及公顷含糖量均高于对照;桂糖03-66、桂糖03-91、桂糖04-1545的蔗糖分均高于对照,其余品系表现一般。

国家棉花区试新品种的SSR指纹图谱分析

以2009年度参加黄河流域国家棉花区试的57份参试品种为材料,运用筛选确定的22对多态性好、条带清晰的SSR引物对参试品种进行分子标记分析,共检测出145个等位位点,其中106个为多态性位点,平均每对引物4.8个,多态性比率平均达到72.7%,PIC平均值为0.661。利用106个多态性片段构建了这些品种的SSR指纹图谱。遗传聚类结果显示,在相似系数为0.98时,57个区试品种完全区分开;同一地区和同一单位育成的品种在不同程度上聚在一类,说明它们的遗传关系较近。

国家苦荞区试品种产量性能及稳定性分析

用2000～2001年连续两年国家苦荞品种区域试验所选用的7个苦荞品种(品系)在35个试点(2a)的数据资料,应用非参数统计方法——秩次分析法对参试品种产量进行综合分析和评价。结果表明:参试品种间产量性能及稳定性存在显著差异,其中KP9920和九江苦荞是较高产稳定性品种;黔威2号是中产具有平均稳定性品种;镇巴苦荞是较低产稳定性品种;黔威1号是较低产具有平均稳定性品种;昭905和榆6-21是不稳定性品种。

玉米品种区域试验结果的综合分析

利用联合方差分析、品种稳定性分析、聚类分析对2001年国家玉米品种区域试验西南组的产量结果进行综合分析发现:区组、品种、试点、品种与试点互作间的差异均达极显著水平;各品种在不同地区表现不同:参试的10个品种的稳定性均较差;通过聚类分析将10个品种分为四类:第一类:②YA970;第二类:⑧SAU97-3,⑥渝9501,③DH3303,⑤濮9794,①2738,④辽206;第三类:⑨贵吉1号,⑦浚97-1;第四类:⑩农大108。第一、二类与第三、四类间差异极显著,第一类与第二类在α=0 10水平上差异显著,第三类与第四类在α=0 25水平上差异显著。

甘薯品种产量性状的稳定性和适应性分析

利用AMMI模型对2005-2006年江苏省甘薯新品种区域试验结果进行分析，评价品种的稳定性和适应性。结果表明：3个乘积项表达的基因型与环境的交互作用主成分效应均达到极显著水平，分别解释交互作用平方和的50．96％、33．7％和10．65％，可合计共解释95．31％互作平方和。宁11-6、南京J51—11和徐62-4属于高产稳产品种；南京00211属于低产稳产品种；南京99—19属于低产不稳产品种；宁27—5和苏渝303属于高产不稳产品种。根据AMMI双标图及互作效应值，宁13—1和苏渝303有相对广泛的适应性，宁13—1对江苏省农业科学院粮食作物研究所试点有特殊适应性，宁27—5对泰兴市试点有特殊适应性，产量较低的南京99—19对涟水县试点有显著的正向互作效应，表现出特殊适应性。就地点环境而言，泗洪县试点最适宜的品种为苏渝303，徐州中心试点对于各品种有较广泛的适应性。

应用AMMI模型分析烤烟区试品种稳定性

AMMI模型在分析基因型与环境互作效应方面有明显的优势,可定量地描述各品种稳定性差异以及各地点对品种鉴别力的大小。为筛选适应河南省特定生态条件下的优良烤烟新品种,应用AMMI模型对2010年河南省烤烟区域试验4个试点7个参试品种的丰产性及稳产性进行分析。结果表明,所有参试新品种产量均值均高于对照NC89,其中,Y106和H8190具有丰产稳产的特性,Y102产量最高,但稳定性较差;8182丰产性差,稳定性好;8122丰产性较差,稳定性较差;‘优选一号’丰产性差,稳定性较好;对照NC89丰产性差,稳定性一般。

浙江省早籼稻近期区试品种(系)蒸煮品质研究

对水稻区试中多品种(系)、多年、非平衡、无重复分析值的蒸煮品质性状数据,用作者提出的统计方法作了分析。分析结果表明,“八五”期间参试的早籼稻品种(系)蒸煮品质较“七五”参试品种有所改善,高直链淀粉含量的参试品种极显著减少,低直链淀粉含量的参试品种极显著增加;软胶稠度的品种极显著增加,硬胶稠度的品种极显著减少。但多数参试品种胶稠度仍偏硬,综合蒸煮品质不佳。各蒸煮品质性状均以品种效应为主,其次是品种×年份互作效应。蒸煮品质性状的提高,首先应注意品种(系)的主效。各蒸煮品质间有极显著的相关关系,其中直链淀粉与胶稠度的负相关最明显,其次为直链淀粉与糊化温度的负相关。为克服性状相关引起的早籼稻优质育种的难度,应抓好直链淀粉与胶稠度这一主要矛盾并应广泛筛选育种种质资源。

利用变异系数法和欧式距离值法分析四川省小麦区试试点分辨力

为了比较目前四川省小麦区试试点对参试品系的区辨力,本文利用2010～2011年四川小麦区试5个组共计60个参试品系的数据,采用变异系数法和欧式距离法对8个试点的区辨力进行比较分析。研究表明,变异系数法与欧式距离值法整体趋势一致,四川省小麦区试试点分辨力大小顺序是:绵阳>射洪>资中或内江>乐山>宜宾>双流>南充。笔者认为,欧式距离值侧重于基因型与环境互作效应,相对较为准确。

利用SSR标记分析黑龙江水稻区域试验品系的遗传多样性

利用20个表型性状和51个SSR标记分析25份黑龙江省一积温带区域试验品系、20份21世纪推广品种和14份21世纪以前推广品种的的遗传多样性,共检测到92个表型变异和166个SSR等位基因,其中21世纪区试品系表型变异数和SSR等位基因数分别为64,142个(平均2.78个),21世纪推广品种表型变异数和等位基因数分别为78,126个(平均2.47个),21世纪以前推广品种表型变异数和等位基因数分别为82,127个(平均2.49个)。遗传变异主要存在于品种间(94%),群体之间(6%)差异较小。聚类分析将供试材料分为4类,21世纪区试品系形成了独立的类群,其SSR遗传多样性极显著高于21世纪以前和21世纪推广品种,但是黑龙江水稻遗传多样性相对于其他地区仍处于较低水平,应进一步拓宽遗传基础。

浙江省早籼稻区试品种(系)碾磨品质研究

本文对水稻区域试验中多品种（系）、多年、非平衡、无重复分析值的品质性状资料提出相应的统计分析方法，并对早籼稻区试品种（系）碾磨品质作了统计分析．分析结果表明，91—94年期间参试的早籼稻品种（系）其糙米率、精米率较“七五”期间参试的品种（系）有显著提高，金89—1、中选2号、浙733品种（系）的糙米率、精米率都显著或极显著的高于对照品种．三个碾磨品质中整精米率的方差较大，且变异主要来自于品种×年份的交互作用．

2006-2007年广西杂交稻区试回顾及发展商榷

回顾了广西杂交水稻区试历程,通过对2006、2007年广西杂交稻区试结果进行具体分析,肯定成绩,发现问题,并提出对今后发展方向的建议。2年来的区试结果表明,广西杂交水稻区试的参试组合类型配套齐全丰富,在选育组合数量,产量水平及稻米品质方面取得较大进步。但是存在着一些影响育种突破的重要问题。首先,参试组合很难在抗病虫上有所突破。其次,参试组合的综合性状有待进一步提高。今后,杂交水稻育种应扩大遗传基础,加大籼粳稻种质的遗传利用,加强野生稻优异种质的利用,把抗性育种放到主要议事日程,进一步促进杂交水稻综合性状的改良与协调,向超高产稻方向发展。